白及不同提取部位對(duì)小鼠止血活性實(shí)驗(yàn)

吳久健，孟岳良，鄒儷華,邱 彥

(1.解放軍第37醫(yī)院，四川 雅安 625000；2.成都軍區(qū)聯(lián)勤部衛(wèi)生部，四川 成都 610015；3.總參管理保障部保健處，北京 100034；4.第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院，上海 200433)

·藥理學(xué)·

白及不同提取部位對(duì)小鼠止血活性實(shí)驗(yàn)

吳久健1，孟岳良2，鄒儷華3,邱 彥4

(1.解放軍第37醫(yī)院，四川 雅安 625000；2.成都軍區(qū)聯(lián)勤部衛(wèi)生部，四川 成都 610015；3.總參管理保障部保健處，北京 100034；4.第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院，上海 200433)

目的確定白及的止血活性部位，為其止血活性成分的篩選提供線索和依據(jù)。方法用70%乙醇(EtOH)對(duì)白及原藥材進(jìn)行滲漉提取，然后，依次用石油醚(Pet)、乙酸乙酯(EtOAc)、正丁醇(n-BuOH)對(duì)醇浸膏進(jìn)行萃取，分別制得Pet部分、EtOAc部分、n-BuOH部分和H2O部分，通過測(cè)定小鼠凝血時(shí)間和出血時(shí)間，考察其活性部位。結(jié)果n-BuOH部分和H2O部分具有止血作用，而EtOAc部分具有延長(zhǎng)凝血、出血時(shí)間作用。結(jié)論白及中具有止血作用的活性成分主要存在于n-BuOH部分和H2O部分，而EtOAc部分具有活血作用。

白及；出血；止血；小鼠；活性

中藥白及系蘭科植物白及Bletillastriata(Thunb.) Reichb. f. 的干燥塊莖，多年生草本，是歷版《中國(guó)藥典》收載的常用中藥之一。臨床上廣泛用于治療咳血、吐血、外傷出血、瘡瘍腫毒、皮膚皸裂、肺結(jié)核吐血、潰瘍病出血等病癥，療效顯著?；瘜W(xué)研究表明，白及主要含有聯(lián)芐類、二氫菲類、聯(lián)菲類、苷類及白及多糖等多種化合物，但是對(duì)白及止血作用的活性成分未見報(bào)道。筆者對(duì)白及進(jìn)行了提取并研究了其石油醚部分、乙酸乙酯部分、正丁醇部分和水部分對(duì)小鼠止血作用的實(shí)驗(yàn)，為進(jìn)一步研究其止血活性成分提供指導(dǎo)。現(xiàn)將方法和結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1．1藥品 白及藥材購(gòu)于貴州獨(dú)山縣藥材公司，經(jīng)第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室張漢明教授鑒定為Bletillastriata(Thunb.) Reichb. f.的干燥塊莖；云南白藥膠囊為云南白藥集團(tuán)股份有限公司產(chǎn)品。

1．2動(dòng)物 昆明種小鼠，體重18～22 g，雌雄各半，第二軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(滬)2002-0006。

1．3樣品液制備 白及1 000 g，70%乙醇滲漉提取制成浸膏，依次用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取，回收有機(jī)溶劑，真空干燥(60 ℃)，制成干浸膏，并稱定各提取物，計(jì)算各部分得率。臨用前，用0.1%-CMC配成適宜濃度的溶液。

1．4對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響(毛細(xì)玻管法) 小鼠100只，共分空白對(duì)照組(等體積的0.1%-CMC溶液)、云南白藥組(即陽(yáng)性對(duì)照組，0.33 g/kg)和石油醚組、乙酸乙酯組、正丁醇組及水提物組4個(gè)給藥組，每個(gè)給藥組分高、低兩個(gè)劑量組(50 g生藥/kg， 25 g生藥/kg)，試驗(yàn)小鼠每個(gè)劑量組10只，雌雄各半。每日灌胃給藥1次，連續(xù)10 d。末次給藥后 30 min，用內(nèi)徑1 mm、長(zhǎng)10 cm的毛細(xì)玻管插入小鼠內(nèi)毗球后靜脈叢取血，深約4～5 mm，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)再縮回。自血流入管內(nèi)開始記時(shí)，每隔30 s折斷毛細(xì)玻管一小截，檢查有無血凝絲出現(xiàn)。記錄從毛細(xì)玻管采血到出現(xiàn)血凝絲的時(shí)間，此即為凝血時(shí)間。

1．5對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響(玻片法) 分組及給藥情況同1.4，末次給藥后 30min，用眼科彎鑷迅速摘去一側(cè)眼球即有血液流出，于載玻片上滴1滴血，血滴直徑約5 mm，立即記時(shí)，每隔30s用清潔大頭針自血滴邊緣向里輕輕挑動(dòng)1次，并觀察有無血絲挑起。從采血開始至挑起血絲止，所歷時(shí)間即為凝血時(shí)間。

1．6對(duì)小鼠出血時(shí)間的影響 分組及給藥情況同1.5，末次給藥后 30 min，將小鼠固定，露鼠尾于外，用手術(shù)刀片切割左側(cè)尾靜脈1/2處(嚴(yán)格控制切割深度)，待血液自行溢出開始計(jì)時(shí)，每隔30 s用濾紙吸去血滴一次，直至血流自然停止(濾紙吸時(shí)無血)為止，即為出血時(shí)間。

1．7統(tǒng)計(jì)處理 利用SPSS10.0軟件進(jìn)行ANOVA分析差異的顯著性。

2 結(jié)果

2．1毛細(xì)玻管法測(cè)定對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響 白及正丁醇部位高劑量顯著縮短小鼠凝血時(shí)間，水溶性部位高劑量也能縮短小鼠凝血時(shí)間，石油醚部位對(duì)小鼠凝血時(shí)間無明顯影響，而乙酸乙酯部位高劑量可以顯著延長(zhǎng)凝血時(shí)間。結(jié)果見表1。

表1 白及各提取部位對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響

注：1)P<0.05，2)P<0.01，與空白對(duì)照組比較。

2．2玻片法測(cè)定對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響 白及正丁醇部位低劑量、高劑量均顯著縮短小鼠凝血時(shí)間，水溶性部位高劑量顯著縮短小鼠凝血時(shí)間，石油醚部位對(duì)小鼠凝血時(shí)間無明顯影響，而乙酸乙酯部位高劑量可以顯著延長(zhǎng)凝血時(shí)間。結(jié)果見表1。

2．3對(duì)小鼠出血時(shí)間的影響 白及正丁醇部位高劑量顯著縮短小鼠出血時(shí)間，水溶性部位高劑量可以縮短小鼠出血時(shí)間，石油醚部位對(duì)小鼠凝血時(shí)間無明顯影響，而乙酸乙酯部位高劑量可以延長(zhǎng)凝血時(shí)間。結(jié)果見表2。

表2 白及各提取部位對(duì)小鼠出血時(shí)間的影響

注：1)P<0.01，與空白對(duì)照組比較。

3 討論

中藥白及為蘭科多年生草本植物的地下塊莖，是一種常用中藥。白及性澀微寒，味甘辛微苦，有收斂止血，消腫生肌的功效。頤慶平等用白及治療燒傷創(chuàng)面，發(fā)現(xiàn)其止血效果優(yōu)于立血止、凝血酶、立止血、醫(yī)用生物蛋白膠，并能促進(jìn)創(chuàng)面愈合[4]。藥理研究證實(shí)，白及可縮短凝血時(shí)間，但對(duì)其作用機(jī)制及有效成分研究較少。國(guó)外主要是日本對(duì)白及的化學(xué)成分作了一些研究，但活性成分的報(bào)道較少，尚未明確其發(fā)揮藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。

筆者利用現(xiàn)代中藥化學(xué)的方法對(duì)白及進(jìn)行了提取、分離，得到了不同的極性部位；研究了各極性部位對(duì)小鼠凝血功能的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)白及水溶性部位和正丁醇部位可顯著縮短小鼠凝血時(shí)間和出血時(shí)間，石油醚部位對(duì)小鼠凝血時(shí)間和出血時(shí)間無明顯影響，而乙酸乙酯部位可顯著抑制小鼠凝血時(shí)間和出血時(shí)間。陸波等[5]報(bào)道了白及正丁醇提取部位和水溶性部位可顯著升高腺苷二磷酸(ADP) 誘導(dǎo)的家兔血小板最大聚集率,而乙酸乙酯提取部位可顯著抑制ADP 誘導(dǎo)的血小板聚集,而石油醚提取部位無顯著影響。本研究結(jié)果與陸波等[5]的一致，進(jìn)一步說明白及水溶性部位和正丁醇部位是其止血作用的主要有效部位，而乙酸乙酯部位表現(xiàn)出活血活性?！夺t(yī)林慕要·藥性》中記載白及“斂肺散淤，降逆氣”，《福建藥物志》中記載白及“補(bǔ)肺生肌，化淤止血”，白及的藥性是止血活血藥，本研究結(jié)果也證白及是一味止血活血藥。三個(gè)部位具體有效成分及作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步深入研究。

[1] 劉松敏,張曉霞,安治勛.白及粉治療上消化道出血30例[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2000,28(1):27.

[2] 蔡春浩.中藥白芨膠減少胃、十二指腸潰瘍?cè)俪鲅R床觀察[J].浙江醫(yī)學(xué),1996,18(4):225.

[3] 吳震西.白及止血生肌效著[J].中醫(yī)雜志,1997,38(7):389.

[4] 姬慶平,周明德,劉 芳.燒傷供皮區(qū)創(chuàng)面應(yīng)用白芨粉止血效果觀察[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1999,17(6):359.

[5] 陸 波,徐亞敏,張漢明，等.白及不同提取部位對(duì)家兔血小板聚集的影響[J]. 解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),2005, 21(5):330.

2010-12-12

[修回日期] 2011-03-16

EffectsofdiferentextractsfromBletillacolloidonhemostasisactivityinmice

WU Jiu-jian1，MENG Yue-liang2，ZOU Li-hua3,QU Yan4

(1. 37th Hospital of PLA, Ya'an 625000,China ；2.The Health Ministry of Chengdu Military Command, Chengdu 610015，China；3. Health Care Department of Management and Logistic Support Department, General Staff Headquarter of PLA, Beijing 100082,China;4.School of Pharmacy, Second Militany Medical Unversity, Shanghai 200433,China)

ObjectiveTo determine the active position ofBletillacolloidand offer references to the seleciton of its active composition.MethondsThe crudeBletillacolloidwas extracted by 70% ethanol permeating , then the petroleum ether extract,ethyl acetate exctract ,n-butyl alcohol extract and water extract were exctracted from alcohol extract in turn by petroleum,ethyl acetate,n-butyl alcohol extraction. The active position was determined by measuring the time of mice blood coagulation and hemorrhage.ResultsN-butanol extract and water extract fromBletillacolloidhad hemostasis effect，ethyl acetate extract had the effect of prolonging the time of blood coagulation and hemorrhage.ConclusionN-butanol extract and water extract fromBletillacolloidwas major active extracts played a part in hemostasis, ethyl acetate extract had the effect of invigoration the circulation of blood.

Bletillacolloid；hemorrhage；hemostasis；mouse

吳久健(1971-)，男，副主任藥師.E-mail:clwsb@163.com.

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1006-0111(2011)03-0206-03