105例鼻咽癌組織VEGF和存活蛋白表達的臨床意義

蔣 偉，張 成，羅 元，黃啟芳，朱小東

(1.桂林醫(yī)學院附屬醫(yī)院放療科，廣西桂林 541001；廣西醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院：2.放療科；3.病理科，南寧 530021)

血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是一種可促進血管生成的內皮細胞有絲分裂原[1]。在腫瘤血管生成的各個環(huán)節(jié)中起重要作用，其表達與腫瘤患者生存期、轉移有關。存活蛋白是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein，IAP)家族的一員[2]。在多種惡性腫瘤組織中呈高表達且與腫瘤細胞的分化增殖及浸潤轉移密切相關。本研究采用免疫組織化學方法檢測VEGF和存活蛋白在鼻咽癌及正常鼻咽黏膜組織中的表達，探討二者與鼻咽癌臨床生物學行為的相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料 病例選自廣西醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院放療科1998年1月至2000年12月，隨訪5年以上的105例鼻咽癌患者。所有標本均為放射治療前鼻咽腫物組織標本，經病理診斷為鼻咽低分化鱗癌，無放療禁忌證，有完整病歷資料。其中男83例，女22例；年齡15～72歲，中位43歲。臨床分期：Ⅰ期3例、Ⅱ期37例、Ⅲ期34例、Ⅳ期31例。其中T1、T2、T3、T4期分別為14、43、29、19例；N0、N1、N2、N3期分別為25、35、31、14例；M0、M1期分別為100、5例。另取10例正常鼻咽黏膜標本做對照。105例鼻咽癌患者均行根治性放療。采用直線加速器8MV-X線或Co60-γ線常規(guī)分割照射，5次/周，每次2 Gy。鼻咽部照射劑量65～80 Gy/6～8周。

1.2試劑與方法 本組實驗使用的一抗為鼠抗人VEGF、存活蛋白單克隆抗體，一抗、二抗、鏈霉卵白素-過氧化物酶(S-P)試劑盒和DAB試劑盒均購自福州邁新生物技術開發(fā)公司。S-P免疫組織化學法：石蠟切片經脫蠟、水化等常規(guī)處理，并進行抗原熱修復，按S-P法進行流程染色，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作陰性對照。

1.3結果判斷 由2位有經驗的病理醫(yī)生在不知道任何臨床和病理資料的情況下，對免疫組織化學切片結果進行判斷。觀察染色切片并計數10個具有代表性的選染色均勻的高倍視野，在400倍鏡下觀察著色細胞占視野細胞總數，<5%為陰性(-)，5%～25%為陽性(+)，25%～50%為(++)，>50%為(+++)。聯合檢測鼻咽癌患者VEGF和存活蛋白表達情況，以VEGF和存活蛋白同時為-時，為陰性；VEGF和存活蛋白同時++以上為高表達；二者其余的表達方式組合為低表達。

1.4隨訪 全部患者放療結束時鼻咽部肉眼檢查均無腫瘤殘留。生存時間自患者開始治療之日算起，隨訪截止日期為2005年12月31日。隨訪方式包括返院復查、電話和信訪。隨訪5～7年,失訪5例,失訪者自失訪之日起按死亡計算，隨訪率為95% (100/105)。

1.5統計學處理 采用SPSS13.0 統計軟件進行統計學處理,各指標間的相互關系采用χ2檢驗和Spearman秩相關分析，Kaplan-Meier 法描述各組的生存曲線，Log-rank 法行顯著性檢驗,以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1鼻咽癌組織VEGF和存活蛋白表達情況 105例鼻咽癌標本中，VEGF 染色可見細胞膜和細胞質染色，以細胞質染色為主； VEGF的表達情況：25例(-)、28例(+)、38例(++)、14例(+++)，陽性率為76%。存活蛋白染色可見細胞質和細胞核染色，以細胞核染色為主；存活蛋白的表達情況：44例(-)、25例(+)、18例(++)、18例(+++)，陽性率為58%。10例正常鼻咽黏膜組織VEGF和存活蛋白表達均為陰性，與鼻咽癌組織中陽性表達率比較，差異均有統計學意義(P<0.01)，見表1、封2圖1。

表1 VEGF和存活蛋白在鼻咽癌與正常鼻咽黏膜組織中的表達

2.2聯合檢測VEGF和存活蛋白與鼻咽癌臨床病理特征相關性比較 經Spearman相關分析，VEGF和存活蛋白的同時表達強度與鼻咽癌患者的年齡、T分期、TNM分期、顱底侵犯有明顯相關性(P<0.05)，見表2。

表2 聯合檢測VEGF和存活蛋白與鼻咽癌臨床病理特征相關性比較(n)

續(xù)表2 聯合檢測VEGF和存活蛋白與鼻咽癌臨床病理特征相關性比較(n)

2.3VEGF和存活蛋白在鼻咽癌組織中表達情況相關性比較 105例鼻咽癌患者組織中，VEGF和存活蛋白經S-P法檢測同時表達-18例、+11例、++9例、+++7例，經雙變量相關性分析，VEGF和存活蛋白呈正相關，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 鼻咽癌組織中VEGF和存活蛋白表達情況相關性比較(n)

圖2 聯合檢測鼻咽癌患者VEGF和存活蛋白

2.4VEGF和存活蛋白表達情況與生存率的關系 聯合檢測鼻咽癌患者VEGF和存活蛋白表達情況，陰性、低表達、高表達患者的5年生存率分別為77.8%、67.7%、45.5%；Log-rank檢驗陰性患者與高表達患者間生存率比較，差異有統計學意義(P<0.05)，見圖2。

3 討 論

3.1鼻咽癌組織中VEGF和存活蛋白表達的相關性 腫瘤的發(fā)生發(fā)展是個多基因參與的過程，癌基因之間或者癌基因與抑癌基因之間相互調控，是癌變過程中的關鍵事件之一。O′Connor等[3]利用VEGF刺激存活蛋白低表達的靜止期血管內皮細胞，實驗結果表明VEGF誘導存活蛋白表達為血管新生中維持內皮細胞的生存能力提供了先決條件。Mesri等[4]利用存活蛋白的反義核苷酸抑制血管內皮細胞中存活蛋白的表達，發(fā)現VEGF保護內皮細胞功能減低。Tran等[5]研究發(fā)現，存活蛋白可有效地維持微小血管網的結構，促進的內皮細胞保護功能，抵抗化療藥物對血管內皮細胞的致凋亡作用。在國內，秦建偉等[6]在研究乳腺癌存活蛋白定量表達時，發(fā)現癌組織中存活蛋白表達水平與VEGF有明顯相關性。結合國外的基礎研究，作者選取了致癌機制完全不同的VEGF和存活蛋白作為研究對象，結果發(fā)現鼻咽癌組織中VEGF表達與存活蛋白表達呈顯著正相關，提示二者在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中有可能起著協同作用，彼此之間可能存在著相互調控機制，可進一步展開研究。

3.2聯合檢測鼻咽癌組織中VEGF和存活蛋白的臨床意義 由于腫瘤組織中存活蛋白的高表達對增生的血管內皮起著保護作用，作者聯合檢測了鼻咽組織中VEGF和存活蛋白的表達情況，發(fā)現VEGF和存活蛋白的表達強度與鼻咽癌患者的年齡、T分期、TNM分期、顱底侵犯有明顯相關性,說明VEGF和存活蛋白的表達與腫瘤發(fā)展有一定關系。同時，比較了鼻咽癌組織中VEGF和存活蛋白同時陰性、低表達、高表達的生存率，結果顯示，二者陰性表達的患者5年生存率優(yōu)于二者高表達患者，差異有統計學意義(P=0.036)。腫瘤的形成是一個多基因變異、多步驟、多階段的過程，不同的腫瘤基因之間彼此相互調控，形成一個巨大的調控網絡，所以在腫瘤標志物與腫瘤相關性研究中，需要將不同的腫瘤分子指標放在一起研究，選擇彼此最好的搭配。在作者的前期研究中，分別比較了VEGF和存活蛋白與鼻咽癌患者的生存率，發(fā)現二者不同表達對生存率沒有明顯的影響。本研究中發(fā)現VEGF和存活蛋白表達都是陰性的患者5年生存率明顯優(yōu)于均為高表達的患者，低表達患者5年生存率居于二者之間，準確地反映了腫瘤的生物學規(guī)律?？梢赃@樣說，選擇的癌基因越多且癌基因在癌變通路中的作用越重要，得到的結果就越能準確的反映腫瘤的預后。

有學者在甲狀腺癌、舌癌、大腸癌、肺癌、食管癌、宮頸癌等的研究中，得到了與本研究相似的結果[7-12]。Luo等[13]在喉鱗癌的研究的中發(fā)現VEGF和存活蛋白均為低表達患者的生存率較二者均高表達患者的生存率要高，為獨立影響預后因素，對預后的判斷有重要價值。周慷等[14]研究了存活蛋白和VEGF在多發(fā)性骨髓瘤中的表達及它們之間表達的相關性后，認為二者可作為判斷多發(fā)性骨髓瘤預后的重要參考指標，聯合檢測存活蛋白和VEGF的表達對了解多發(fā)性骨髓瘤腫瘤血管形成的機制有一定意義。劉敏等[15]探討存活蛋白和VEGF在涎腺腺樣囊性癌組織中的表達及二者的相關性，認為存活蛋白和VEGF可能參與涎腺腺樣囊性癌的發(fā)生、發(fā)展。

總之，聯合檢測VEGF和存活蛋白的表達，能夠較好地判斷鼻咽癌的預后情況。

[1]Ferrara N,Henzel WJ.Pituitary follicular cells secrete a novel heparin-binding growth factor specific for vascular endothelial cells[J].Biochem Biophys Res Commun,1989,161(2):851-858.

[2]Ambrosini G，Adida C，Altieri DC.A novel anti-apoptosis gene，survivin expressed in cancer and lymphoma[J].Nature Med,1997,3(8):917-921.

[3]O′Connor DS，Schechner JS，Adida C，et al.Control of apoptosis during angiogenesis by survivin expression in endothelial cells[J].Am J Pathol，2000,156(2):393-398.

[4]Mesri M，Morales-Ruiz M，Ackermann EJ,et al.Suppression of vascular endothelial growth factor-mediated endothelial cell protection by surviving targeting[J].Am J Pathol，2001,158(5):1757-1765.

[5]Tran J,Master Z,Yu J,et al.A role for survivin in chemoresistance of endothelial cells mediated by VEGF[J].Proc Natl Acad Sci USA,2002,99(7):4349-4354.

[6]秦建偉，張建，唐金海,等.乳腺癌組織中survivin表達水平的定量檢測及其臨床價值[J].中國腫瘤臨床,2008,35(24):1407-1410.

[7]Zhang HY,Meng X,Du ZX,et al.Significance of survivin,caspase-3 and VEGF expression in thyroid carcinoma[J].Clin Exp Med，2009,9(3):207-213.

[8]王智明，管新明，魏巍,等.Survivin在舌鱗癌中的表達及其與血管內皮生長因子的相關性[J].口腔頜面外科雜志,2008，18(2)：92-94.

[9]歐陽曉暉,牛劍祥,趙海平,等.大腸癌組織中及survivin與VEGF的表達及其意義[J].內蒙古醫(yī)學院學報,2008,30(5):313-317.

[10]張勝輝，王軼靈，王明松,等.血管內皮生長因子表達與肺癌預后的關系[J].重慶醫(yī)學,2010，39(16):2157-2158.

[11]謝頌平，黃杰.Survivin、VEGF在食管鱗癌中表達的臨床意義[J].四川醫(yī)學,2009,30(11):1692-1694.

[12]唐郢，周琦，葉學正,等.survivin基因與子宮頸癌發(fā)生及預后的關系[J].重慶醫(yī)學,2007,36(14):1400-1402.

[13]Luo R,Kong WJ,Wang YJ.Elevated expressions of Survivin and VEGF proteins are strong independent predictors of survival in advanced nasopharyngeal carcinoma larynx[J].J Transl Med,2008,6(10):661-665.

[14]周慷，鄧建川，婁世鋒,等.多發(fā)性骨髓瘤survivin與VEGF表達的相關性及臨床意義[J].腫瘤防治研究,2009,36(7):593-595.

[15]劉敏，李萍，蘭顯國,等.Survivin和VEGF在涎腺腺樣囊性癌中的表達及臨床意義[J].重慶醫(yī)學,2010,39(10):1231-1234.