藥品生產(chǎn)企業(yè)無菌檢查室現(xiàn)狀及存在問題和改進(jìn)建議

王聞珠

江蘇省食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)證審評中心，南京 210002

無菌檢查是藥品生產(chǎn)企業(yè)判斷其無菌制劑或無菌原料藥是否無菌的一種方法，雖然它存在一定的局限性，但仍是無菌產(chǎn)品合格放行或質(zhì)量監(jiān)督的一個重要項目。無菌檢查室的管理涉及到無菌檢查操作人員、無菌檢查環(huán)境、菌種、培養(yǎng)基、驗證等多個方面的管理，其管理水平也往往反映了該藥品生產(chǎn)企業(yè)GMP的實施水平。筆者曾參加了省內(nèi)多家藥品生產(chǎn)企業(yè)無菌檢查室的專題調(diào)研，了解到各藥品生產(chǎn)企業(yè)無菌檢查室管理水平參差不齊，尚存在一些普遍的或共性的問題。為此，結(jié)合《中國藥典》（2010年版）的相關(guān)要求，從以下六個方面進(jìn)行探討，并作簡要的分析，旨在為藥品生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)一步規(guī)范無菌檢查工作提供參考。

1 現(xiàn)狀及存在問題

1.1 人員培訓(xùn)

藥品生產(chǎn)企業(yè)專門從事無菌檢查工作的相關(guān)人員均進(jìn)行了微生物知識、藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范、《中華人民共和國藥典》附錄、無菌檢驗操作規(guī)程等的培訓(xùn)，并建有培訓(xùn)檔案，但培訓(xùn)的針對性不強(qiáng)：沒有根據(jù)微生物學(xué)科的特殊性、結(jié)合無菌檢查這一具體的崗位設(shè)定培訓(xùn)內(nèi)容；培訓(xùn)和考核方式單一，主要是書面培訓(xùn)、試卷考核；操作技能考核無記錄；對無菌檢驗人員從事無菌檢查工作的實際情況缺少再次的確認(rèn)或考核等。

1.2 培養(yǎng)基

藥品生產(chǎn)企業(yè)使用的培養(yǎng)基主要為脫水培養(yǎng)基，主要從藥檢所、培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家或進(jìn)口代理商處購買，購買的培養(yǎng)基均附有相應(yīng)的檢驗合格報告，并儲存在培養(yǎng)基標(biāo)簽規(guī)定的條件下。雖然《中華人民共和國藥典》附錄對培養(yǎng)基的配制、滅菌、儲存、質(zhì)量控制等均有明確的規(guī)定，但不少企業(yè)常常忽略一些問題：未規(guī)定啟封后的脫水培養(yǎng)基的保存條件及使用有效期；未測定培養(yǎng)基滅菌前后的pH值；采用直火加熱的方法溶解培養(yǎng)基；培養(yǎng)基滅菌過程無記錄；配制分裝好的培養(yǎng)基標(biāo)識內(nèi)容不全，如未標(biāo)明配制批號、配制日期或配制人等，僅憑經(jīng)驗根據(jù)培養(yǎng)基的性狀、顏色及其深淺或分裝的容器等進(jìn)行判斷；配制好的培養(yǎng)基置于無菌檢查室內(nèi)保存，但由于無菌檢查室未使用連續(xù)運行的空氣凈化系統(tǒng)，難以保證培養(yǎng)基的儲存要求；個別企業(yè)尚未開展培養(yǎng)基的靈敏度檢查等。

1.3 菌種

藥品生產(chǎn)企業(yè)購買的菌種來源主要有兩個：一是從藥品檢驗所購買斜面的標(biāo)準(zhǔn)菌株（一般為第2-3代）定期轉(zhuǎn)種傳代；二是從美國菌種保藏中心（ATCC）或中國藥品生物制品檢定所醫(yī)學(xué)菌種保藏中心（CMCC）標(biāo)準(zhǔn)菌株的凍干粉，制成甘油管或瓊脂斜面管后保存在相應(yīng)的條件下并定期轉(zhuǎn)種傳代。企業(yè)均建立了菌種的管理規(guī)程，對菌種的申購、貯存、傳代及傳代次數(shù)、培養(yǎng)、保存和滅活等內(nèi)容進(jìn)行了規(guī)定，但內(nèi)容較簡單，可操作性不強(qiáng)。個別藥品生產(chǎn)企業(yè)對菌種的管理尚不夠規(guī)范，如銅綠假單孢菌斜面在冰箱內(nèi)保存；自行傳代的菌株標(biāo)識不全，如缺傳代日期、代數(shù)或傳代人等內(nèi)容；在傳代過程中未進(jìn)行菌種的形態(tài)學(xué)觀察；未規(guī)定菌懸液保存時間等。此外，大多數(shù)藥品生產(chǎn)企業(yè)尚不具備對菌種的純度、特性等關(guān)鍵指標(biāo)進(jìn)行確認(rèn)的條件。

1.4 實驗室的布局和運行

無菌檢查實驗室均能按照無菌檢查工作的需求配備了培養(yǎng)基及實驗用具準(zhǔn)備（包括滅菌）、培養(yǎng)（包括實驗結(jié)果觀察）、菌種貯存等功能間或區(qū)域，無菌檢查亦按照《中國藥典》（2010年版）的規(guī)定在萬級背景下的超凈臺或生物安全柜中進(jìn)行操作，且無菌檢查室與微生物限度檢查室和陽性對照室三室分開，有的還采用了獨立的空氣凈化系統(tǒng)和單獨分開的人流、物流。但是現(xiàn)場檢查仍發(fā)現(xiàn)部分企業(yè)尚存在不少缺陷：尚未開展空氣凈化系統(tǒng)的再驗證工作；采用不連續(xù)開啟的空氣凈化系統(tǒng)未對自凈時間進(jìn)行驗證；無菌檢查時只對超凈臺進(jìn)行了動態(tài)檢測，未對無菌檢查操作人員及操作環(huán)境進(jìn)行動態(tài)監(jiān)控。

1.5 設(shè)備

無菌檢查工作涉及培養(yǎng)基的滅菌設(shè)備、集菌儀、培養(yǎng)箱、超凈臺等主要設(shè)備，對這些設(shè)備的驗證以及日常檢測、管理也是無菌檢查室的一項重要工作。發(fā)現(xiàn)不少企業(yè)使用的壓力蒸汽滅菌器雖采用自動控制程序，但無自動記錄設(shè)施，不能監(jiān)控具體的滅菌時間和滅菌溫度；滅菌設(shè)備驗證內(nèi)容不全，性能確認(rèn)中僅進(jìn)行了生物指示劑的驗證；培養(yǎng)箱無連續(xù)記錄溫度的設(shè)施或溫度超標(biāo)報警裝置；未定期對超級凈化層流臺進(jìn)行高效過濾器的檢漏等。

1.6 文件

藥品生產(chǎn)企業(yè)建立了包括人員、培養(yǎng)基、菌種、設(shè)備、實驗室安全、無菌檢驗的操作方法等一系列與無菌檢查工作相關(guān)的文件，但從現(xiàn)場抽查的情況看，發(fā)現(xiàn)企業(yè)對文件的重要性認(rèn)識不足，具體表現(xiàn)在：培養(yǎng)基配制等標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程描述不詳細(xì)，缺乏可操作性；高壓滅菌器等設(shè)備的使用記錄內(nèi)容不全；無菌檢驗記錄簡單，未記錄所使用的設(shè)備、菌種、培養(yǎng)基等關(guān)鍵信息；配制好的培養(yǎng)基無編號，導(dǎo)致培養(yǎng)基的配制、滅菌、檢驗、使用等整個環(huán)節(jié)難于追溯；無菌檢驗方法驗證資料中未記錄集菌儀的轉(zhuǎn)速、缺沖洗液的沖洗方法和用量的確認(rèn)等[1]；未對培養(yǎng)基的滅菌程序進(jìn)行驗證。

此外，在現(xiàn)場調(diào)研中發(fā)現(xiàn)大多數(shù)藥品生產(chǎn)企業(yè)無偏差記錄；無菌檢查結(jié)果未出現(xiàn)陽性或即便出現(xiàn)了陽性結(jié)果亦未進(jìn)行系統(tǒng)的分析和詳細(xì)的記錄。

2 建 議

2.1 加強(qiáng)檢驗人員的培訓(xùn)與考核

一是根據(jù)從事無菌操作人員所具備的微生物專業(yè)知識、操作技能、實踐經(jīng)驗等實際情況，結(jié)合生產(chǎn)品種的特性，開展有針對性的培訓(xùn)。新的從事無菌檢查操作人員必須進(jìn)行大量的無菌檢驗操作練習(xí)，并通過規(guī)定批次產(chǎn)品的無菌檢查試驗的考核，合格后才能上崗；上崗后亦要定期進(jìn)行再培訓(xùn)，以便更新相關(guān)知識、回顧以前工作中的偏差和不足[2]。

二是選擇培訓(xùn)教師時不僅要考慮到培訓(xùn)的內(nèi)容，還要注重其資質(zhì)。培訓(xùn)教師不僅要有優(yōu)秀的無菌檢查操作技能，還要有良好的口頭表達(dá)和評價能力[2]，以避免考核流于形式。

三是定期對檢驗人員的實際工作情況進(jìn)行評估，如回顧分析無菌檢驗人員記錄情況、因操作技能不過硬造成假陽性的幾率等。這不僅有助于企業(yè)制定培訓(xùn)計劃，還能讓員工清楚地了解自己的工作情況，同時也是一種考核的方式。

2.2 加強(qiáng)無菌實驗室的管理

一是藥品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)根據(jù)《中國藥典》（2010年版）附錄中有關(guān)微生物實驗的指導(dǎo)原則和企業(yè)長期的實驗室管理實踐，修訂完善所有與無菌檢查工作相關(guān)的管理規(guī)程、標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程、檢驗方法等，從文件上規(guī)范實驗室的管理，并定期監(jiān)督其執(zhí)行情況。

二是規(guī)范實驗室的各項記錄，對實驗過程中的原始數(shù)據(jù)、出現(xiàn)偏差情況或日常檢查結(jié)果等應(yīng)及時、詳實的記錄，如無菌檢驗原始記錄應(yīng)載有使用的設(shè)備、菌種、培養(yǎng)基等的關(guān)鍵信息；培養(yǎng)基配制的原始記錄應(yīng)包含或可追溯到所用的脫水培養(yǎng)基的相關(guān)信息、實際稱量數(shù)、所使用設(shè)備、滅菌程序參數(shù)、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制（外觀、pH值、無菌性檢查、靈敏度檢查）等相關(guān)信息。一旦無菌檢查出現(xiàn)偏差或異常情況，這些基礎(chǔ)性的信息即是開展調(diào)查的重要依據(jù)。

2.3 規(guī)范實驗室偏差或異常結(jié)果的處理

從事無菌檢查工作，難免出現(xiàn)偏差或異常情況，如何對這些問題處理是無菌檢查工作的一個難點。以無菌檢查結(jié)果出現(xiàn)陽性為例，筆者認(rèn)為從以下幾個環(huán)節(jié)入手：首先，應(yīng)正確看待這一異常情況，不隱瞞、不盲目復(fù)檢，規(guī)范的記錄是開展工作的前提條件；其次，應(yīng)立即組織相關(guān)人員展開全面、徹底的調(diào)查，調(diào)查內(nèi)容涉及本次無菌檢查的儀器、所用培養(yǎng)基等材料、人員的無菌檢驗操作、無菌檢查環(huán)境的動態(tài)監(jiān)控、污染菌的鑒定等所有相關(guān)因素，分析出現(xiàn)陽性結(jié)果的原因，判斷污染菌的來源，必要時延伸到生產(chǎn)環(huán)節(jié)；最后，根據(jù)調(diào)查過程中所獲得的有關(guān)信息進(jìn)行偏差分析，決定是否需要重新取樣復(fù)試，提出有針對性的糾偏措施，并在調(diào)查報告中對產(chǎn)品的無菌性進(jìn)行評價。此外，整個偏差處理過程應(yīng)有詳細(xì)的記錄，對一些分離到的有價值的菌株應(yīng)妥善保存。

[1] 李玉芹.淺談目前無菌檢查和微生物限度檢查存在的問題[J].中國藥事,2007,21(12)：1011-2.

[2] 潘友文.現(xiàn)代醫(yī)藥工業(yè)微生物實驗室質(zhì)量管理與驗證技術(shù)[M].北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社,2004:87.