野生口蘑菌種分離及人工馴化

修翠娟

(遼寧省微生物科學研究院，遼寧朝陽122000)

野生口蘑是泛指一群生長在內(nèi)蒙古和河北等草原上生態(tài)習性相近的草原蘑菇。野生口蘑是一種十分珍貴的大型野生食用菌，含豐富的蛋白質(zhì)、維生素及鉀、鈣、鐵、磷等礦質(zhì)元素，菌肉肥厚，質(zhì)地細膩，郁香醇正，味道獨特鮮美，一直暢銷于國內(nèi)外市場，是我國寶貴的食用菌資源［1］。然而由于草原退化及人為過度采集等原因，其生境受到破壞，產(chǎn)量不斷下降。因此，在保護這一珍貴資源的同時，開展人工馴化栽培技術(shù)的研究，具有重要的學術(shù)價值和廣闊的開發(fā)前景。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1試驗菌種野生口蘑子實體采自內(nèi)蒙赤峰，經(jīng)遼寧省微生物菌種保藏中心分離并通過性狀鑒定初步定為傘菌目、口蘑科、口蘑屬［2］。

1.1.2 試驗藥品硫酸鎂、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、鹽酸硫胺素、葡萄糖、蔗糖、乳糖、淀粉、果糖、麥芽糖、甘露醇、甘油、蛋白胨、酵母膏、硫酸銨、硝酸銨、硝酸鉀、脲、牛肉膏。

1.2 方法

1.2.1 營養(yǎng)特性研究(碳氮源)［3］配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基:硫酸鎂0.5 g，磷酸二氫鉀0.5 g，磷酸氫二鉀0.5 g，鹽酸硫胺素10 mg，瓊脂20 g，蒸餾水1 000 mL。做碳源試驗時固定蛋白胨2 g，分別加入葡萄糖、蔗糖、乳糖、淀粉、果糖、麥芽糖、甘露醇、甘油20 g;做氮源試驗時固定葡萄糖20 g。每個試驗5個培養(yǎng)皿，121℃高壓滅菌30 min，用打孔器接種直徑0.5 cm的菌塊，25℃培養(yǎng)，1周后測量菌落大小，并觀察菌落及菌絲生長特征。

1.2.2 菌種馴化方法［4］采用不同培養(yǎng)基馴化。馴化培養(yǎng)基:①PSA培養(yǎng)基;②PSA+蛋白胨;③PSA+VB1;④PSA+VB1+蛋白胨;⑤PSA+硫酸鎂+磷酸二氫鉀。

1.2.3 生態(tài)特性研究(拮抗作用)拮抗菌為青霉和枯草芽胞桿菌，采用平板對峙法。

1.2.4 馴化栽培［5］栽培料:①發(fā)酵料，以羊糞、麥秸、棉籽殼為原料，添加生石灰、石膏和過磷酸鈣等輔料進行發(fā)酵。發(fā)酵后的栽培料分為滅菌和不滅菌2種方式，以雙孢菇為對照;②熟料，以羊糞、玉米稈、菌糠等為原料，121℃、滅菌1 h。栽培方法:采用箱式栽培方法，在40 cm×30 cm×30 cm紙箱內(nèi)開放培養(yǎng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌種碳氮源營養(yǎng)研究

由表1可知，蔗糖為該菌種的最佳碳源，菌絲較壯;在甘油上生長的菌絲細，但生長得快;淀粉、麥芽糖、葡萄糖、甘露醇為該菌種的較好碳源。氮源試驗結(jié)果表明，牛肉膏為該菌種的最佳氮源，菌絲較密、生長速度快，酵母膏、蛋白胨、硝酸銨為該菌種較好的氮源，脲對菌絲體有毒害作用。

表1 碳源對菌種生長的影響Table 1 Influence of carbon on the growth of culture

表2 氮源對菌種生長的影響Table 2 Influence of nitrogen on the growth of culture

2.2 菌種馴化

經(jīng)轉(zhuǎn)管純化及在不同培養(yǎng)基馴化培養(yǎng)，野生口蘑菌株在PSA培養(yǎng)基上生長速度快，菌絲較濃密(圖1)。在平板上生長的菌絲體出現(xiàn)菌絲扭結(jié)現(xiàn)象(圖2、圖3)。

2.3 菌種的拮抗作用

據(jù)文獻報道［6］，在口蘑蘑菇圈出菇環(huán)，土壤中其他細菌及真菌、放線菌生長受到明顯抑制，浸麻芽胞桿菌和德氏食酸菌卻大量產(chǎn)生，占明顯優(yōu)勢，本文實驗結(jié)果表明(圖4、圖5)，該菌菌絲能明顯抑制青霉的生長，和枯草芽胞桿菌有較好的相容性。

2.4 馴化栽培

發(fā)酵料試驗結(jié)果表明，口蘑無論在滅菌料和非滅菌料上都未見菌絲生長。對照菌種雙孢菇在未滅菌的發(fā)酵料上生長旺盛，經(jīng)覆土后出菇(圖6)。熟料試驗結(jié)果表明，口蘑在熟料上菌絲生長良好(圖7)，但覆土后，菌絲未能爬土，后期物料染菌。

該菌種經(jīng)過人工訓化后，菌絲的生長速度和菌絲的致密度有較大的改善，但和雙孢菇的菌絲相比，無論在麥粒上還是熟料上，菌絲不夠粗壯，仍然有一定的距離(圖8)。

圖8 野生口蘑在熟料上的生長情況Fig.8 Growth of mushroom on clinker

3 討論

野生口蘑菌種經(jīng)過人工訓化后，菌絲的生長速度和菌絲的致密度有較大的改善，但和雙孢菇的菌絲相比，無論在麥粒上還是熟料上，菌絲不夠粗壯，仍然有一定的差距。馴化栽培一直以來都是口蘑研究的焦點問題，許多試驗研究都圍繞這一主題而展開。口蘑的馴化栽培難度較大，欲獲得實質(zhì)性的突破還在于掌握其生長規(guī)律及生態(tài)習性。溫度因子是影響蒙古口蘑菌絲及子實體正常生長發(fā)育的關(guān)鍵因子，作為長期適應(yīng)低溫生態(tài)環(huán)境的結(jié)果，適當溫度的摸索將是馴化栽培的關(guān)鍵技術(shù)。本研究在菌種馴化時未對菌種進行不同溫度的恒溫及變溫馴化，可能導(dǎo)致出菇失敗?？谀⒕哂袊栏竦臓I養(yǎng)要求，因而培養(yǎng)基的篩選至關(guān)重要?？谀⒛⒐饺ν寥乐袃?yōu)勢微生物與口蘑的生物學關(guān)系有待深入探討，為口蘑的生態(tài)學研究及加速人工馴化栽培提供科學依據(jù)。

［1］ 吳恩奇，圖力古爾.蒙古口蘑研究進展［J］.中國食用菌，2007，26(4):3-5.

［2］ 卯曉嵐.中國大型真菌［M］.鄭州:河南科學技術(shù)出版社，2000.

［3］ 李林玉，李榮春.荷葉離褶傘菌絲體營養(yǎng)條件的初步研究［J］.中國食用菌，2005，(3):30-32.

［4］ 趙吉，邵玉琴.草原蒙古口蘑蘑菇圈特殊生態(tài)觀察［J］.食用菌學報，1992，11(2):146-149.

［5］ 李維國，常立民，趙永光.松茸半人工栽培的研究現(xiàn)狀［J］.微生物學雜志，2002，22(6):49-51.

［6］ 王歡，圖力古爾.三種鱗傘屬(Pholiota)真菌的菌絲生物學特性初步研究［J］.菌物研究，2006，4(2):6-10.