張福田 賴?yán)m(xù)文 張 偉
胸腹水脫落細(xì)胞學(xué)瘤包石蠟切片免疫組織化學(xué)染色的應(yīng)用
張福田 賴?yán)m(xù)文 張 偉
(廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院病理科,廣東510010)
胸腹水脫落細(xì)胞學(xué);瘤包石蠟切片;免疫組織化學(xué)染色
胸腹水脫落細(xì)胞學(xué)涂片做免疫組織化學(xué)染色,因具有取材方便、易行,病人痛苦小等優(yōu)點(diǎn)而適用于臨床[1]。脫落細(xì)胞學(xué)涂片免疫組織化學(xué)染色技術(shù)最需要注意的問題是背景染色和涂片粘附的牢固程度。因?yàn)楸尘暗拇嬖跁?huì)影響陽(yáng)性結(jié)果的判斷,尤其是抗原表達(dá)少的弱陽(yáng)性病例;而涂片涂的不好、厚薄不均、粘貼不牢,都將會(huì)在免疫組織化學(xué)染色操作時(shí)把涂上的細(xì)胞沖洗或修復(fù)掉片,造成染色失?。?]。為解決上述問題,我們采用了脫落細(xì)胞學(xué)瘤包石蠟切片免疫組織化學(xué)染色技術(shù),經(jīng)多次反復(fù)實(shí)驗(yàn)證明,瘤包石蠟切片免疫組織化學(xué)染色結(jié)果,背景清晰,陽(yáng)性物明顯突出,易于診斷,細(xì)胞粘附牢固,極少出現(xiàn)細(xì)胞被沖洗及修復(fù)脫落掉片的現(xiàn)象,保證了檢測(cè)的成功率和陽(yáng)性率。獲得滿意效果,現(xiàn)報(bào)道如下。
1.標(biāo)本
收集我院送檢的新鮮胸腹水標(biāo)本,自然沉淀后肉眼見有沉淀物的標(biāo)本。
2.方法
2.1 留取新鮮胸腹水標(biāo)本靜置60min,去上清液,留取近瓶底液體約100ml,混勻后取液體于4個(gè)5ml離心管內(nèi)離心(3000r/min)后去除上清液,取各管沉淀物匯總于一個(gè)離心管內(nèi)(可以取少量沉淀物制成涂片)。加無水乙醇混勻,重新離心(3000r/min),去上清液,取出離心沉淀物用通透性好的紙將其包裹后放入10%的中性甲醛中固定,放入包埋盒內(nèi)后經(jīng)LEICA PELORIS全自動(dòng)組織脫水機(jī)進(jìn)行常規(guī)脫水、透明、浸蠟。
2.2 從包埋盒內(nèi)取出沉淀物用Thermo Shan-don HISTOCENTRE 3石蠟包埋機(jī)將其包成蠟塊,再用Thermo FINESSE E+切片機(jī)切片,切片前應(yīng)先去除蠟塊周圍過多的石蠟,然后切成3-4μm的切片,撈片用涂膠片。60℃烤箱中烤片過夜。(可以多切多撈一張片做常規(guī)HE染色圖1)。
2.3 采用免疫組織化學(xué)Envision法染色,選用北京中杉金橋生物有限公司的一抗有:CK、CK7、Vim等。二抗試劑盒為Dako Envision通用多聚物酶標(biāo)檢測(cè)系統(tǒng)。按試劑盒說明書操作進(jìn)行。DAB顯色,蘇木素復(fù)染,切片脫水、透明、封片。
脫落細(xì)胞學(xué)瘤包石蠟切片免疫組織化學(xué)染色后,細(xì)胞形態(tài)清晰,易于觀察,陽(yáng)性結(jié)果定位準(zhǔn)確,背景清晰,呈棕黃色,未見有非特異性染色的現(xiàn)象出現(xiàn),少見有細(xì)胞沖洗及修復(fù)脫落掉片的現(xiàn)象[3](圖2和圖3)。保證了檢測(cè)的成功率和提高了對(duì)惡性腫瘤的陽(yáng)性檢出率。
常規(guī)胸腹水涂片厚,細(xì)胞易重疊,細(xì)胞量少,有時(shí)難以看到足夠診斷的形態(tài)學(xué)改變。細(xì)胞涂片免疫組織化學(xué)染色常因內(nèi)源性血漿蛋白以及紅細(xì)胞干擾,使背景出現(xiàn)非特異性染色,對(duì)惡性腫瘤的陽(yáng)性檢出率和鑒別診斷影響很大。應(yīng)用胸腹水瘤包石蠟切片技術(shù)可以得到細(xì)胞數(shù)量豐富的HE切片。切片可以復(fù)制,資料容易保存。胸腹水瘤包石蠟切片免疫組織化學(xué)染色所檢測(cè)的病例陽(yáng)性部位明顯,顏色鮮艷,位于細(xì)胞膜及細(xì)胞漿,定性和定位準(zhǔn)確,背景清晰干凈,未見有非特異性染色的現(xiàn)象出現(xiàn),少見有細(xì)胞脫落掉片的現(xiàn)象。陽(yáng)性結(jié)果明顯,成功率高,容易讓醫(yī)生做出明確的診斷。
在細(xì)胞學(xué)標(biāo)本處理上,一定要對(duì)送檢胸腹水即時(shí)處理,盡量收集有效成分,固定及時(shí),形態(tài)保存完好,抗原物質(zhì)的抗原性不丟失、不擴(kuò)散、不被破壞[2]。由于胸腹水離心后標(biāo)本易散開,必須用通透性好的紙將其包好,防止漏出來污染其它組織。
在做免疫組織化學(xué)染色時(shí),注意要用涂膠片,切片在烤片后才不至于在高壓抗原修復(fù)時(shí)掉片[2]。沉淀物包埋做免疫組織化學(xué)染色在胸腹水的診斷中對(duì)明確腫瘤類型、組織來源和鑒別診斷起重要作用,但也需要結(jié)合形態(tài)學(xué)特點(diǎn)做診斷[2],故做免疫組化的同時(shí),最好多切一張片做常規(guī)HE染色對(duì)照觀察。
[1]朱曉梅,鮑揚(yáng)漪,何皖偉,等.細(xì)胞涂片免疫組織化學(xué)染色體會(huì)。臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,1999;15(5):469
[2]鄭曉玲,邵云,李曉兵,等.免疫組織化學(xué)染色方法在胸腹水沉積物檢測(cè)中的應(yīng)用初探。軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊,2007,31(2)194-195
[3]蔡俊杰,丁彥青,趙菲.脫落細(xì)胞涂片免疫組織化學(xué)技術(shù)有關(guān)問題的探討。中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志,1999,8(4)
圖 版 說 明
圖1 瘤包石蠟切片常規(guī)HE染色 (×100)
圖2 瘤包石蠟切片CK免疫組織化學(xué)染色(+)(×100)
圖3 瘤包石蠟切片Vim免疫組織化學(xué)染色(+)(×100)
EXPLANATION OF FIGURES
Fig.1 Tumor cells paraffin-embedden conventional slice HE staining HE×100
Fig.2 Tumor cells paraffin-embedden immunohistochemical staining Pan-CK is positive EnVision×100
Fig.3 Tumor cells paraffin-embedden immunohistochemical staining Vimentin is positive EnVision×100
R448.20
A
10.3870/zgzzhx.2011.05.018
2011-03-09
2011-06-26
張福田,男(1982年),漢族,技師。