三種麻醉方法在骨科動物實(shí)驗(yàn)中效果比較

梁佩紅，江 斌，陳居銪，譚見容，楊小紅

(暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬廣州市紅十字會醫(yī)院，廣州市創(chuàng)傷外科研究所，廣州 510220)

隨著臨床醫(yī)學(xué)技術(shù)研究的飛速發(fā)展，醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中動物實(shí)驗(yàn)也越來越受到重視，尤其是大多數(shù)臨床醫(yī)學(xué)技術(shù)的新嘗試，都先在動物身上做實(shí)驗(yàn)，然后再應(yīng)用到臨床上。在骨外科手術(shù)模型的動物實(shí)驗(yàn)方面，麻醉的好壞，直接影響實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量、結(jié)果和進(jìn)程。傳統(tǒng)的麻醉藥戊巴比妥鈉，在動物實(shí)驗(yàn)麻醉中，因深麻醉量與致死量很接近，實(shí)驗(yàn)動物存在個體差異，麻醉劑量難掌握，極易造成術(shù)中麻醉死亡；如何提高和改進(jìn)麻醉效果，是動物實(shí)驗(yàn)手術(shù)的關(guān)鍵。經(jīng)過參考相關(guān)文獻(xiàn)［3-6，9］，摸索、實(shí)踐、總結(jié)，我們逐步形成一套比傳統(tǒng)的單純用藥效果更佳、且操作較為簡便的麻醉方法，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

健康新西蘭兔80只，不分雌雄，體重2.5～3.5kg，均購于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心【SCXK(粵) 2008-0002】，單籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食。于2010年9月～2011年6月在廣州市十字會醫(yī)院動物實(shí)驗(yàn)中心實(shí)驗(yàn)【SYXK(粵)2006-0072】，隨機(jī)分為3組，速眠新II組20只，戊巴比妥鈉組30只，復(fù)合組(速眠新II戊巴比妥鈉聯(lián)合用藥組)30只。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品

1.2.1 麻醉藥品 速眠新II注射液：長春軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 軍事獸醫(yī)研究所，批號為：吉獸藥試字(2004)005013；戊巴比妥鈉粉劑：北京化學(xué)試劑公司，批號為020919。

1.2.2 呼吸興奮劑的準(zhǔn)備 麻醉前準(zhǔn)備可拉明、洛貝林，在動物麻醉時，一旦發(fā)現(xiàn)麻醉過深，及時肌肉注射上述藥品，以減少動物死亡。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為3組(A、B、C)，速眠新Ⅱ組(A組)：按速眠新Ⅱ0.3m l/kg，肌肉注射麻醉；戊巴比妥鈉組(B組)：用戊巴比妥鈉粉劑加生理鹽水溶解，配成0.6%水溶液，過濾除菌，按35～40mg/kg靜脈注射麻醉；復(fù)合組(C組)：先行0.6%戊巴比妥鈉按35～40mg/kg靜脈注射麻醉，待進(jìn)入麻醉期后再行速眠新II按0.1mg/kg肌肉注射，表1。

表1 動物麻醉分組處理情況Tab.1 Group of anesthetic animal

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 誘導(dǎo)期 從給藥到進(jìn)入麻醉的時間，此時呼吸平穩(wěn)緩慢、肌肉開始松弛等。

1.4.2 麻醉期(麻醉持續(xù)時間) 進(jìn)入麻醉后到蘇醒的時間，此時呼吸平穩(wěn)，睫毛反射、角膜反射遲鈍或消失，肌張力顯著降低，皮膚捏痛覺消失，趾蹼反射消失。

1.4.3 蘇醒期 從開始蘇醒到站立行走的時間，實(shí)驗(yàn)動物各種反射、反應(yīng)開始恢復(fù)，肢體開始活動。

1.4.4 麻醉效果① 進(jìn)入深麻醉時的穩(wěn)定性：以兔睫毛、角膜反射減弱，肌張力松弛，兔耳皮膚夾捏反應(yīng)消失為準(zhǔn)，呼吸45±5次/m in，心率120±15次/分。② 麻醉死亡率：觀察麻醉期及術(shù)后實(shí)驗(yàn)動物的存活例數(shù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 誘導(dǎo)期

A組誘導(dǎo)期時長為10.0±5(min)，B組與 C組誘導(dǎo)期時長均為4.0±2(min)。B組與 C組的誘導(dǎo)期時長明顯短于A組，有顯著差異(P＜0.05)，見表2。

2.2 麻醉效果

A組進(jìn)入麻醉期的時間長，B組和 C組進(jìn)入麻醉期較快，維持時間長，A組與B組、C組比較，維持時間有差異(P＜0.05)；復(fù)蘇期A組、B組、C組之間差異不顯著(P＞0.05)，表2。

表2 三種麻方法效果比較Tab.2 Comparation of three anesthetic methods during

2.3 麻醉期及術(shù)后的死亡率

A組與B組麻醉效果不夠理想，表現(xiàn)為肌肉不夠松弛，有痛覺，術(shù)中常需追加麻藥，術(shù)中死亡率較高，C組的麻醉效果較好，死亡率低；術(shù)后 A組、B組、C組死亡率差異不顯著(P＞0.05)，表3。

表3 麻醉期及術(shù)后的死亡率比較Tab.3 Comparation of anesthetic period and mortality rate after surgery

3 討論

骨外科方面的動物實(shí)驗(yàn)，與其他的動物實(shí)驗(yàn)相比，麻醉的要求較高，特別是脊柱手術(shù)［7］。理想的骨科手術(shù)麻醉是①麻醉藥物起效快，持續(xù)時間長；②鎮(zhèn)靜和鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)，整個手術(shù)過程中動物無躁動；③有良好的肌松作用；④麻醉蘇醒快，藥物不良反應(yīng)輕，術(shù)后對實(shí)驗(yàn)動物影響小，死亡率低。實(shí)驗(yàn)過程中，好的麻醉方法，除了保證實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量外，還同時關(guān)注到實(shí)驗(yàn)動物的福利和倫理道德問題［8］。

首先，從實(shí)驗(yàn)動物的倫理道德來說，隨著動物保護(hù)運(yùn)動的深入，實(shí)驗(yàn)動物學(xué)的關(guān)注焦點(diǎn)逐漸從飼養(yǎng)管理和使用操作轉(zhuǎn)向動物福利，而且現(xiàn)在國際學(xué)術(shù)刊物上發(fā)表涉及實(shí)驗(yàn)動物的論文，不但要求實(shí)驗(yàn)動物合格證，還需要提供所在單位“實(shí)驗(yàn)動物倫理委員會”的審查意見，因此，高質(zhì)量的麻醉，完全符合人們?nèi)找嬷匾晞游飩惱淼赖轮械膭游锔＠吞岢摹?R”(replace替代、reduction減少、refinement優(yōu)化)原則。

其次，從實(shí)驗(yàn)質(zhì)量來說，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，速眠新II無論從誘導(dǎo)期、麻醉效果、維持時間，都差于B組和C組；速眠新II是由氟哌啶醇、保定丁、新保靈等藥物制成的復(fù)合制劑。保定靈所含的二甲苯胺噻唑類似甲苯噻嗪，是 α2-受體激動劑，通過激活 α2-腎上腺素能受體起麻醉作用，鎮(zhèn)靜、肌松作用良好，鎮(zhèn)痛作用較差，抑制呼吸和心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)，容易出現(xiàn)呼吸頻率和心率下降；氟哌啶醇有較強(qiáng)的安定、鎮(zhèn)痛、肌松作用，但抑制呼吸作用明顯，術(shù)中須反復(fù)追加麻醉藥，有產(chǎn)生快速耐受的可能，用藥量大，難以掌握，容易導(dǎo)致術(shù)中動物死亡，也給術(shù)者帶來麻煩。戊巴比妥鈉雖然誘導(dǎo)期與維持時間都較理想，但由于具有擬 γ-氨基丁酸(GABA)的作用，與GABA受體結(jié)合，麻醉劑量的戊巴比妥鈉能直接活化氯離子通道，使氯離子大量內(nèi)流致突觸后膜發(fā)生超極化，從而降低神經(jīng)元的興奮性，具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、催眠作用，對呼吸有明顯抑制。因?yàn)閷?shí)驗(yàn)動物存在個體差異，麻醉藥物的劑量不好控制，易導(dǎo)致 ① 術(shù)中蘇醒，此時需追加麻藥，這樣會影響手術(shù)的連貫性，增加實(shí)驗(yàn)動物的痛刺激。② 術(shù)中麻醉意外死亡，因大量戊巴比妥鈉極易引起呼吸抑制而致死，恰恰深麻醉的量與致死量很接近，故有術(shù)中死亡的危險。且本品在蘇醒前伴有動作不協(xié)調(diào)、興奮和掙扎現(xiàn)象，易造成術(shù)后外傷。C組則較理想，聯(lián)合用藥，麻醉時間延長，彌補(bǔ)了單一用藥的不足，對于骨科手術(shù)，特別是脊柱手術(shù)，既可達(dá)到骨科實(shí)驗(yàn)手術(shù)的要求，也較為安全；兩種麻醉藥的先后使用，會產(chǎn)生協(xié)同作用，減少兩種藥物的單一使用量，速眠新II具有中樞神經(jīng)性鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜和肌肉松弛的作用，而合用后戊巴比妥鈉劑量的減少，也有效地降低了它們的毒性作用和不良反應(yīng)，誘導(dǎo)期縮短，麻醉維持時間延長，使藥物濃度基本保持在安全范圍內(nèi)，降低了實(shí)驗(yàn)動物的死亡率［1、2］。

由于我們研究的方向是創(chuàng)傷外科，特別是骨科方面的相關(guān)研究，往往制作的動物模型都需要進(jìn)行骨科手術(shù)，手術(shù)的部位比較深，且復(fù)雜，故實(shí)驗(yàn)動物的麻醉效果要求高，須做到肌肉松弛，肌張力少，無牽拉反應(yīng)，無痛覺；同時，自主呼吸、心跳保持良好，麻醉平穩(wěn)后，維持時間能使手術(shù)順利完成。

綜上所述，3組麻醉方法中，我們認(rèn)為，復(fù)合組麻醉既能實(shí)現(xiàn)造模的要求，保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，也符合實(shí)驗(yàn)動物的倫理道德要求。麻醉效果好、安全，是骨科手術(shù)動物模型的較佳選擇。

［1］楊智，康林，鄧長青，等.引入速眠新II對戊巴比妥麻醉效果的改進(jìn)［J］.湖南師范大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，3(3)65-66.

［2］劉小玲，張平，姜德涌，等.速眠新與戊巴比妥鈉在動物麻醉中的應(yīng)用比較［J］.南華大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，4(32)131-132.

［3］楊培梁，王元占，朱玉峰，等.全身復(fù)合麻醉在動物實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用研究［J］.中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2005，4(15)198-199.

［4］吳曙光，錢寧.速眠新在實(shí)驗(yàn)動物麻醉中的應(yīng)用［J］.貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，1(29)58-59.

［5］李峰，段小紅，吳軍正.戊巴比妥鈉麻醉口腔實(shí)驗(yàn)動物效果的分析［J］.貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，29，59-60.

［6］鐘偉幫，武兆忠，郭露萍，等.三種常用動物實(shí)驗(yàn)麻醉藥對小白鼠麻醉效果比較分析［J］.2006(6)9633-634.

［7］孫煦化，李敏，王莉，等.幾種麻醉劑在家兔脊柱手術(shù)中的效果比較［J］.吉林醫(yī)學(xué)，2011，32(2)211-213.

［8］左志英.實(shí)驗(yàn)動物的中國福利［J］.科學(xué)與文化，2010，12，22-23.

［9］吳曙光，巫全勝，趙菊花，等.速眠新II與戊巴比妥鈉對實(shí)驗(yàn)用白香豬麻醉效果的觀察［J］.實(shí)驗(yàn)動物科學(xué)，2007，24(2)24-26.