不同廠家阿莫西林膠囊體外溶出度考察

歐陽百發(fā)，劉春平，，全向陽，王 超

(1.康美藥業(yè)股份有限公司，廣東普寧515300;2.廣東康美藥物研究院有限公司，廣東廣州510006)

阿莫西林(Amoxicillin)為青霉素類廣譜β－內(nèi)酰胺類抗生素，由于具有服用方便、安全性高、療效顯著、不良反應(yīng)少等優(yōu)勢，已為眾多消費者接受。口服的阿莫西林制劑有膠囊劑、片劑、顆粒劑、干混懸劑、分散片、咀嚼片等多種劑型，其中，膠囊劑占了70%以上的市場份額，但本品膠囊劑生產(chǎn)廠家眾多，據(jù)臨床觀察，其療效并不一致，產(chǎn)品質(zhì)量存在差別。在多種pH溶出介質(zhì)中溶出曲線的測定是先進(jìn)國家藥物審評機(jī)構(gòu)評價口服固體制劑內(nèi)在質(zhì)量的一種重要手段［1，2］。因此，筆者參考有關(guān)文獻(xiàn)［1～5］，采用《中國藥典》相關(guān)方法對4個不同廠家阿莫西林膠囊在多介質(zhì)及不同轉(zhuǎn)速條件下進(jìn)行體外溶出度比較研究，以評價阿莫西林膠囊的內(nèi)在質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 UV－2550型紫外可見分光光度計(日本島津公司)，D－800LS型智能溶出儀(天津大學(xué)無線電廠)，BS224S型電子天平(德國賽多利斯股份有限公司)。

1.2 試藥 阿莫西林對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號:130409－201011，含量86.6%);阿莫西林膠囊(A廠，規(guī)格:0.25 g，批號:18773;B廠，規(guī)格:0.25 g，批號: 4110243;C廠，規(guī)格:0.25 g，批號:111214;D廠，康美藥業(yè)提供;規(guī)格:0.25 g，批號:120218－1)。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶出介質(zhì)的選擇

2.1.1 溶解性試驗 在(37±1)℃溫度下，以pH值分別為1、3.7、4.7、5.7、7.5的12.5%磷酸二氫鉀緩沖溶液為溶劑(pH值為1、3.7、4.7的磷酸二氫鉀緩沖溶液用鹽酸調(diào)節(jié)pH至規(guī)定值;pH值為5.7、7.5的磷酸二氫鉀緩沖溶液用NaOH調(diào)節(jié)pH至規(guī)定值)，配制阿莫西林飽和溶液，各飽和溶液再經(jīng)pH值為1的磷酸二氫鉀緩沖溶液適當(dāng)稀釋后，用紫外－可見分光光度法［6］在272 nm波長處測定其吸光度，計算各pH溶劑中阿莫西林的溶解度(見表1)。結(jié)果表明，在pH 1～7.5范圍內(nèi)，阿莫西林單次最大給藥劑量(1.0 g)不能夠完全溶解于不多于250 mL的水中。

表1 阿莫西林pH值－溶解度表

2.1.2 生物藥劑學(xué)(BCS)分類判斷及介質(zhì)選擇 上述溶解性試驗時阿莫西林是低溶解性的，與文獻(xiàn)［7］報道一致，且阿莫西林通透性低，屬于生物藥劑學(xué)分類Ⅳ，即低溶解低通透性藥物。因此，阿莫西林膠囊溶出度比較研究選擇pH 1.2、4.0、6.8和水4個介質(zhì)條件進(jìn)行。

2.2 測定方法的選擇

2.2.1 檢測波長的選擇 取阿莫西林對照品適量，以水溶解稀釋成130 μg·mL－1的溶液，采用紫外－可見分光光度法，于210～350 nm范圍內(nèi)分別進(jìn)行掃描，結(jié)果在272 nm處有最大吸收，與阿莫西林標(biāo)準(zhǔn)［4］規(guī)定一致，因此確定以272 nm為檢測波長。

2.2.2 測定方法的選擇 水介質(zhì)條件下，按照阿莫西林膠囊［6］溶出度檢查方法，轉(zhuǎn)速為100 r·min－1，每批樣品采用12粒進(jìn)行測定。pH 1.2、4.0及6.8條件下，除介質(zhì)外，其他與水介質(zhì)條件下一致。考慮到特殊病人可能腸胃功能較差，另在水介質(zhì)下，轉(zhuǎn)速按50 r·min－1，其他條件與上述水介質(zhì)一致進(jìn)行考察。

2.2.3 pH 1.2、4.0及6.8溶液配制［1］pH 1.2鹽酸溶液配制:取氯化鈉2.0 g，加水適量溶解后，加鹽酸7 mL，再加水稀釋至1 000 mL，搖勻，即得。

pH 4.0醋酸鹽緩沖液配制:取乙酸鈉(CH3COONa· 3H2O)54.4 g，加水適量溶解后，加冰醋酸92 mL，再加水稀釋至1 000 mL，搖勻，即得。

pH 6.8磷酸鹽緩沖液配制:取磷酸二氫鉀1.7 g和無水磷酸氫二鈉1.775 g，加水溶解并定容至1 000 mL，搖勻，即得。

2.3 方法學(xué)驗證

2.3.1 空膠囊殼干擾試驗 取空膠囊殼6粒，照溶出度測定法，依法操作，在272 nm波長處測定吸光度，計算空膠囊殼溶出度校正值分別為1.1%、1.2%、0.9%、1.0%、1.3%及1.1%，平均溶出度校正值為1.1%(＜2%)，因此空膠囊殼對溶出度測定的干擾可忽略不計。

2.3.2 不同介質(zhì)下樣品穩(wěn)定性考察 取阿莫西林膠囊(批號120218－1)內(nèi)容物適量(約相當(dāng)平均裝量)，分別以水、pH 1.2鹽酸鹽溶液、pH 4.0醋酸鹽緩沖液及pH 6.8磷酸鹽緩沖液溶解并定容至1 000 mL量瓶中，過濾，精密移取續(xù)濾液5 mL置20 mL量瓶中，并以各介質(zhì)溶液定容至刻度，搖勻，在272 nm處于各放置時間點測定其吸收度，檢測結(jié)果見表2及表3。結(jié)果表明樣品溶液在水、pH 4.0及6.8介質(zhì)溶中8 h內(nèi)穩(wěn)定;在pH 1.2溶液中很不穩(wěn)定，60 min內(nèi)含量降解11%，120 min內(nèi)降解23%。

2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密稱取阿莫西林對照品23.3 mg，置50 mL容量瓶，加水溶解并稀釋至刻度，分別量取上述溶液2.5、5、7.5、10、15 mL置25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，采用紫外分光光度計于272 nm波長處測定吸收度。以水為空白，所得數(shù)據(jù)進(jìn)行一元線性回歸，得回歸方程:A= 0.003 4C+0.010 9，r=0.999 8。結(jié)果表明阿莫西林在46.6～279.6 μg·mL－1濃度范圍內(nèi)在272 nm波長處的吸收度A值與濃度C呈良好的線性關(guān)系。

表2 阿莫西林穩(wěn)定性考察(水、pH 4.0及pH 6.8介質(zhì))

表3 阿莫西林穩(wěn)定性考察(pH 1.2介質(zhì))

2.3.4 回收率試驗 稱量已知含量的阿莫西林原料(約相當(dāng)于標(biāo)示量的70%、100%、130%)各三份，分別按比例加入處方量輔料，模擬制劑，用水稀釋成每1 mL約含130 μg的溶液。照紫外分光光度法測定在272 nm處的吸收度，計算回收率(表4)，結(jié)果平均回收率為99.5%，RSD為0.39%(n =9)。

表4 溶出回收率實驗結(jié)果

2.3.5 重復(fù)性試驗 取上述溶液(穩(wěn)定性試驗配制)，在272 nm處重復(fù)測定6次，其吸收度分別為0.435 8、0.440 1、0.438 9、0.436 6、0.439 2、0.438 5，平均值為0.438 6，RSD為0.26%(n=6)。結(jié)果表明本測定方法重復(fù)性良好。

2.4 判定方法選擇 采用相似因子法f2［1～3］的值來判斷，當(dāng)f2數(shù)值在50～100范圍認(rèn)為兩條溶出曲線是相似的。

上述公式中n為時間點(n≥3)，Rt是對照樣品溶出平均百分?jǐn)?shù)，Tt是測試樣品溶出平均百分?jǐn)?shù)。如果藥物在15 min內(nèi)溶出達(dá)到85%以上，可以認(rèn)為兩批產(chǎn)品溶出行為是相似的，不需要通過統(tǒng)計學(xué)方法對數(shù)據(jù)分析判定。

2.5 不同介質(zhì)及轉(zhuǎn)速條件下溶出度測定

2.5.1 水介質(zhì)條件下溶出度測定 正常轉(zhuǎn)速條件測定:分別取每批阿莫西林膠囊12粒，照溶出度測定法(《中國藥典》2010年版二部附錄ⅩC第一法)，以水900 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r·min－1，依法操作，分別在5、15、30及45 min時，取溶液約10 mL(取樣后立即補充等量同溫度的溶出介質(zhì))，濾過，精密量取續(xù)濾液6 mL，置25 mL量瓶中，用溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，照紫外－可見分光光度法(《中國藥典》2010年版二部附錄Ⅳ A)在272 nm的波長處測定吸光度;另取阿莫西林膠囊10粒，取內(nèi)容物，混合均勻，精密稱定適量(約相當(dāng)于平均裝量)，按標(biāo)示量加溶出介質(zhì)溶解并稀釋成每1 mL中約含130 μg的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為對照溶液，同法測定，測定結(jié)果見表5。

低轉(zhuǎn)速條件測定:除轉(zhuǎn)速為50 r·min 外，其他與正常轉(zhuǎn)速條件一致，測定結(jié)果見表5。

2.5.2 其他介質(zhì)條件下溶出度測定 介質(zhì)分別選擇配制的pH 1.2、4.0及6.8的溶液，其他條件與水介質(zhì)條件(100 r· min－1)下一致，分別對樣品進(jìn)行測定，測定結(jié)果見表5。

表5 阿莫西林膠囊累積溶出百分率測定結(jié)果()

表5 阿莫西林膠囊累積溶出百分率測定結(jié)果()

介質(zhì)條件 樣品及批號 累積溶出百分率(%) 5 min 15 min 30 min 45 min相似因子f2 A 廠18773 61.7±9.6 84.1±2.5 96.8±1.4 99.8±2.8 /水(100 r·min－1) A廠B廠 4110243 62.9±14.7 82.9±2.4 97.0±1.6 102.9±1.7 92.6 C廠 111214 54.4±19.2 76.0±11.3 94.6±4.6 99.7±2.5 59.4 D廠 120218－1 63.0±10.1 84.2±1.7 98.0±1.1 101.1±1.3 92.2 A廠 18773 49.2±11.5 77.3±3.1 94.4±1.8 99.8±1.8 /水(50 r·min－1) B廠 4110243 53.7±9.7 75.8±2.5 93.5±1.9 99.6±1.6 76.4 C廠 111214 44.4±21.2 70.5±13.8 90.4±3.7 98.5±2.3 63.3 D廠 120218－1 53.3±13.5 79.5±2.2 93.1±1.6 100.0±1.4 76.4 pH 1.2鹽酸鹽溶液A廠 18773 60.3±10.4 82.5±3.5 96.5±0.7 100.5±2.2 / B廠 4110243 62.7±12.3 83.9±2.8 97.0±1.8 98.9±2.2 85.9 C廠 111214 57.4±21.2 76.7±12.4 93.2±1.4 99.0±2.5 68.2 D廠 120218－1 60.5±15.5 85.9±1.8 97.2±0.9 101.0±2.3 82.5 pH 6.8磷酸鹽緩沖液A廠 18773 84.3±7.6 98.6±2.6 93.5±1.2 89.8±1.9 / B廠 4110243 81.7±6.9 102.7±1.9 91.2±1.5 88.7±1.3 / C廠 111214 83.9±9.3 100.2±3.0 93.8±1.8 89.0±1.5 / D廠 120218－1 85.1±7.6 99.5±2.3 92.9±1.1 88.8±1.3 / pH 4.0醋酸鹽緩沖液A廠 18773 59.3±16.7 84.3±2.5 99.4±2.4 100.6±1.8 / B廠 4110243 60.8±11.4 82.8±1.9 98.2±1.7 101.9±2.2 88.1 C廠 111214 53.6±18.4 77.2±7.6 99.5±3.2 99.1±1.9 63.6 D廠 120218－1 64.9±12.6 88.9±2.3 100.5±1.6 99.4±1.8 68.1

2.6 數(shù)據(jù)分析及結(jié)果 經(jīng)市場調(diào)查本品種國內(nèi)無原研進(jìn)口或其他ICH成員國市售樣品，未獲得合適的參比制劑，故挑選依據(jù)中國藥典法測定溶出曲線良好的A廠樣品為參比樣品，其他3個廠家為試驗樣品，進(jìn)行相似因子f2計算及評價，結(jié)果見表5。在pH 1.2條件下，測得樣品在15 min內(nèi)累積溶出度均達(dá)到85%以上，其他介質(zhì)下的相似因子f2值均在50～100的范圍內(nèi)，可以判定4廠家樣品在該條件下的溶出曲線具有相似性。但C廠家產(chǎn)品的溶出行為慢于其他3個廠家，且變異系數(shù)明顯比其他廠家的高。

3 討論

同一藥物在不同的pH條件下的穩(wěn)定性可能是不一樣的，采用多介質(zhì)對產(chǎn)品進(jìn)行溶出度考察時應(yīng)該對每個介質(zhì)下樣品的溶液進(jìn)行穩(wěn)定性考察。本實驗表明阿莫西林膠囊樣品溶液在水、pH 4.0醋酸鹽緩沖液及pH 6.8磷酸鹽緩沖液中8 h內(nèi)穩(wěn)定;在pH 1.2鹽酸鹽溶液中很不穩(wěn)定，60 min內(nèi)含量降解11%，120 min內(nèi)降解23%。因此，對本品在pH 1.2鹽酸鹽溶液介質(zhì)條件下溶出度檢測時，應(yīng)及時處理樣品及上機(jī)檢測，盡量避免因樣品處理時間過長導(dǎo)致的檢測誤差。

考慮到某些患者身體機(jī)能虛弱、胃腸蠕動功能較差等因素影響，在體外多介質(zhì)溶出度考察的同時還應(yīng)該進(jìn)行低轉(zhuǎn)速(比標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)速低)條件下的溶出行為比較，以評價該藥物在特殊人群中可以存在的釋放差異。

雖然上述研究表明不同廠家的溶出行為具有相似性，但臨床觀察反應(yīng)，不同廠家的阿莫西林膠囊療效不一致，質(zhì)量存在差別?？赡苁潜井a(chǎn)品生產(chǎn)廠家眾多，且有0.125、0.25及0.5 g三個規(guī)格，而本試驗僅對4個廠家的0.25 g規(guī)格進(jìn)行試驗，樣品代表性有限。且阿莫西林生物通透性低［7］，屬于生物藥劑學(xué)分類Ⅳ的藥物，這類藥物的體內(nèi)、外釋放相關(guān)性較差，因此，體外溶出行為相似，但體內(nèi)吸收行為可能會有很大差別，需進(jìn)一步的生物等效性(BE)試驗研究才能確定。

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［2］ 張啟明，謝沐風(fēng)，寧保明，等.采用多條溶出曲線評價口服固體制劑的內(nèi)在質(zhì)量［J］.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2009，40(12):946－955.

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