不同計數(shù)法對乙肝患者白細胞檢測的影響

吳樹林

不同計數(shù)法對乙肝患者白細胞檢測的影響

吳樹林

目的 探討不同計數(shù)法對乙肝患者白細胞檢測的影響。方法 對筆者所在醫(yī)院50例慢性乙型重癥肝炎患者(血清膽紅素150～500 μmol/L)，用血細胞分析儀計數(shù)和手工方法計數(shù)，對兩種方法進行比較。結(jié)果 高膽紅素血用血細胞分析儀計數(shù)與手工法計數(shù)差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)，高膽紅素血能夠使血細胞分析儀白細胞計數(shù)假性增高。結(jié)論 高膽紅素血對血細胞分析儀計數(shù)結(jié)果有較大影響，應用手工方法復檢。

計數(shù)法; 乙肝; 白細胞

黃疸是慢性重癥肝炎的主要表現(xiàn)之一，主要是由肝細胞受損、壞死后攝取、轉(zhuǎn)化、排泄膽紅素的能力下降使得血液中的膽紅素濃度升高所致。近年來，隨著醫(yī)學科學技術(shù)突飛猛進的發(fā)展，全自動血細胞分析儀已在全國廣泛應用，這不僅提高了實驗結(jié)果的精密性和準確性，而且也提高了工作人員的效率。但是，各類儀器仍有其不足之處，在日常工作中筆者發(fā)現(xiàn)，用血細胞分析儀對重癥黃疸肝炎患者進行血常規(guī)測定時，部分患者白細胞假性增高，如果檢驗人員不進行下一步手工復查，會發(fā)出不準確的檢驗結(jié)果，嚴重影響臨床醫(yī)生對患者的治療。本文探討不同計數(shù)法對白細胞計數(shù)分類的影響。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 50例重癥乙型肝炎患者的血常規(guī)標本均來自筆者所在醫(yī)院2011年1月～2011年6月感染科患者，其中男33例，女17例，年齡19 d～72歲，其中嬰兒5例。經(jīng)生化檢驗膽紅素150～500 μmol/L。

1.2 儀器與試劑 深圳邁瑞公司生產(chǎn)的BC－5380五分類血細胞分析儀及配套試劑和質(zhì)控;日本Olympus顯微鏡;血清膽紅素檢測使用羅氏MODULE P800生化分析儀及原裝配套試劑。

1.3 方法 (1)血細胞分析儀檢測方法:使用邁瑞B(yǎng)C－5380血細胞分析儀對50份標本進行檢測，操作嚴格按生產(chǎn)廠商的操作手冊進行。即取患者靜脈血2.0 ml，置于EDTAK2抗凝管內(nèi)，充分顛倒混勻，1 h內(nèi)上機檢測。同種標本用相同儀器RRBC模式復檢。(2)手工操作方法:嚴格按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第2版進行［1］。即用已校正好的微量吸管吸取20 μl上述血樣，放入0.38 ml WBC稀釋液內(nèi)，用改良牛鮑氏計數(shù)板顯微鏡計數(shù)。手工檢測由于使用顯微鏡目測，能夠排除紅細胞及紅細胞碎片的影響，此結(jié)果與有關(guān)研究［2，3］相符。體外標本去除高膽紅素血漿后，不能導致儀器檢測白細胞數(shù)的改變，此結(jié)果與有關(guān)研究［4］相符。

1.4 統(tǒng)計學處理 應用PEMS 3.1醫(yī)學統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行處理，數(shù)據(jù)采用單樣本t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

50例重癥黃疸肝炎患者的白細胞檢測中，血細胞分析儀檢測與手工操作方法檢測的結(jié)果分別為(6.934±4.323)×109/L和(5.4±2.16)×109/L，差異有統(tǒng)計學意義(t=6.1264，P ＜0.001)。

3 討論

深圳邁瑞公司生產(chǎn)的BC－5380型全自動五分類血細胞分析儀采用半導體激光散射技術(shù)、細胞化學染色技術(shù)和先進的流式分析裝置對白細胞、紅細胞、血小板系列多個參數(shù)進行精確的計數(shù)和分類分析，是目前國內(nèi)能生產(chǎn)五分類血細胞分析儀為數(shù)不多的廠家，具有快速、準確、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。白細胞計數(shù)前會自動以溶血劑先將紅細胞溶解，紅細胞溶解后血細胞分析儀再計數(shù)白細胞池中顆粒數(shù)量，對白細胞是否有干擾取決于紅細胞在溶血素作用后的破壞程度。正常人的紅細胞加入溶血素后很容易溶解，肝病患者肝細胞受損后其攝取、轉(zhuǎn)化、排泄游離膽紅素的能力下降，從而使患者出現(xiàn)高膽紅素血癥。高膽紅素能夠使紅細胞膜出現(xiàn)異常，使紅細胞對溶血素具有一定的抵抗能力，使一部分溶血素被消耗而導致溶血素相對不足，紅細胞不能夠被完全破壞，未破壞的紅細胞和碎片由于和淋巴細胞體積大小接近使血細胞分析儀誤認其為白細胞，因此導致白細胞計數(shù)假性增高和白細胞分類不準確。同時，高膽紅素能夠和紅細胞膜結(jié)合，血小板脂質(zhì)結(jié)合形成大分子物質(zhì)，血細胞分析儀檢測時會把這些大分子物質(zhì)和未破壞的紅細胞記成淋巴細胞，從而使白細胞的總數(shù)明顯高于手工計數(shù)，細胞分類時淋巴細胞假性增高，中性粒細胞相對減少。另外，標本的溶血不全可能會堵塞機器。

生理性膽紅素可以清除脂質(zhì)過氧化物，能保持正常細胞膜脂質(zhì)的流動性。但高濃度的膽紅素容易形成穩(wěn)定的膽紅素自由基［5］，使多余的細胞膜脂不能被清除，細胞膜脂結(jié)合蛋白質(zhì)后溶血劑也難以溶解，導致儀器在進行白細胞計數(shù)時出現(xiàn)誤判，把未溶解的紅細胞記成白細胞，出現(xiàn)白細胞的假性增高，但并不是所有的高膽紅素血癥的白細胞計數(shù)都假性增高。值得注意的一點是，由于膽紅素會導致白細胞計數(shù)的假性增高和細胞分類時淋巴細胞假性增高，當遇到分析儀計數(shù)此兩項同時增高時，應用手工方法復查是否是膽紅素影響的假性增高。

有資料表明，肝病患者和新生兒紅細胞膜脂類異常，具有抵抗溶血素的作用，導致紅細胞溶解不全［6］，就會干擾白細胞的測定，造成白細胞假性增高。而手工方法用1%的HCL可溶解紅細胞，不受上述因素的影響。有文獻報道，重癥黃疸患者血液標本按儀器要求稀釋后，在顯微鏡下觀察紅細胞的溶解情況，需經(jīng)120 s才能完全溶解紅細胞，而一般的血細胞分析儀測定白細胞的時間會小于60 s。因此，溶血素的作用時間也是導致紅細胞溶解不全的原因。消除膽紅素對白細胞計數(shù)的影響，可采用離心洗滌，用生理鹽水洗滌后重新檢測。

綜上所述，重癥肝病患者的高膽紅素血液標本能夠引起血細胞分析儀白細胞計數(shù)假性增高，如果偏信血細胞分析儀的檢測結(jié)果，會誤導醫(yī)生按合并感染處理，不僅給患者造成一定的經(jīng)濟負擔，還會給患者的病情造成一定的影響。因此，在遇到黃疸患者血細胞分析白細胞增高時，必須使用手工方法復查，才能為臨床提供更為準確，可靠的依據(jù)。

［1］葉應嫵，王毓三.全國臨床檢驗操作規(guī)程［M］.第2版.南京:東南大學出版社，1997:4.

［2］鄺泳云.一種異常白細胞直方圖的分析及原因初探［J］.上海醫(yī)學檢驗雜志，2000，15(1):15.

［3］凌勵，金麗茵，林紫云.肝病患者白細胞異常直方圖原因初探［J］.上海醫(yī)學檢驗雜志，2000，15(6):337 －338.

［4］呂斌斌，梁海麗，馮靜霞.黃疸乳糜對血液細胞分析結(jié)果的影響［J］.江蘇大學學報(醫(yī)學版)，2004(1):64 －65.

［5］劉湘陶，劉慧娟.膽紅素自由基對大鼠肝細胞損傷作用的研究［J］.生物化學雜志，1995，11(1):71 －75.

［6］叢玉隆，王淑娟.今日臨床檢驗學［M］.第2版.北京:中國科學技術(shù)出版社，1997:41.

10.3969/j.issn.1674 －4985.2012.06.050

466000河南省周口市中心醫(yī)院

吳樹林

2011－12－29)

(本文編輯:王宇)