張秀梅 時(shí) 磊 王 海 王舒靖 樸正愛(ài)
胃腸道間質(zhì)瘤(gastrointestinal stromal tumors,GIST)是消化道常見(jiàn)的間葉源性腫瘤,起源于胃腸道Cajal間質(zhì)細(xì)胞(interstitial cells of Cajal,ICC),遺傳學(xué)上存在c-kit或血小板源性生長(zhǎng)因子受體A(platelet-derived growth factor receptor A,PDGFRA)基因激活突變,組織學(xué)上主要由梭形和(或)上皮樣細(xì)胞組成。本研究對(duì)61例GIST患者的腫瘤切除標(biāo)本進(jìn)行DOG-1檢測(cè),探討其在GIST診斷及預(yù)后中的意義。
收集我院2005年1月1日~2012年2月29日經(jīng)外科手術(shù)切除的食管、胃腸道、腸系膜及腹膜后并經(jīng)病理檢查證實(shí)為GIST的標(biāo)本61例,其中男性25例,女性36例,年齡21~80歲,中位年齡52歲。腫瘤位于胃29例,小腸12例,大腸 9 例,腸系膜7 例,腹膜后2例,食管2例。其中復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移13例(復(fù)發(fā)8例,肝轉(zhuǎn)移3例,腹膜轉(zhuǎn)移2例)。復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移病例經(jīng)病理、CT、B超、X光檢查4項(xiàng)中至少1項(xiàng)證實(shí)。同時(shí)收集我院外科手術(shù)切除的胃平滑肌瘤5例,神經(jīng)鞘瘤3例。根據(jù)2002年美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院NIH共識(shí)方案[1],將61例GIST分為極低度及低度危險(xiǎn)性21例,中度危險(xiǎn)性18例,高度危險(xiǎn)性22例。
采用免疫組織化學(xué)EnVision法,兔抗人DOG-1、鼠抗人CD117單克隆抗體及EnVision試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。將入選病例的原發(fā)灶病理蠟塊進(jìn)行常規(guī)切片, 0.01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液高溫高壓修復(fù),免疫組織化學(xué)染色。染色步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行,DAB顯色,蘇木精復(fù)染細(xì)胞核。正常胃腸黏膜組織作為對(duì)照,同時(shí)用PBS代替一抗做空白對(duì)照。DOG-1和CD117均為細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)棕黃色著色。陰性:細(xì)胞陽(yáng)性率<25%或腫瘤細(xì)胞不表達(dá);弱陽(yáng)性:細(xì)胞陽(yáng)性率25%~50%;中度陽(yáng)性:細(xì)胞陽(yáng)性率51%~75%;強(qiáng)陽(yáng)性:細(xì)胞陽(yáng)性率>75%。
采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 11.5進(jìn)行分析,率的比較采用χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.01為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
21例極低度及低度危險(xiǎn)性GIST中,DOG-1陽(yáng)性19例(90.5%),CD117陽(yáng)性20例(95.2%),其表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。40例中度及高度危險(xiǎn)性GIST中,CD117為強(qiáng)陽(yáng)性(100.0%),DOG-1陽(yáng)性39例(97.5%),表達(dá)差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。胃平滑肌瘤及神經(jīng)鞘瘤中DOG-1和CD117均為陰性,正常胃腸道黏膜組織中DOG-1和CD117均為陰性,空白對(duì)照組(PBS代替一抗)也均無(wú)表達(dá)。
DOG-1表達(dá)與GIST發(fā)生部位、腫瘤大小、分級(jí)和年齡無(wú)關(guān);13例復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移GIST中,3例均為DOG-1陰性,與GIST復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.01),見(jiàn)表1。
表1 DOG-1表達(dá)與GIST臨床病理特征的關(guān)系(例,%)
61例GIST中主要由梭形細(xì)胞和(或)上皮樣細(xì)胞按不同比例混合或單一組成。梭形細(xì)胞型細(xì)長(zhǎng),類似平滑肌細(xì)胞,呈束狀、編織狀或漩渦狀排列,部分呈柵欄狀排列,細(xì)胞核呈桿狀,兩端鈍圓或呈長(zhǎng)梭形;上皮樣細(xì)胞呈圓形、卵圓形或多邊形,呈彌漫狀或巢狀排列,胞質(zhì)豐富,部分出現(xiàn)胞質(zhì)空泡,呈印戒樣細(xì)胞。高度危險(xiǎn)性中腫瘤細(xì)胞多形性,核大,異型性明顯,核分裂象多見(jiàn)。
GIST是消化道常見(jiàn)的間葉源性腫瘤[2],占消化道腫瘤的0.1%~3%。以往被認(rèn)為是平滑肌瘤、平滑肌肉瘤或神經(jīng)鞘瘤,直到1983年研究發(fā)現(xiàn)這類腫瘤缺乏平滑肌細(xì)胞和施旺細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)和免疫表型特征,提出用GIST來(lái)命名此類腫瘤。
1998年首次發(fā)現(xiàn)GIST中表達(dá)KIT 蛋白和具有KIT基因突變[3],有學(xué)者認(rèn)為GIST可能起源于胃腸道Cajal間質(zhì)細(xì)胞(ICC)[4]。目前研究較多的是CD117和CD34、CD117是原癌基因c-kit的產(chǎn)物,是跨膜酪氨酸激酶受體,大約95%的GIST表達(dá)CD117[5]。大多數(shù)GIST中KIT高表達(dá)的同時(shí)伴隨KIT基因外顯子9、11、13或17突變[6,7],這種突變導(dǎo)致配體不依賴受體激活,在免疫組織化學(xué)水平同樣可以檢測(cè)出來(lái),這為證實(shí)GIST的診斷提供了非常有用的工具。本組研究61例GIST中極低度及低度危險(xiǎn)性腫瘤21例,其陽(yáng)性表達(dá)率為95.2%(20/21),中度及高度危險(xiǎn)性腫瘤40例,其陽(yáng)性表達(dá)率為100%(40/40),與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致[8]。
DOG-1基因是2004年West等[9]利用cDNA微陣列篩選出的1個(gè)選擇性高表達(dá)與GIST有關(guān)的基因,定位于人染色體11q13上的CCD1-EMS1位點(diǎn)。近來(lái)被認(rèn)為是鈣調(diào)控的氯離子通道蛋白[10]。這個(gè)基因在許多腫瘤,包括頭頸部、膀胱和乳腺腫瘤中存在擴(kuò)增。盡管在許多腫瘤中發(fā)現(xiàn)DOG-1表達(dá),但在GIST中的生物學(xué)功能和過(guò)表達(dá)機(jī)制尚不清楚。West等[9]提出ICC對(duì)DOG-1與KIT一樣起免疫反應(yīng),這提示DOG-1可能在受體激酶Ⅲ信號(hào)傳導(dǎo)通路中起作用。又有學(xué)者提出DOG-1可能是偶然發(fā)現(xiàn)的GIST表型標(biāo)記物,與KIT和PDGFRA信號(hào)通路無(wú)關(guān)[11]。DOG-1在KIT和PDGFRA突變的GIST中高表達(dá)[9,12],這些為伊馬替尼的治療提供重要的臨床價(jià)值,同時(shí)可能是GIST潛在的治療靶點(diǎn)。Espinosa等[13]對(duì)DOG-1與CD117進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)DOG-1是GIST更加敏感和特異的標(biāo)記物。而Miettinen等[12]研究了1168例不同部位和病理亞型的GIST及672個(gè)其它腫瘤及正常組織中DOG-1的表達(dá),發(fā)現(xiàn)GSIT中DOG-1和KIT的總體敏感性幾乎相同。本組研究中發(fā)現(xiàn)DOG-1無(wú)論在哪一級(jí)別的GIST都呈特異性的表達(dá),21例極低度及低度危險(xiǎn)組GIST,其陽(yáng)性表達(dá)率90.5%(19/21),40例中度及高度危險(xiǎn)組GIST,其陽(yáng)性表達(dá)率97.5%(39/40)。同時(shí)將DOG-1與CD117進(jìn)行比較觀察,發(fā)現(xiàn)在任何級(jí)別的GIST中DOG-1和CD117的表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。DOG-1作為診斷GIST的1個(gè)新的標(biāo)記物,目前文獻(xiàn)報(bào)道較少,其在GIST中表達(dá)的預(yù)后意義尚不十分清楚。本研究發(fā)現(xiàn)DOG-1的表達(dá)與腫瘤發(fā)生部位、大小、分級(jí)和年齡均無(wú)關(guān),而在13例復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移病例中DOG-1陰性3例,與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān),與文獻(xiàn)報(bào)道相一致[13,14]。這表明DOG-1在GIST的發(fā)展中起重要作用,可作為判斷GIST預(yù)后的潛在參考指標(biāo)。
綜上所述,DOG-1在大多數(shù)GIST中高表達(dá),對(duì)診斷GIST及判斷預(yù)后提供潛在參考價(jià)值。
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