冷凍原腸中腸出血性大腸桿菌O157∶H7的研究＊

仇保豐，蔡寶亮，宋鴻雁，劉文斌，高逢結(jié)，顧炳泉，李 建

冷凍原腸中腸出血性大腸桿菌O157∶H7的研究＊

仇保豐1，蔡寶亮2，宋鴻雁3，劉文斌1，高逢結(jié)1，顧炳泉1，李 建1

目的檢測(cè)分析進(jìn)出境冷凍原腸攜帶腸出血性大腸桿菌O157∶H7的情況。方法對(duì)2010－2011年進(jìn)境或國產(chǎn)的35份冷凍原腸樣品（包括19份冷凍羊原腸和16份冷凍豬原腸）進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)細(xì)菌的培養(yǎng)特性、生化鑒定和血清學(xué)鑒定，同時(shí)設(shè)立標(biāo)準(zhǔn)菌株作為對(duì)照。結(jié)果2份原腸樣品檢出腸出血性大腸桿菌O157∶H7，檢出率為5．71%。結(jié)論進(jìn)境和國產(chǎn)原腸均有可能攜帶腸出血性大腸桿菌O157∶H7，應(yīng)該加強(qiáng)監(jiān)測(cè)。

冷凍原腸；腸出血性大腸桿菌O157∶H7；檢測(cè)

腸衣（Casing）是家畜新鮮腸管經(jīng)加工處理，除去腸內(nèi)外各種不需要的組織后所剩下的一層堅(jiān)韌、半透明的薄膜，它是加工灌腸類食品的重要原料之一。我國是世界上主要腸衣生產(chǎn)國，同時(shí)也是腸衣來料和進(jìn)料加工大國。腸衣產(chǎn)業(yè)為解決我國出口創(chuàng)匯、農(nóng)民增收和增加就業(yè)等發(fā)揮很大作用，但是，腸衣也容易攜帶多種病原微生物，特別是去糞、清洗后未經(jīng)刮制的原腸（Intestine），更容易攜帶和傳播病原體［1－2］。這一方面會(huì)對(duì)公共衛(wèi)生安全和畜牧業(yè)發(fā)展造成威脅，另一方面也會(huì)給我國腸衣出口行業(yè)帶來沖擊，尤其是近年來隨著人們對(duì)食品安全的高度重視和國際貿(mào)易技術(shù)壁壘的影響，國內(nèi)外對(duì)食品微生物的檢測(cè)要求也日益嚴(yán)格，我國腸衣行業(yè)有可能會(huì)遭受嚴(yán)峻考驗(yàn)。

腸出血性大腸桿菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）O157∶H7是一種新發(fā)現(xiàn)的腸道致病菌，它對(duì)人類健康的危害已引起世界各國的普遍關(guān)注。我國每年生產(chǎn)和引進(jìn)大量動(dòng)物原腸，存在著攜帶和傳播EHEC O157∶H7的風(fēng)險(xiǎn)。但是，目前國內(nèi)外對(duì)原腸攜帶EHEC O157∶H7的研究很少。對(duì)2010－2011年進(jìn)出境的19份冷凍羊原腸和16份冷凍豬原腸攜帶EHEC O157∶H7的情況進(jìn)行檢查，旨在獲得動(dòng)物原腸攜帶EHEC O157∶H7的第一手資料。

1 材料與方法

1．1 材料 腸出血性大腸桿菌O157∶H7標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC35150）由青島綠谷有限公司購買；m（EC）n、SMAC、LST－MUG肉湯、O157菌成套生化鑒定管（用于大腸桿菌O157∶H7／NM生化鑒定）均購自青島高科園海博生物技術(shù)有限公司；腸道埃希氏菌O157∶H7標(biāo)準(zhǔn)血清購自寧波天潤生物藥業(yè)有限公司。

1．2 腸衣樣品的采集 35份進(jìn)境或國產(chǎn)冷凍原腸樣品，為2010－2011年在南通腸衣生產(chǎn)、加工企業(yè)采集，其中包括19份冷凍羊原腸和16份冷凍豬原腸。樣品采集方法如下：在冷凍原腸解凍后，迅速從包裝容器不同位置隨機(jī)選擇盡可能多的腸衣，分別用高壓滅菌處理過的剪刀和鑷子無菌采集約5g樣品放入無菌的均質(zhì)袋中，直到每份樣品的總量不少于1 000 g，密封均質(zhì)袋口放入未經(jīng)使用的取樣袋內(nèi)，扎經(jīng)取樣袋再放入盛有冰袋的保溫盒內(nèi)，密封后盡快送往實(shí)驗(yàn)室并于－18℃凍存。

1．3 樣品的處理及細(xì)菌的培養(yǎng)和純化 腸衣樣品采集后盡快進(jìn)行EHEC O157∶H7增菌培養(yǎng)、選擇培養(yǎng)和純化培養(yǎng)：先將樣品由冰箱拿出后置室溫解凍，在無菌操作臺(tái)內(nèi)打開包裝袋，用滅菌處理過的剪刀和鑷子充分剪碎、混勻后，分別按照文獻(xiàn)［3］的方法對(duì)冷凍原腸中的EHEC O157∶H7進(jìn)行分離和純化，同時(shí)設(shè)立標(biāo)準(zhǔn)菌株作為對(duì)照。

1．4 原腸攜帶大腸桿菌的鑒定 將1．3分離、純化獲得的EHEC O157∶H7可疑菌落分別按照文獻(xiàn)［3］的方法，用O157菌成套生化鑒定管和腸道埃希氏菌O157∶H7標(biāo)準(zhǔn)血清進(jìn)行生化和血清學(xué)鑒定，根據(jù)鑒定結(jié)果做出判定。

2 結(jié) 果

2．1 EHEC O157∶H7的分離 35份冷凍原腸樣品分別按照文獻(xiàn)［3］的方法對(duì)其進(jìn)行增菌培養(yǎng)、選擇培養(yǎng)和純化培養(yǎng)。對(duì)于不發(fā)酵山梨醇并在MUGLST發(fā)酵管內(nèi)出現(xiàn)產(chǎn)氣的菌落，用接種環(huán)取少量菌液在普通瓊脂平板上劃線培養(yǎng)，然后挑取單菌落接種TSI，根據(jù)培養(yǎng)結(jié)果將EHEC O157∶H7可疑細(xì)菌進(jìn)行進(jìn)一步的鑒定。

2．2 EHEC O157∶H7的鑒定 對(duì)35份樣品中分離到的EHEC O157∶H7可疑細(xì)菌用O157菌成套生化鑒定管和腸道埃希氏菌O157∶H7標(biāo)準(zhǔn)血清進(jìn)行生化試驗(yàn)和玻板凝集試驗(yàn)，有2份冷凍原腸樣品的EHEC O157∶H7檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)陽性，陽性率為5．71%。

3 討 論

目前，歐盟和加拿大等國家和地區(qū)對(duì)我國出口腸衣的獸藥殘留制定了嚴(yán)苛的限量指標(biāo)，并要求做到每批檢測(cè)，極大地增加了出口的難度和負(fù)擔(dān)。但是，國外對(duì)腸衣攜帶致病菌的問題卻不夠重視。究其原因，我國出口的絕大多數(shù)腸衣是已經(jīng)加工為成品的鹽漬腸衣，而國外的大量研究表明，絕大多數(shù)細(xì)菌在鹽漬腸衣的這種高滲環(huán)境下經(jīng)過一段時(shí)間（約30d）就會(huì)被殺滅［4－6］。再加之出口到國外的腸衣除了要經(jīng)過長時(shí)間的海上運(yùn)輸外，到達(dá)國外還需要再次加工和蒸煮才供食用，因此國外對(duì)腸衣攜帶致病性微生物的問題并不苛求。

我國作為腸衣出口主要國家，一方面，在國內(nèi)屠宰場和腸衣企業(yè)間大批量、遠(yuǎn)距離的運(yùn)輸來自全國各地的冷凍腸衣，存在著傳播動(dòng)物疫病和危害公共衛(wèi)生安全的巨大隱患。另一方面，因?yàn)閯趧?dòng)力成本低廉，我國還是世界上重要的腸衣來料和進(jìn)料加工大國，每年有大量的來自不同地區(qū)和國家的冷凍腸衣涌入國內(nèi)，很容易將國外的動(dòng)物疫病帶入國內(nèi)，給我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)和腸衣從業(yè)人員的健康帶來威脅。因此，對(duì)冷凍原腸攜帶微生物的情況進(jìn)行系統(tǒng)、全面的檢測(cè)控制已經(jīng)非常迫切。劉增再等對(duì)湖南某腸衣出口企業(yè)的40個(gè)鹽漬豬腸衣樣品攜帶豬瘟病毒進(jìn)行檢測(cè)，CSFV陽性率為7．5%［7］。對(duì)于冷凍原腸攜帶致病菌的研究，國內(nèi)目前尚未見報(bào)道。本研究選擇19份冷凍羊腸衣和16份冷凍豬腸衣作為檢測(cè)樣品，結(jié)果發(fā)現(xiàn)2份有致病菌，EHEC O157∶H7檢出率為5．71%。

［1］Chawla SP，Chander R，Sharma A．Safe and shelf－stable natural casing using hurdle technology［J］．Food Control，2006，17：127－131．

［2］Gabis DA，Silliker JH．Salmonella in natural animal casings［J］．Appl Environ Microbiol，1974，27（1）：66－71．

［3］SN／T 0973－2000進(jìn)出口肉及肉制品中腸出血性大腸桿菌O157∶H7檢驗(yàn)方法［S］．北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2001．

［4］Wijnker JJ，Koop G，Lipman LJA．Antimicrobial properties of salt（NaCl）used for the preservation of natural casings［J］．Food Microbiol，2006，23：657－662．

［5］Benli H，Hafley BS，Keeton JT，et al．Biomechanical and microbiological changes in natural hog casings treated with ozone［J］．Meat Sci，2008，79：155－162．

［6］Jo C，Lee JW，Cho KH，et al．Quality properties of sausage made with gamma irradiated natural casing from intestine of pork or lamb［J］．Radiat Phys Chem，2002，63：365－367．

［7］劉增再，朱中武，唐連飛，等．鹽漬腸衣豬瘟病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的相關(guān)性研究［J］．湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2005，31（6）：644－647．

Investigation on eEnterohemorrhagic Escherichia coli O157∶H7 in frozen intestine

QIU Bao－feng1，CAI Bao－liang2，SONG Hong－yan3，LIU Wen－bin1，GAO Feng－jie1，GU Bing－quan1，LI Jian1
（1．Nantong Entry－Exit Inspection and Quarantine Bureau，Nantong 226018，China；2．Jiangsu Entry－Exit Inspection and Quarantine Bureau，Nanjing 210001，China；3．Laboratory Animal Center of Nantong University，Nantong 226001，China）

To study the enterohemorrhagic Escherichia coli（EHEC）O157∶H7 in entry－exit frozen intestines，35 intestine samples，which included 19 samples derived from lambs／sheep and 16 samples derived from hogs，were collected in imported or domestic products during 2010－2011．Based on bacterial properties，biochemical and serological confirmation，and a EHEC O157∶H7 reference strain was prepared as well，it shows that 2 frozen intestine samples were contaminated with EHEC O157∶H7，positive rate was 5．71%．Imported or domestic intestines might be contaminated with EHEC O157∶H7，the relevant supervision and study should be strengthened．

frozen intestines；EHEC O157∶H7；detection

R378．2

A

1002－2694（2012）02－0191－02

＊江蘇檢驗(yàn)檢疫局科研項(xiàng)目（No．2010KJ35）資助

仇保豐，Email：baofengqiu2008＠yahoo．cn

1．南通出入境檢驗(yàn)檢疫局，南通 226018；2．江蘇出入境檢驗(yàn)檢疫局，南京 210001；3．南通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，南通 226001

2011－09－18；

2011－10－23