幽門(mén)螺桿菌蛋白晶體結(jié)構(gòu)的研究與應(yīng)用

宮雅楠，張建中

幽門(mén)螺桿菌蛋白晶體結(jié)構(gòu)的研究與應(yīng)用

宮雅楠，張建中

幽門(mén)螺桿菌（Helicobacter pylori，簡(jiǎn)稱(chēng)H．pylori或Hp）是微需氧的革蘭氏陰性菌，并引起嚴(yán)重的胃十二指腸疾病，例如消化性潰瘍、胃炎及胃癌等，WHO將其確定為I類(lèi)致癌因子［1］，世界人口中約半數(shù)處于慢性感染狀態(tài)。由于其嚴(yán)重的致病性，近來(lái)關(guān)于機(jī)制的研究及藥物開(kāi)發(fā)受到更多的關(guān)注，蛋白晶體結(jié)構(gòu)的研究與應(yīng)用更是成為一個(gè)關(guān)注的焦點(diǎn)。

1 幽門(mén)螺桿菌蛋白結(jié)構(gòu)分析中的研究方法

電子顯微鏡（EM）主要用于細(xì)菌形態(tài)的研究，目前常用于分析Hp的表面結(jié)構(gòu)。新近發(fā)展起來(lái)的低溫電鏡技術(shù)（cryo－genic EM）是低溫冷凍技術(shù)與電子顯微鏡相結(jié)合，可以獲得更精細(xì)的細(xì)菌結(jié)構(gòu)，甚至可獲得生理狀態(tài)下細(xì)菌的內(nèi)部結(jié)構(gòu)［1］，但這些方法都無(wú)法獲得原子水平的蛋白結(jié)構(gòu)。

20世紀(jì)末，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，細(xì)菌蛋白的表達(dá)及純化變得相對(duì)容易，從而使進(jìn)一步從原子水平上研究細(xì)菌蛋白結(jié)構(gòu)及功能成為可能，主要包括核磁共振技術(shù)及X射線(xiàn)衍射技術(shù)。

核磁共振技術(shù)（NMR）可用于測(cè)定蛋白的液相結(jié)構(gòu)，NMR測(cè)定曾被用于Hp0222蛋白在溶液中的液相機(jī)構(gòu)，并發(fā)現(xiàn)其以二聚體形式存在，結(jié)構(gòu)由帶－螺旋－螺旋方式組成，具有轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的ARC／METJ家族特性，都能與DNA結(jié)合形成高級(jí)有序寡聚體［2］。而對(duì)Hp0892的溶液結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)其含有3個(gè)α－螺旋，5個(gè)β－股形成一個(gè)5股β－折疊片，它屬于質(zhì)粒穩(wěn)定系統(tǒng)蛋白家族。NMR僅限于分子量不大于30 kd～40 kd小分子蛋白的分析，且所得到的信息不能被現(xiàn)有的其它分析技術(shù)解譯［3］。

X－射線(xiàn)衍射技術(shù)目前應(yīng)用廣泛，通過(guò)這種方法已經(jīng)測(cè)定出大量蛋白的三維結(jié)構(gòu)。它是基于蛋白結(jié)晶的重要結(jié)構(gòu)分析方法，能夠?qū)Φ鞍仔纬傻木w進(jìn)行X－射線(xiàn)衍射分析，從而可在原子水平上認(rèn)識(shí)蛋白結(jié)構(gòu)。蛋白晶體生長(zhǎng)環(huán)境中一般含有30%～90%的溶劑，有助于維持蛋白的天然構(gòu)象，使蛋白結(jié)構(gòu)及功能的推測(cè)與研究更具有可靠性［1］。

Hp蛋白的三維結(jié)構(gòu)解析是認(rèn)識(shí)其蛋白功能及致病機(jī)制的有力手段，對(duì)其結(jié)構(gòu)的認(rèn)識(shí)經(jīng)歷著電鏡結(jié)構(gòu)到其組成蛋白原子水平3D結(jié)構(gòu)的變化。目前通過(guò)X－射線(xiàn)衍射技術(shù)已獲得上百種幽門(mén)螺桿菌蛋白的晶體結(jié)構(gòu)，對(duì)其蛋白功能、致病機(jī)制、免疫機(jī)理及藥物設(shè)計(jì)提供了重要技術(shù)支持。

2 Hp蛋白晶體結(jié)構(gòu)分析用于蛋白功能研究

已有大量Hp蛋白通過(guò)與其他生物或微生物已知功能蛋白的序列比對(duì)推測(cè)出其功能并通過(guò)生化實(shí)驗(yàn)得以驗(yàn)證，其獨(dú)特的三維結(jié)構(gòu)決定了它們功能的多樣性及復(fù)雜性，因此結(jié)構(gòu)的測(cè)定能夠更好地了解這些蛋白的功能特性。

Hp細(xì)菌定植及持續(xù)感染機(jī)制相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，大量蛋白參與其中，但這些蛋白大多在功能上是未知的，晶體結(jié)構(gòu)成為揭示其功能的有力手段。Hp1286與Hp1287（ten A）都與定植相關(guān)，晶體結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)Hp1286為對(duì)稱(chēng)二聚體，屬于YceI－類(lèi)似蛋白家族，可能具有一些長(zhǎng)鏈脂肪酸或酰胺的貯存及轉(zhuǎn)運(yùn)功能，能夠吸收環(huán)境中的脂肪酸或酰胺，為細(xì)菌代謝提供必需的脂肪酸，或保護(hù)細(xì)菌免于受到脂肪酸抗菌活性的毒性作用［4］；發(fā)現(xiàn)Hp1287能形成222對(duì)稱(chēng)同源四聚體，屬于硫胺素酶II家族，參與硫胺前體羥嘧啶合成的補(bǔ)救途徑中，構(gòu)成了硫胺生物合成的一個(gè)模塊，但其對(duì)底物4－氨基－5－氨甲基－2－甲基嘧啶的活性稍差［5］。

Hp蛋白晶體結(jié)構(gòu)的測(cè)定也被用于揭示蛋白的活性作用位點(diǎn)及關(guān)鍵氨基酸殘基部位。尿素酶成熟蛋白（UreE）與Cu2＋及Ni2＋結(jié)合的晶體結(jié)構(gòu)分析表明，UreE與離子結(jié)合后形成四聚體，通過(guò)His102排列圍繞在金屬離子周?chē)?。與His102的結(jié)合能夠增加局部金屬離子的濃度，從而可傳遞更多的鎳離子［6］。甲酰胺酶AmiF的晶體結(jié)構(gòu)揭示出甲酰胺結(jié)合袋由Cys166、Glu60和Lys133殘基組成，其中Cys166是親和基團(tuán)，C166S突變體可導(dǎo)致蛋白失活［7］。

在Hp的全部蛋白中大約1／3的蛋白沒(méi)有尋找到序列上的同源物，它們的功能及三維結(jié)構(gòu)從未被描述過(guò)。對(duì)這些蛋白的理解對(duì)潛在抗菌藥物的發(fā)現(xiàn)提供基礎(chǔ)，其功能及結(jié)構(gòu)測(cè)定受到更多的關(guān)注。例如Hp0336基因編碼一種富含半胱氨酸的蛋白Hcp B，其結(jié)構(gòu)包括四個(gè)α／α－基序，通過(guò)二硫鍵交連起來(lái)。重復(fù)子與三四氨基酸重復(fù)基序（tetratricopeptide repeat，TPR）相似，許多TPR蛋白參與到細(xì)胞周期調(diào)節(jié)，蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)，以及分子伴侶協(xié)助蛋白折疊中，因此基于整體結(jié)構(gòu)推測(cè)Hcp B也可能具有這些功能［8］，但對(duì)這些功能的深入認(rèn)識(shí)，還有待于對(duì)其晶體結(jié)構(gòu)的分析。

3 蛋白晶體結(jié)構(gòu)分析用于Hp進(jìn)化研究

通過(guò)比對(duì)Hp蛋白與其它物種蛋白間序列上的相似性程度，不僅能夠推測(cè)出蛋白可能的生物學(xué)功能，也能用于進(jìn)化及分型研究。Hp有許多蛋白并未發(fā)現(xiàn)存在序列上的同源物，因此對(duì)其空間結(jié)構(gòu)的分析和比對(duì)具有更重要的意義。

Hob A（Hp1230）能夠特異地與Dna A蛋白相互作用，通過(guò)晶體結(jié)構(gòu)測(cè)定揭示了它具有糖異構(gòu)酶（sugar isomerase，SIS）蛋白結(jié)構(gòu)域，SIS蛋白與大腸桿菌的Dia A蛋白序列高度同源，但Hob A與大腸桿菌Dia A沒(méi)有序列同源性，結(jié)構(gòu)比對(duì)發(fā)現(xiàn)它們二聚體／二聚體界面也是不同的，但具有相似的折疊方式，均為DNA復(fù)制調(diào)節(jié)因子，但Hob A已進(jìn)化成Hp的存活必需因子［9］；YbgC（Hp0496）與大腸桿菌YbgC在序列上有30%的相似性，但具有相似的硫酯酶特性的熱狗折疊結(jié)構(gòu)，揭示了ε－γ四聚體組裝形式在YbgC蛋白中是保守的，這種獨(dú)特的四聚化形式產(chǎn)生一個(gè)重要表面，由12股β－折疊片組成產(chǎn)生，這些區(qū)域能夠參與到特定相互作用，包括與Cag A的相互作用?；谄浠钚砸约芭c大腸桿菌YbgC結(jié)構(gòu)的比對(duì)，提出YbgC的催化核心是保守的，可能參與到脂酰輔酶A衍生物的水解［10］。

4 致病因子晶體結(jié)構(gòu)與Hp致病機(jī)制研究

Hp致病性相關(guān)的因子包括空泡細(xì)胞毒素（Vac A）、細(xì)胞毒性相關(guān)蛋白 A （Cag A）、表面脂多糖LPS、尿素酶、鞭毛蛋白、粘附素等。

4．1 運(yùn)動(dòng)及趨化性因子 運(yùn)動(dòng)能力是通過(guò)極生鞭毛來(lái)完成的，對(duì)定植是必需的。鞭毛也參與到粘附及誘導(dǎo)宿主細(xì)胞炎癥應(yīng)答中。由于運(yùn)動(dòng)性是毒力相關(guān)特性，改善了對(duì)鞭毛生物合成的理解，有利于發(fā)展干擾或治療策略［11］。

Hp鞭毛由2種鞭毛蛋白組成：FlaA和FlaB［12］。fla A1（Hp0840）基因產(chǎn)物能夠參與到鞭毛及LPS的合成，在Hp致病性及定植中起關(guān)鍵作用。fla A1基因的破壞可導(dǎo)致細(xì)菌鞭毛缺失即LPS缺失大部分O抗原結(jié)構(gòu)。FlaA1序列表明它屬于短鏈脫氫酶／還原酶超家族，通過(guò)測(cè)定Fla A1·NADPH．UDP－Gal、Fla A1·NADP＋·UDP－Glc NAc、Fla A1·NADP＋·UDP－Glc、Fla A1·NADPH·UDP－Glc NAc及FlaA1·NADP＋·UDP－Gal 5種不同三元絡(luò)合物的晶體結(jié)構(gòu)，表明此酶以六聚體形式存在，是一種新的短鏈脫氫酶／還原酶超家族成員，其催化唾液酸類(lèi)似物pseudaminic acid（Pse）衍生物合成途徑的第一步，Pse與鞭毛糖基化相關(guān)，對(duì)功能性鞭毛的組裝是必需的［13］；Hp0366基因編碼的氨基轉(zhuǎn)移酶（PseC）在Pse生物合成途徑中起核心作用，同源二聚體構(gòu)成活性位點(diǎn)，并鑒定出參與到中間體穩(wěn)定與催化的關(guān)鍵殘基。進(jìn)一步基于結(jié)構(gòu)的定點(diǎn)突變證實(shí)了在催化過(guò)程中l(wèi)ys183的關(guān)鍵作用，能夠幫助解釋Pse生物合成途徑中氨基轉(zhuǎn)移酶反應(yīng)機(jī)制［14］。

趨化性是Hp定植與感染的另一重要毒力因素。Hp的趨化系統(tǒng)的標(biāo)志是多個(gè)感應(yīng)調(diào)節(jié)因子的存在，包 含 CheY（Hp1067）、Che A（Hp0392）、CheW（Hp0391）以及較遠(yuǎn)的 Hp0170基因編碼CheZ同源物。通過(guò)與大腸桿菌Bef－結(jié)合CheY活性位點(diǎn)殘基間的結(jié)構(gòu)比對(duì)表明thrf 84在磷酸轉(zhuǎn)移反應(yīng)中起重要作用，這是首次對(duì)Hp趨化系統(tǒng)的特性提供結(jié)構(gòu)上的觀(guān)點(diǎn)［15］。已測(cè)定出的Bef3－活化的趨化蛋白Hp CheY1晶體結(jié)構(gòu)，揭示了Bef3與Che Y1的結(jié)合機(jī)制，以及Bef3－Che Y1與Hp Fli M的相互作用的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。

4．2 Vac A及腫瘤誘發(fā)因子 Vac A是Hp分泌的一種細(xì)胞毒素，能夠引起哺乳動(dòng)物細(xì)胞質(zhì)內(nèi)廣泛的空泡形成及多種細(xì)胞內(nèi)效應(yīng)。Vac A包含P33和P55兩個(gè)結(jié)構(gòu)域，二者的結(jié)構(gòu)域組分對(duì)Vac A寡聚化是必需的，其中P55結(jié)構(gòu)域在調(diào)節(jié)Vac A結(jié)合宿主細(xì)胞中起重要作用，其顯著特性是存在一個(gè)由卷曲β－折疊片組成的右手平行螺旋狀結(jié)構(gòu)，這是自主運(yùn)載體結(jié)構(gòu)域的典型特征，在已知的細(xì)菌蛋白毒素中具有獨(dú)特性。P55的結(jié)構(gòu)特性還包括β－折疊片接觸的斷裂，導(dǎo)致5個(gè)β螺旋狀亞結(jié)構(gòu)域形成，同時(shí)還含有1個(gè)二硫鍵的C－端結(jié)構(gòu)域［16］。

在此基礎(chǔ)上，所構(gòu)建的8個(gè)P55結(jié)構(gòu)域缺失突變體分析結(jié)果表明在Vac A P55結(jié)構(gòu)域的β螺旋狀片段中有一些靈活區(qū)域能夠耐受變化而對(duì)蛋白分泌或活性無(wú)毒性效應(yīng)，同時(shí)發(fā)生相似改變的C－端結(jié)構(gòu)域?qū)е碌鞍族e(cuò)誤折疊和分泌損傷，證明非必需β螺旋狀卷曲以及C－端β螺旋狀片段對(duì)蛋白正確折疊是必需的，而大部分P55結(jié)構(gòu)域?qū)τ赩ac A毒素活性都不是必需的［17］。

腫瘤壞死因子－α（TNF－α）是腫瘤誘發(fā)的關(guān)鍵細(xì)胞因子之一，能夠誘導(dǎo)TNF－α的Hp蛋白，TNF誘導(dǎo)蛋白（Tipα），在胃癌發(fā)生中起重要作用。Tipα從Hp中以二聚體形式分泌，亞單位間通過(guò)二硫鍵連接，能夠進(jìn)入胃黏膜上皮細(xì)胞，其單體包含兩個(gè)結(jié)構(gòu)域組成（復(fù)合結(jié)構(gòu)域及螺旋結(jié)構(gòu)域），由4個(gè)α－螺旋，3個(gè)β－片層以及多個(gè)環(huán)組成。每個(gè)單體都有一定程度的伸長(zhǎng)及彎曲，結(jié)構(gòu)揭示其DNA結(jié)合新的折疊方式，2個(gè)單體間螺旋1，2間環(huán)所形成的陽(yáng)離子表面對(duì)DNA結(jié)合非常重要［18］。

此外，通過(guò)構(gòu)建出缺少N端6個(gè)氨基酸殘基LQACTC的Tipα突變體，對(duì)缺失2個(gè)半胱氨酸C5和C7缺失突變體的晶體結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)，缺失后的Tipα具有一種新的延伸結(jié)構(gòu)，含有一個(gè)40?長(zhǎng)的α－螺旋，通過(guò)非共價(jià)鍵形成一個(gè)心型同源二聚體，這種折疊方式與Tipa同源二聚體非常相似，其獨(dú)特的二聚體形式對(duì)蛋白與蛋白間的相互作用以及Hp感染的致癌性機(jī)制提出新的觀(guān)點(diǎn)［19］。

4．3 金屬代謝相關(guān)因子 鐵是Hp生存的必需因子，參與到鐵代謝的蛋白均為重要的毒力因子。Hp鐵蛋白Hpf可控制菌體內(nèi)可溶鐵的含量，保護(hù)細(xì)菌不受到酸放大鐵毒性的損害。與其它鐵蛋白家族成員相似，Hp鐵蛋白也是以2，4亞單體球蛋白外鞘形式組裝，其中每個(gè)單位都折疊成4α－螺旋簇，在低含量鐵結(jié)合狀態(tài)下構(gòu)象無(wú)變化，但在中含量及高含量鐵結(jié)合狀態(tài)下，BC環(huán)及4折疊對(duì)稱(chēng)通道入口處的his149咪唑環(huán)發(fā)生明顯的構(gòu)象變化，表明鐵離子能與折疊通道中心結(jié)合，這與哺乳動(dòng)物鐵蛋白不同。這些不同狀態(tài)下Hpf晶體結(jié)構(gòu)的測(cè)定可以更好地理解鐵吸收及釋放的機(jī)制［20］，從而進(jìn)一步加深對(duì)Hp致病機(jī)制和慢性感染機(jī)制的認(rèn)識(shí)。

4．4 氧化應(yīng)激因子 過(guò)氧化物歧化酶（SOD）是氧化應(yīng)激的關(guān)鍵酶，Hp能產(chǎn)生一種SOD（Hp SOD），在2．4?分辨率下測(cè)定的SOD晶體結(jié)構(gòu)是由兩個(gè)相同亞單位組成的二聚體，每個(gè)單體含有一個(gè)鐵離子。它與大腸桿菌中的對(duì)應(yīng)酶間具有53%的序列相同性。與其它二聚化含鐵的SOD相比，包括金屬核心在內(nèi)的主要Fe－SOD活性位點(diǎn)都是保守的，二聚體界面的特定相互作用模式也非常保守。結(jié)構(gòu)差別主要集中在與亞單位界面較遠(yuǎn)的區(qū)域，其中最關(guān)鍵的是一個(gè)由延伸的，由α－螺旋組成的20個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的C端尾巴的存在，這個(gè)結(jié)構(gòu)可能成為一種新的結(jié)構(gòu)模型，推測(cè)這個(gè)延伸的C端可能與Hp SOD吸附細(xì)胞表面有關(guān)，Hp SOD可能在這個(gè)發(fā)生區(qū)域磷酸化［21］。

5 Hp蛋白晶體結(jié)構(gòu)與抗菌藥物設(shè)計(jì)

在研究Hp蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能過(guò)程中發(fā)現(xiàn)較多個(gè)潛在的抗菌藥物靶位，其中多數(shù)為代謝酶類(lèi)。例如，腈脒合酶（PAPT）在腈脒生物合成過(guò)程中起作用，它由N端β股結(jié)構(gòu)域及C端Rossmann類(lèi)似結(jié)構(gòu)域組成。兩個(gè)結(jié)構(gòu)域間有一個(gè)獨(dú)特的結(jié)合袋、大量非保守殘基以及一個(gè)大的埋入空間。它對(duì)細(xì)菌生存是必需的，因此基于其典型的PAPT序列及不同的構(gòu)象可作為潛在的抗菌藥物靶位［22］；此外還有丙二酸單酰輔酶A：?；d體蛋白轉(zhuǎn)酰酶（Malonyl－Co A：acyl carrier protein transacylase，MCAT），與其它物種的晶體結(jié)構(gòu)具有高度相似性，是高度保守酶，也可作為抗菌藥物的靶位［23］。

細(xì)菌L－天冬酰胺酶已經(jīng)用于治療兒童急性淋巴細(xì)胞白血病30多年了，其治療效應(yīng)基于它們能夠催化腫瘤必需氨基酸L－天冬酰胺轉(zhuǎn)變成L－天冬氨酸和氨。2種L－天冬酰胺酶，大腸桿菌及歐文菌屬，已經(jīng)作為抗白血病藥物廣泛應(yīng)用于臨床實(shí)驗(yàn)。但由于它們潛在的谷氨酰胺酶活性，L－天冬酰胺酶也能夠引起嚴(yán)重副反應(yīng)。Hp的L－天冬酰胺酶HPA具有可忽略的谷氨酰胺酶活性，結(jié)構(gòu)比對(duì)表明HPA與大腸桿菌的L－天冬酰胺酶結(jié)構(gòu)更加相似［24］，提示可能具有更好的藥物研發(fā)前景。

6 展 望

蛋白分子的功能特性主要取決于它獨(dú)特的三維空間結(jié)構(gòu)，X射線(xiàn)衍射是確定晶體三維結(jié)構(gòu)最可靠的方法，但獲得蛋白質(zhì)晶體仍是這一領(lǐng)域的主要技術(shù)瓶頸之一。Hp編碼蛋白中仍有大量蛋白，尤其是外膜蛋白，沒(méi)有獲得其結(jié)構(gòu)分析結(jié)果。Hp外膜蛋白在細(xì)菌定植及免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，其中幾種已經(jīng)鑒定為粘附素，與致病性相關(guān)。但由于膜蛋白的疏水性及表達(dá)量低等因素制約著結(jié)構(gòu)研究的發(fā)展。近來(lái)，隨著分子生物學(xué)先進(jìn)技術(shù)以及蛋白純化系統(tǒng)的應(yīng)用，使得獲得大量活性蛋白質(zhì)變得容易，這為蛋白晶體的生長(zhǎng)提供了基礎(chǔ)。目前蛋白結(jié)晶技術(shù)迅速發(fā)展，大量新技術(shù)與結(jié)晶新產(chǎn)品廣泛使用，例如Hampton Research及Qiagen等公司不斷推出蛋白晶體生長(zhǎng)條件篩選的試劑盒，建立了上千種不同篩選條件。脂立方相（LCP）法是逐漸發(fā)展起來(lái)的膜蛋白結(jié)晶方法，同時(shí)也產(chǎn)生了一系列立方相結(jié)晶試劑，確保全自動(dòng)地、高通量膜蛋白結(jié)晶。蛋白結(jié)構(gòu)的獲得不僅有助于理解單個(gè)蛋白作用的機(jī)制，對(duì)其作用配體篩選、免疫機(jī)理研究、抗菌藥物及疫苗的發(fā)展都具有重要的意義。

［1］黃金海，楊漢春．蛋白結(jié)晶技術(shù)在病毒學(xué)中的應(yīng)用［J］．動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2003，24（5）：1－3．

［2］Andrei P，Anne K，Dawn AI，et al．Helicobacter pylori Protein HP0222 Belongs to Arc／MetJ Family of Transcriptional Regulators［J］．Proteins，2005，59：303－311．

［3］Kyung DH，Sung JP，Sun BJ，et al．Solution structure of conserved hypothetical protein HP0892 from Helicobacter pylori．Proteins，2005，61：1114－1116．

［4］Lorenza S，Laura C，Gabriella Favaro，et al．Helicobacter pylori acidic stress response factor HP1286 is a YceI homolog with new binding specificity［J］．Febs J，2010，277：1896－1905．

［5］Nicola B，Laura C，Alberto T，et al．Structural and mutational analysis of Ten A protein（HP1287）from the Helicobacter pylori thiamin salvage pathway－evidence of a different substrate specificity［J］．Febs J，2009，276：6227－6235．

［6］Rong S，Christine M，Abdalin A，et al．Crystal structure of apo and metal－bound forms of the UreE protein from Helicobacter pylori：role of multiple metal binding sites［J］．Biochemistry，2010，49：7080－7088．

［7］Chiu LH，Jia HL，Wei CC，et al．Crystal structure of Helicobacter pylori formamidase AmiF reveals a cysteine－glutamate－lysine catalytic triad［J］．The J Biol Chem，2007，282（16）：12220－12229．

［8］Lucas L，Markus G．G，Peer REM．The Crystal structure of Helicobacter pylori Cysteine－rich protein B reveals a bovel fold for a penicillin－binding protein［J］．J Biol Chen，2002，277（12）：10187－10193．

［9］Ganesh N，David RH，Alex CT，et al．Structural similarity between the Dna A－binding proteins Hob A（HP1230）from Helicobacter pylori and Dia A from Escherichia coli［J］．Mol Microbiol，2007，65（4）：995－1005．

［10］Alessandro A，Laura C，Susana G，et al．Structural and enzymatic characterization of HP0496，a YbgC thioesterase from Helicobacter pylori［J］．Proteins，2008，72：1212－1221．

［11］Fran ois PD，Kieran AR，Michael CL，et al．The HP0256 gene product is involved in motility and cell envelope architecture of Helicobacter pylori［J］．BMC Microbiol，2010，10：106－123．

［12］Olivares D，Gisbert JP．Factors involved in the pathogenesis of Helicobacter pylori infection［J］．Rev Eep Enferm Dig，2006，98（5）：374－386．

［13］Noboru I，Carole C，Wayne LM，et al．Structural studies of FlaA1 from Helicobacter pylori Reveal the Mechanism for Inverting 4，6－Dehydratase Activity［J］．J Biol Chem，2006，281（34）：24489－24495．

［14］Schoenhofen IC，Lunin VV，Julien JP，et al．Structural and functional characterization of PseC，an aminotransferase involved in the biosynthesis of pseudaminic acid，an essential flagellar modification in Helicobacter pylori［J］．J BIOL CHEM，2006，281（13）：8907－8916．

［15］Kwok HL，Thomas KWL，Shannon WNA．Crystal structure of activated CheY1 from Helicobacter pylori［J］．J Bacteriol，2010，192（9）：2324－2334．

［16］Gangwer KA，Mushrush DJ，Stauff DL，et al．Crystal structure of the Helicobacter pylori vacuolating toxin p55 domain［J］．Pnas，2007，104（41）：16293－16298．

［17］Ivie SE，McClain MS，Scott Algood HM，et al．Analysis of a b－h(huán)elical region in the p55 domain of Helicobacter pylori vacuolating toxin［J］．BMC Microbiol，2010，10：60－70．

［18］Jang JY，Yoon HJ，Yoon JY，et al．Crystal structure of the TNF－α－Inducing protein （Tipα）from Helicobacter pylori：insights into its DNA－binding activity［J］．J Mol Biol，2009，392：191－197．

［19］Hideaki T，Toshiharu T，Hiroko U，et al．Structural basis for the Helicobacter pylori－carcinogenic TNF－a－inducing protein［J］．Biochem Biophysic Res Com，2009，388：193－198．

［20］Cho KJ，Shin HJ，Lee JH，et al．The crystal structure of ferritin from Helicobacter pylori reveals unusual conformational changes for iron uptake［J］．J Mol Biol，2009，390：83－98．

［21］Luciana E，Anke S，Rosa A，et al．The crystal structure of the superoxide dismutase from Helicobacter pylori reveals a structured C－terminal extension［J］．Biochimica et Biophysica Acta，2008，1784：1601－1606．

［22］Lu PK，Tsai JY，Chien HY，et al．Crystal structure of Helicobacter pylori spermidine synthase：A rossmann－Like fold with a distinct active site［J］．Proteins，2007，67：743－754．

［23］Zhang L，Liu Wz Xiao JF，et al．Malonyl－Co A：acyl carrier protein transacylase from Helicobacter pylori：Crystal structure and its interaction with acyl carrier protein［J］．Protein Sci，2007，16：1184－1192．

［24］Prathusha D，Anastassios CP．Structure of Helicobacter pylori L－asparaginase at 1．4A resolution［J］．Acta Cryst，2009，65：1253－1261．

R378．2

A

1002－2694（2012）02－0148－04

張建中，Email：zhangjianzhong＠icdc．cn

中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所診斷室，北京102206

2011－10－17；

2011－11－25