• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    家蠶核型多角體病毒基因與抗病育種

    2011-11-18 05:50:02孫波周洪英吳宏麗
    湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2011年16期
    關(guān)鍵詞:育種家蠶抗性

    孫波 周洪英 吳宏麗

    摘要:家蠶(Bombyx mori L.)對家蠶核型多角體病毒(B. mori Nuclear polyhedrosis virus,BmNPV) 抗性為不完全顯性,在常染色體上由主效基因控制,在性染色體上有微效基因的協(xié)同作用??梗拢恚危校窒嚓P(guān)基因的研究,為生產(chǎn)上進(jìn)行防治提供了理論基礎(chǔ)。RNA干涉(RNA interference,RNAi)技術(shù)被廣泛應(yīng)用于基因功能研究,為BmNPV抗性品種培育提供了新的方法。隨著分子標(biāo)記技術(shù)的不斷完善和應(yīng)用,在家蠶抗性品種輔助選育方面也取得了一定的成果,并且有獲得家蠶抗性新品種的報道。

    關(guān)鍵詞:家蠶;家蠶核型多角體病毒;抗性;基因;育種

    中圖分類號:S884.5+1;Q78;S882.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:0439-8114(2011)16-3249-04

    Gene of Bombyx mori Nuclear Polyhedrosis Virus and Disease Resistance Breeding

    SUN Bo,ZHOU Hong-ying,WU Hong-li

    (Institute of Industrial Crops, Hubei Academy of Agricultural Sciences, Wuhan 430064, China)

    Abstract: The resistance of Bombyx mori to B. mori Nuclear polyhedrosis virus(BmNPV) was incomplete dominance,and was controlled by major gene on autosome and minor gene in sex chromosomes. The study on correlated gene of BmNPV enriched the theoretical foundation of disease prevention in production. The RNA interference technology was used extensively in research of gene function and provided a new method for breeding of BmNPV resistant variety. As the improving and application of molecular marker, some achievement in assisted selection of B. mori L. was obtained and some new BmNPV resistant varieties were reported.

    Key words: Bombyx mori L.; BmNPV; resistance; gene; breeding

    家蠶核型多角體病毒(Bombyx mori L. Nuclear polyhedrosis virus,BmNPV)是昆蟲病毒史上首先發(fā)現(xiàn)的病毒,屬于桿狀病毒科,包涵體亞科;它引起的家蠶核型多角體病毒病是養(yǎng)蠶業(yè)三大病毒病中危害最為嚴(yán)重的一種。該病在世界養(yǎng)蠶國家常呈暴發(fā)態(tài)勢,傳染性極強(qiáng),難以控制,危害最為嚴(yán)重,常造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。蠶業(yè)界多年來一直在尋找抗病基因,以闡明抗性機(jī)理、培育抗性品種,目前在很多領(lǐng)域已取得了一定的進(jìn)展。

    1傳統(tǒng)抗BmNPV品種選育

    家蠶遺傳學(xué)試驗表明,家蠶對BmNPV的抗性,無論是經(jīng)創(chuàng)傷感染或經(jīng)口感染,不同的品種存在著較大的差異[1]。家蠶對BmNPV抗性為不完全顯性,在常染色體上由主效基因控制,在性染色體上有微效基因的協(xié)同作用存在[2],但抗性主基因至今無法鑒定。

    傳統(tǒng)的抗BmNPV品種選育,多通過添毒試驗,獲得具有該病毒抗性基因的品系,然后通過基因轉(zhuǎn)育的方法獲得抗性品種;或者通過轉(zhuǎn)基因的方法獲得抗性品種。在選育抗BmNPV家蠶品種時,首先找到抗性很強(qiáng)的品種做親本材料,再將抗性導(dǎo)入經(jīng)濟(jì)性狀優(yōu)良的家蠶品種中,同時必須實行多代連續(xù)經(jīng)口接種BmNPV以進(jìn)行個體和蛾區(qū)(系統(tǒng))選擇;配制雜交組合時,中國系統(tǒng)品種、日本系統(tǒng)品種兩方都應(yīng)有強(qiáng)抗性的親本,并且即使抗性品種(系統(tǒng))大體穩(wěn)定或育成,也還必須不斷地進(jìn)行BmNPV接種以強(qiáng)化抗性的選擇。作為生產(chǎn)用的抗性雜交組合,其母種一代有必要再進(jìn)行BmNPV接種的抗性選擇,以保持其抗性。

    朱勇等[3]以10個家蠶原種和2個家蠶雜交品種為材料,采用機(jī)率分析法研究了不同家蠶品種對BmNPV的抗性差異。結(jié)果表明,不同家蠶品種對BmNPV的抗性差異達(dá)到了極顯著水平??剐灾饕芪⑿Ф嗷蚩刂?,并具有偏父性遺傳現(xiàn)象,而且日本系統(tǒng)品種的抗性比中國系統(tǒng)品種強(qiáng);這與1963年易文仲的研究報道一致,錢荷英等的報道也證實了這一點(diǎn)[4],并且雜交F1代對BmNPV的抗性存在較強(qiáng)的雜種優(yōu)勢。劉震等[5]對6個家蠶品種中腸消化酶活性與家蠶對BmNPV病毒抗性進(jìn)行了比較與分析,結(jié)果表明,中腸消化酶活性越強(qiáng)的抗性越強(qiáng),呈顯著的正相關(guān)關(guān)系,可以把家蠶對BmNPV抗性與中腸消化酶活性的關(guān)系應(yīng)用到家蠶抗性品種的選育中,把測定家蠶中腸消化酶活性作為選育和鑒定抗BmNPV病毒家蠶品種的一種輔助方法。

    2抗BmNPV相關(guān)基因研究進(jìn)展

    1999年美日科學(xué)家合作完成了BmNPV(T3株)的全基因組測序,共鑒定了136個開放閱讀框(ORF),其中包括了許多BmNPV繁殖的關(guān)鍵基因,如DNA解旋酶(DNA helicase)、DNA復(fù)制酶(DNA pol)、衣殼蛋白(Polyhedrin)等[6]。DNA解旋酶在病毒侵染家蠶的極早期表達(dá),而病毒的早期表達(dá)基因更容易受到宿主因子的影響[7]。BmNPV的DNAhel基因與舞毒蛾核型多角體病毒(Lymantria dispar L. Nuclear polyhedrosis virus,LdNPV)的hrf-1基因和苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒(Actographa californica M. Nuclear polyhedrosis virus,AcNPV)的p147基因為同源基因,是病毒的宿主域因子。各種病毒重組試驗證明,只要擁有了對應(yīng)的宿主域因子,就可以在對應(yīng)的宿主中繁殖,反之則不能繁殖[8,9]。楊金宏等[10]根據(jù)GenBank公布的BmNPV(13株)序列,設(shè)計引物對其DNA解旋酶基因的核心結(jié)構(gòu)域進(jìn)行了PCR擴(kuò)增,結(jié)果成功克隆了該基因,并利用雙酶切亞克隆構(gòu)建了酵母雙雜交誘餌載體PGBKT7。試驗證明重組誘餌載體不能自激活,可以作為誘餌進(jìn)行蛋白結(jié)合試驗,該研究為抗BmNPV的家蠶品種鑒定提供了依據(jù)。

    BmNPV的基因庫為L33180,這對于家蠶核型多角體病毒的研究有很大的幫助。其中P10基因啟動子控制BteryIA(b)截短基因,在AcNPV多角體基因上游ECOR V位點(diǎn)克隆構(gòu)建有包膜(OCU+)的重組病毒I,可以將AcNPV宿主域擴(kuò)展至家蠶等。P10基因是一個極晚期高表達(dá)的非必需結(jié)構(gòu)基因,用它取代OCU基因(多角體蛋白基因)構(gòu)建轉(zhuǎn)移載體,將使重組病毒的包涵體外殼完整保留,適于作為基因工程病毒殺滅劑,具有較好的應(yīng)用前景。P10基因與多角體形態(tài)發(fā)生及多角體膜的形成有關(guān),可以為生產(chǎn)上進(jìn)行家蠶核型多角體病毒病的防治提供理論基礎(chǔ)。

    3利用RNAi技術(shù)抗BmNPV研究進(jìn)展

    1995年,Sui等[11]在研究線蟲parl基因功能時,首次發(fā)現(xiàn)雙鏈RNA(dsRNA)能抑制特定基因的功能。1998年,Fire等[12]將dsRNA抑制特定基因表達(dá)的現(xiàn)象,正式命名為RNA干涉(RNA interference,RNAi),隨后在許多生物中都相繼發(fā)現(xiàn)存在RNAi現(xiàn)象。RNAi技術(shù)被廣泛應(yīng)用于基因功能研究,成為近年來發(fā)展應(yīng)用最迅速的分子生物學(xué)技術(shù),為家蠶核型多角體病毒抗性品種的培育提供了新的方法。

    2004年,Isobe等[13]第一次報道了利用RNAi技術(shù)增強(qiáng)了轉(zhuǎn)基因細(xì)胞及家蠶對BmNPV的抗性。在以BmNPV重要的晚期表達(dá)因子lef-1為靶基因的RNAi試驗中,成功建立了表達(dá)lef-1雙鏈RNA的轉(zhuǎn)基因BmN細(xì)胞系,在轉(zhuǎn)基因細(xì)胞及家蠶中均抑制了BmNPV的增殖,但是并沒有降低感染病毒家蠶的死亡率。徐穎等[14]將體外轉(zhuǎn)錄的與DNA解旋酶基因和DNA聚合酶相對應(yīng)的dsRNA轉(zhuǎn)染到了家蠶培養(yǎng)細(xì)胞的BmN中,成功抑制了BmNPV的復(fù)制。夏定國等[15]以BmNPV復(fù)制必需的極早期基因ie-1和細(xì)胞釋放型病毒CRV入侵關(guān)鍵基因gp64為靶序列,分別人工設(shè)計并體外轉(zhuǎn)錄出dsRNA I1(438 bp)和dsRNA G1(337 bp),用家蠶培養(yǎng)細(xì)胞BmN研究目標(biāo)dsRNA對BmNPV復(fù)制、增殖的抑制效果。結(jié)果表明,dsRNA I1能有效地抑制BmNPV在BmN細(xì)胞中的增殖,最大抑制效果使培養(yǎng)液中的病毒滴度(TCID)比對照降低了104.30倍;dsRNA G1能顯著地抑制新形成的病毒粒子的細(xì)胞侵染能力,最高可使培養(yǎng)液中的病毒滴度降低103.17倍,這為進(jìn)一步通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)進(jìn)行家蠶病毒病防治研究建立了技術(shù)基礎(chǔ)。gp64是細(xì)胞出芽型病毒的囊膜蛋白,對BmNPV的細(xì)胞間傳播起關(guān)鍵作用。如果抑制了gp64的表達(dá),理論上就可以抑制BmNPV的繁殖。夏定國等[16]在體外合成dsRNA試驗中,通過病毒滴度試驗、實時定量RT-PCR法研究了gp64基因的不同區(qū)域、不同長度與RNAi效果的關(guān)系,結(jié)果表明,供試的6個dsRNA的最大抑制效果相當(dāng)(滴度TCID50的最大抑制差值為4.00左右),經(jīng)RNAi不同時間點(diǎn)的gp64 mRNA表達(dá)水平均明顯出現(xiàn)了下調(diào)(P<0.01),其中48 h的gp64 mRNA的表達(dá)量約為對照的1/300。位于gp64 ORF的1390~1499位點(diǎn)(G3-3)是RNAi的較佳靶位點(diǎn),為進(jìn)一步構(gòu)建與基因序列互補(bǔ)的RNAi質(zhì)粒載體提供了依據(jù)。

    黃科等[17]將BmNPV的DNA聚合酶基因、蛋白激酶(PK1)基因以及bro-d和orf1629基因的部分編碼片段,分別以其反向重復(fù)的形式與家蠶Actin3啟動子連接,構(gòu)建了基于piggyBac轉(zhuǎn)座子載體的轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體,通過顯微注射于家蠶卵中,獲得了36~107個G1蛾區(qū),得到了20~23頭轉(zhuǎn)基因陽性家蠶。經(jīng)Southern雜交及RT-PCR分析表明,BmNPV的4個反向重復(fù)片段都已經(jīng)導(dǎo)入了家蠶基因組中,并且可以進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。攻毒試驗結(jié)果表明,BmNPV的DNA聚合酶基因和PK1基因反向重復(fù)片段對病毒的增殖有抑制作用,從而使家蠶對BmNPV具有一定的抗性。而BmNPV的bro-d和orf1629基因反向重復(fù)片段對病毒的增殖沒有抑制作用。在培養(yǎng)細(xì)胞中,導(dǎo)入BmNPV的DNA polymerase、DNA helicase以及IEl、gp64、lef-1等基因的dsRNA,都使BmNPV的復(fù)制得到顯著的抑制。利用轉(zhuǎn)基因家蠶持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)與BmNPV的復(fù)制必需基因同源的dsRNA,有可能增強(qiáng)家蠶對BmNPV的抗性,進(jìn)而選育出高抗性的品種。

    RNAi技術(shù)是近幾年興起的一項更有效、更特異、更徹底的轉(zhuǎn)錄后基因沉默技術(shù),利用RNAi技術(shù),破壞并抑制與病毒的宿主細(xì)胞識別蛋白、基因組復(fù)制因子、病毒結(jié)構(gòu)蛋白等相關(guān)基因mRNA的翻譯,是目前真核生物病毒病分子技術(shù)治療的一個最新策略。

    4從蛋白質(zhì)組水平上研究家蠶對BmNPV的抗性

    目前,家蠶抗BmNPV的研究主要是在致病機(jī)理、傳染途徑、DNA分子標(biāo)記和轉(zhuǎn)錄水平等方面,家蠶蛋白質(zhì)組水平研究還在剛起步階段。蔡克亞等[18]利用遺傳學(xué)原理,通過雜交和回交的方法,建立了家蠶抗BmNPV、感BmNPV以及近等基因系模型,利用2-D電泳和MALDI TOF/TOF MS質(zhì)譜技術(shù),從蛋白質(zhì)組水平上研究家蠶對BmNPV的抗性。結(jié)果獲得了家蠶高抗NB、高感306、近等基因系BC8五齡起家蠶血淋巴液蛋白質(zhì)差異表達(dá)譜,分別獲得了180、190、187個蛋白點(diǎn),其中80%的蛋白點(diǎn)集中在等電點(diǎn)5~9范圍之內(nèi)。從3塊凝膠上共獲得明顯差異蛋白點(diǎn)l2個,由質(zhì)譜鑒定出5種蛋白,其中氨基?;福ǎ粒恚椋睿铮幔悖欤幔螅澹﹥H出現(xiàn)在抗性品系NB、近等基因系圖譜中,感性品系沒有出現(xiàn),初步推測是家蠶抗BmNPV特有蛋白,為首次報道。針對特定病毒基因的轉(zhuǎn)基因RNAi技術(shù),可使家蠶獲得對該病毒的抗性,因而有望成為今后家蠶抗病育種的新手段。

    5分子標(biāo)記輔助育種研究進(jìn)展

    遺傳標(biāo)記是基因組研究的重要內(nèi)容,是構(gòu)建物種遺傳圖譜的基礎(chǔ)。根據(jù)家蠶對BmNPV抗性遺傳規(guī)律的特殊性,陳克平等[2]提出了常染色體上NN主基因和性染色體上Z+Z+修飾基因的控制假設(shè),并得到試驗的驗證。利用近等基因系尋找抗性分子標(biāo)記,其交配方式不同,可分別構(gòu)建NN、Z+Z+、NNZ-Z+ 3種近等基因系,同時提出了F2群體尋找分子標(biāo)記的交配方式。目前,已有多項分子標(biāo)記技術(shù)用于家蠶基因組的研究,并構(gòu)建了幾種家蠶分子標(biāo)記遺傳圖譜。劉曉勇等[19]在含有抗核型多角體病毒病主效基因的家蠶品系NB和高感品系306及其近等基因系BC9中,采用500個RAPD隨機(jī)引物,分別在各個品系的DNA混合物中進(jìn)行擴(kuò)增以篩選分子標(biāo)記,獲得了與家蠶抗BmNPV病有關(guān)的3個分子標(biāo)記,它們分別是OPF-072023、OPJ-131300、OPM-161200。其中OPF-072023標(biāo)記通過各回交代檢測,證明獲得的標(biāo)記真實、可靠;又對該分子標(biāo)記的片段進(jìn)行克隆、測序;通過該片段的生物信息學(xué)分析,意外地在家蠶Z染色體上發(fā)現(xiàn)了一個逆轉(zhuǎn)位子的編碼序列,值得進(jìn)一步深入研究。

    近年來,隨著分子標(biāo)記技術(shù)的不斷完善,已經(jīng)迅速地被應(yīng)用于動植物新品種的選育過程中;在家蠶抗性品種輔助選育方面也取得了一定的成果,并且有獲得抗性家蠶新品種的報道。姚勤等[20]對家蠶抗核型多角體病毒病以不同的雜交方式,構(gòu)建了3種近等基因系,用RAPD技術(shù)篩選出了抗病主基因連鎖分子標(biāo)記OPA-18700和感病連鎖分子標(biāo)記OPY-11400;同時在群體中驗證了抗性分子標(biāo)記的有效性[21],并利用我國家蠶種質(zhì)資源中發(fā)現(xiàn)的高抗BmNPV的品系NB和高感品系306,組配了近等基因系。采用RAPD技術(shù)獲得分子標(biāo)記,將標(biāo)記轉(zhuǎn)換成SCAR(Sequence characterized amplified region)標(biāo)記,利用SCAR標(biāo)記開展了家蠶抗性新品種的輔助育種選擇,獲得了家蠶抗BmNPV新品種。曹錦如等[22]利用分子標(biāo)記技術(shù)向家蠶實用品種中導(dǎo)入核型多角體病毒病抗性基因,結(jié)果發(fā)現(xiàn)已報道的分子標(biāo)記在不同品種間表現(xiàn)出差異,與抗性性狀并非完全相關(guān)。添毒結(jié)合標(biāo)記檢測,篩選出抗性品種多化N和敏感性的實用品種春華,將其作為育種素材,又從特定品種多化N中獲得了特異性連鎖片段。通過組配近等基因系,結(jié)合添毒試驗,在雜交組合BC3的F2代抗性個體中明顯檢測到了該標(biāo)記,初步表明該分子標(biāo)記具有一定的可靠性。

    6展望

    家蠶核型多角體病毒病危害嚴(yán)重,半個多世紀(jì)以來,人們對該病害的病原類型、侵染途徑、預(yù)防方法、家蠶品種抗性、遺傳規(guī)律,育種方法等諸多方面進(jìn)行了研究。目前在生產(chǎn)上,以防為主、綜合防治、培育對病原有較強(qiáng)抗性的家蠶新品種一直都是人們的努力方向。但是,由于家蠶對BmNPV的抗性為不完全顯性,既受常染色體上的主效基因控制,又受性染色體上的微效基因協(xié)同作用,加之環(huán)境因素的影響,使傳統(tǒng)的雜交育種方法難以育出實用性強(qiáng)的家蠶品種。

    近年來,現(xiàn)代生物技術(shù)飛速發(fā)展,為家蠶抗病育種提供了理論基礎(chǔ)和新的技術(shù)途徑,并且已經(jīng)有利用分子標(biāo)記技術(shù)培育出家蠶抗BmNPV新品種的報道。但是,由于受家蠶的抗性遺傳規(guī)律和品種選育的要求限制,在短時間內(nèi)還難以得到穩(wěn)定、優(yōu)良的抗性品種。隨著生物技術(shù)的發(fā)展,相信在家蠶抗性品種培育方面會有更大的進(jìn)步。

    參考文獻(xiàn):

    [1] 陳春平,林昌麒. 家蠶對核型多角體病的抗性及遺傳規(guī)律的研究[J]. 蠶業(yè)科學(xué),1996,22(3):160-164.

    [2] 陳克平,魯成,向仲懷,等. 家蠶抗核型多角體病分子標(biāo)記篩選的遺傳基礎(chǔ)[J]. 西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2001,23(3):196-199.

    [3] 朱勇,魯成,陳萍,等. 家蠶對核型多角體病毒(NPV)抗性的遺傳學(xué)研究[J]. 西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,1998,20(2):100-103.

    [4] 錢荷英,徐安英,林昌麒,等. 家蠶對核型多角體病毒病抗性及遺傳規(guī)律的研究[J]. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2006,29(4):77-79.

    [5] 劉震,鮑先巡,尤征英,等. 家蠶對BmNPV抗病性與中腸消化酶活性的關(guān)系[J]. 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2009,36(3):489-492.

    [6] GOMI S, MAJIMA K, MAEDA S. Sequence analysis of the genome of Bombyx mori L. nucleopolyhedro virus[J]. Journal of General Virology,1999,80:1323-1337.

    [7] KAZUHIRO OKANOB,TORU SHIMADAC,KAZUEI MITAD,et al. Comparative expressed-sequence-tag analysis of differential gene expression profiles in BmNPV-infected BmN cells[J]. Virology,2001,282(2):348-356.

    [8] HIROKI ISHIKAWA, TAKASHI OGASAWARA, MOTOKO IKEDA, et al. A recombinant Bombyx mori L. nucleopolyhedro virus possessing hrf-1 gene replicates in nonpermissive Lymantria dispar IPLB-Ld652Y cell line[J]. Journal of Insect Biotechnology and Sericology,2006,75(1):31-38.

    [9] CHEN C J,QUENTIN M E,BRENNAN L A,et al. Lymantria dispar nucleopolyhedron virus hrf-1 expands the larval host range of autographa californica nucleo polyhedron virus[J]. Journal of Virology,1998,72(3):2526-2531.

    [10] 楊金宏,王代鋼,盧從德,等. BmNPV DNA解旋酶基因酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建[J]. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2010,41(2):161-163.

    [11] SUI G C,SOOHOO C,AFFAR E B,et al. A DNA vector-based RNAi technology to suppress gene expression in mammalian cells[J]. Proc Natl Aead Sci USA,2002,99(8):5515-5520.

    [12] FIRE A, XU S Q, MONTGOMERY M K, et al. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegant[J]. Nature,1998,391:806-811.

    [13] ISOBE R, KOJIMA K, MATSUYAMA T, et al. Use of RNAi technology to confer enhanced resistance to BmNPV on transgenic silkworms[J]. Archives of Virology,2004,149(10): 1931-1940.

    [14] 徐穎,朱成鋼,金勇豐,等. dsRNA對家蠶核型多角體病毒(BmNPV)復(fù)制的抑制作用[J]. 科學(xué)通報,2004,49(11):1073-l078.

    [15] 夏定國,張國政,王文兵,等. dsRNA對家蠶核型多角體病毒復(fù)制增殖的抑制效果[J]. 蠶業(yè)科學(xué),2006,32(2):206-210.

    [16] 夏定國,張國政,王文兵,等. gp64基因相應(yīng)dsRNA對家蠶核型多角體病毒(BmNPV)增殖的抑制[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2007, 40(12):2882-2887.

    [17] 黃科,李春峰,甘進(jìn)鋒, 等. 利用轉(zhuǎn)基因RNA干涉提高家蠶對BmNPV的抗性初探[J]. 蠶業(yè)科學(xué),2009,35(2):308-313.

    [18] 蔡克亞,陳克平,劉曉勇,等. 家蠶抗BmNPV品系與感性品系血淋巴液蛋白質(zhì)組的差異分析[J]. 生物工程學(xué)報,2008,24(2):285-290.

    [19] 劉曉勇,姚勤,陳克平. 利用RAPD技術(shù)篩選家蠶抗核型多角體病分子標(biāo)記[J]. 江蘇大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2004,25(1):17-20.

    [20] 姚勤,劉曉勇,陳克平,等. 家蠶抗核型多角體病分子標(biāo)記篩選[J]. 生命科學(xué)研究,2002,6(4):322-325.

    [21] 姚勤,劉曉勇,唐旭東,等. 家蠶抗核型多角體病毒病分子標(biāo)記輔助育種[J]. 分子植物育種,2005,3(4):537-542.

    [22] 曹錦如,周文林,翁宏飚,等. 家蠶抗核型多角體病毒病分子標(biāo)記輔助新品種選育研究[J]. 蠶桑通報,2008,39(3):19-22.

    猜你喜歡
    育種家蠶抗性
    家蠶原原種“871”“872”種性變化分析
    一個控制超強(qiáng)電離輻射抗性開關(guān)基因的研究進(jìn)展
    抗BmNPV家蠶新品種“川抗1號”的育成
    家蠶猝倒病的發(fā)生與防治
    甲基對硫磷抗性菌的篩選及特性研究
    迷你南瓜育種與栽培研究進(jìn)展
    淺析林業(yè)育種和生物技術(shù)的應(yīng)用
    生物能源作物亞麻芥的研究現(xiàn)狀與應(yīng)用前景
    淺析馬鈴薯育種現(xiàn)狀及改進(jìn)方法
    甜玉米常見病害的抗性鑒定及防治
    中國果菜(2016年9期)2016-03-01 01:28:44
    成人国产av品久久久| 免费观看性生交大片5| 最新的欧美精品一区二区| 欧美日韩视频精品一区| 在线观看人妻少妇| 9热在线视频观看99| 亚洲国产精品一区三区| 观看av在线不卡| 亚洲人成77777在线视频| 免费少妇av软件| 午夜激情av网站| 日本av手机在线免费观看| 少妇人妻久久综合中文| 伊人亚洲综合成人网| 高清视频免费观看一区二区| 国产一级毛片在线| av国产久精品久网站免费入址| 国产亚洲欧美精品永久| 日韩中字成人| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 午夜精品国产一区二区电影| 青春草国产在线视频| 久久青草综合色| 久久久久久伊人网av| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 亚洲国产欧美日韩在线播放| 欧美国产精品va在线观看不卡| 我要看黄色一级片免费的| 久久精品久久精品一区二区三区| 日韩人妻精品一区2区三区| 在线精品无人区一区二区三| 十八禁高潮呻吟视频| av在线app专区| 国产深夜福利视频在线观看| 久久精品夜色国产| 高清不卡的av网站| 中文字幕最新亚洲高清| 日韩三级伦理在线观看| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲av男天堂| 波多野结衣一区麻豆| 亚洲欧美色中文字幕在线| 久久综合国产亚洲精品| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 伦精品一区二区三区| 日韩视频在线欧美| 蜜桃国产av成人99| 国产精品久久久久久精品电影小说| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 一边亲一边摸免费视频| 日韩精品有码人妻一区| 两性夫妻黄色片 | 国产福利在线免费观看视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| av线在线观看网站| 国产 精品1| 在线观看免费高清a一片| 亚洲综合色网址| 日韩精品有码人妻一区| 一级片免费观看大全| 免费av不卡在线播放| 亚洲精品一二三| av中文乱码字幕在线| 国产亚洲一区二区精品| 国产免费男女视频| 窝窝影院91人妻| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 后天国语完整版免费观看| 日韩视频一区二区在线观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 色在线成人网| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 在线永久观看黄色视频| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产野战对白在线观看| 动漫黄色视频在线观看| 999久久久精品免费观看国产| 国产精品久久久久久精品古装| 国产亚洲精品久久久久久毛片 | 亚洲伊人色综图| 热99国产精品久久久久久7| 高潮久久久久久久久久久不卡| 人人澡人人妻人| 日日夜夜操网爽| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产高清国产精品国产三级| 嫁个100分男人电影在线观看| 啦啦啦 在线观看视频| 好男人电影高清在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 999久久久精品免费观看国产| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 欧美亚洲日本最大视频资源| 日本黄色视频三级网站网址 | 一区二区日韩欧美中文字幕| 在线观看一区二区三区激情| 黄色女人牲交| 国产日韩欧美亚洲二区| 男人舔女人的私密视频| 亚洲精品在线美女| 国产亚洲精品久久久久久毛片 | 叶爱在线成人免费视频播放| 成在线人永久免费视频| 天堂动漫精品| 国产精品九九99| 国产一区二区激情短视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 亚洲精品在线观看二区| 成人av一区二区三区在线看| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 曰老女人黄片| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 高清在线国产一区| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 成年女人毛片免费观看观看9 | 精品少妇久久久久久888优播| 精品第一国产精品| 国产精品永久免费网站| 午夜久久久在线观看| 99久久综合精品五月天人人| 视频区图区小说| 欧美日韩成人在线一区二区| 久久久久国内视频| 欧美日韩成人在线一区二区| 日韩欧美免费精品| 99精品欧美一区二区三区四区| 99国产精品免费福利视频| 亚洲精品一二三| 国产主播在线观看一区二区| 十八禁网站免费在线| 日韩三级视频一区二区三区| 免费高清在线观看日韩| 亚洲七黄色美女视频| 日韩欧美三级三区| 亚洲av成人av| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 国产高清国产精品国产三级| 国产区一区二久久| 欧美成人免费av一区二区三区 | 在线国产一区二区在线| 亚洲国产欧美网| 国产成+人综合+亚洲专区| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲中文字幕日韩| 大型黄色视频在线免费观看| 韩国精品一区二区三区| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 一本大道久久a久久精品| 久久国产精品影院| 午夜91福利影院| 看片在线看免费视频| 精品高清国产在线一区| 又黄又粗又硬又大视频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产乱人伦免费视频| 一级a爱视频在线免费观看| 日本黄色视频三级网站网址 | 日韩欧美三级三区| 成人免费观看视频高清| 欧美激情极品国产一区二区三区| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲国产中文字幕在线视频| 午夜久久久在线观看| 国产精品欧美亚洲77777| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 多毛熟女@视频| 国产高清videossex| 黄色a级毛片大全视频| 99精品在免费线老司机午夜| xxxhd国产人妻xxx| 在线观看免费高清a一片| 精品国产国语对白av| 又黄又粗又硬又大视频| 岛国在线观看网站| 老汉色∧v一级毛片| 午夜福利一区二区在线看| 叶爱在线成人免费视频播放| 中文字幕人妻熟女乱码| 99热国产这里只有精品6| 成年女人毛片免费观看观看9 | 久久人人爽av亚洲精品天堂| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 亚洲五月色婷婷综合| 三上悠亚av全集在线观看| av天堂在线播放| 国产野战对白在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 黄片小视频在线播放| 亚洲性夜色夜夜综合| 这个男人来自地球电影免费观看| 99香蕉大伊视频| 国产亚洲欧美98| 日韩欧美在线二视频 | 欧美老熟妇乱子伦牲交| 天天添夜夜摸| 男女免费视频国产| 中国美女看黄片| x7x7x7水蜜桃| 亚洲精品国产一区二区精华液| 久久青草综合色| 一本综合久久免费| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 又紧又爽又黄一区二区| 丝袜在线中文字幕| 欧美av亚洲av综合av国产av| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 久久中文字幕一级| 青草久久国产| 久久久久视频综合| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 欧美大码av| 咕卡用的链子| 美女视频免费永久观看网站| 一区二区三区激情视频| 热re99久久精品国产66热6| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 精品一区二区三卡| 老汉色av国产亚洲站长工具| а√天堂www在线а√下载 | 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲精品成人av观看孕妇| 不卡一级毛片| 婷婷精品国产亚洲av在线 | 狠狠狠狠99中文字幕| 久久久久久久久久久久大奶| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 久久久国产成人精品二区 | 亚洲avbb在线观看| 91老司机精品| 精品久久久精品久久久| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 亚洲熟女精品中文字幕| 操美女的视频在线观看| 国产激情久久老熟女| 国精品久久久久久国模美| 一本大道久久a久久精品| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 热99久久久久精品小说推荐| 免费高清在线观看日韩| 51午夜福利影视在线观看| 男人的好看免费观看在线视频 | 嫩草影视91久久| 18禁国产床啪视频网站| 久久久久久久午夜电影 | 亚洲黑人精品在线| 日本vs欧美在线观看视频| 国产精品一区二区在线不卡| 久久 成人 亚洲| 成年版毛片免费区| 99久久人妻综合| 99精品欧美一区二区三区四区| 俄罗斯特黄特色一大片| 视频在线观看一区二区三区| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 搡老乐熟女国产| 免费日韩欧美在线观看| 亚洲全国av大片| 久久天堂一区二区三区四区| 欧美激情高清一区二区三区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 五月开心婷婷网| 99riav亚洲国产免费| 国产精品 欧美亚洲| 热99国产精品久久久久久7| 久久国产乱子伦精品免费另类| 久热这里只有精品99| 黄色视频,在线免费观看| 青草久久国产| 国产成人啪精品午夜网站| 搡老熟女国产l中国老女人| 身体一侧抽搐| 国产高清激情床上av| 黑丝袜美女国产一区| 男人操女人黄网站| 国产男女内射视频| av不卡在线播放| 国产高清视频在线播放一区| 视频区欧美日本亚洲| 国产av又大| 精品第一国产精品| 欧美性长视频在线观看| 亚洲熟女毛片儿| 国产一区在线观看成人免费| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 免费人成视频x8x8入口观看| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久久久久人人人人人| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 视频在线观看一区二区三区| 首页视频小说图片口味搜索| av国产精品久久久久影院| 少妇 在线观看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 国产成人精品无人区| 午夜老司机福利片| 两个人看的免费小视频| 在线观看66精品国产| 无遮挡黄片免费观看| 成人免费观看视频高清| bbb黄色大片| 国产成人av激情在线播放| 一级黄色大片毛片| 午夜福利欧美成人| 性色av乱码一区二区三区2| 久久久国产成人免费| 正在播放国产对白刺激| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 99精品欧美一区二区三区四区| 成人黄色视频免费在线看| 国产精品一区二区在线不卡| 久久国产精品影院| 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产片内射在线| 国产精品1区2区在线观看. | 国产野战对白在线观看| 亚洲男人天堂网一区| 一级片免费观看大全| 久久久久精品国产欧美久久久| 久久久精品区二区三区| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 免费在线观看亚洲国产| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 午夜影院日韩av| 90打野战视频偷拍视频| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 亚洲精品av麻豆狂野| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲人成伊人成综合网2020| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国产一区在线观看成人免费| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产激情久久老熟女| 欧美精品啪啪一区二区三区| 三上悠亚av全集在线观看| 亚洲久久久国产精品| 99精品久久久久人妻精品| 男男h啪啪无遮挡| 久久久精品区二区三区| 国产亚洲精品第一综合不卡| 大陆偷拍与自拍| x7x7x7水蜜桃| 精品久久久精品久久久| 亚洲美女黄片视频| 午夜亚洲福利在线播放| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 欧美国产精品一级二级三级| 手机成人av网站| a级片在线免费高清观看视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产男女内射视频| 下体分泌物呈黄色| 久久狼人影院| 在线看a的网站| 久久久国产一区二区| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美黑人精品巨大| av超薄肉色丝袜交足视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| a级片在线免费高清观看视频| 欧美色视频一区免费| 国产精品永久免费网站| 一级a爱视频在线免费观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 欧美日韩乱码在线| 国产男女内射视频| 国产亚洲精品久久久久久毛片 | 午夜久久久在线观看| 国产乱人伦免费视频| 亚洲视频免费观看视频| 成人黄色视频免费在线看| 色综合婷婷激情| 日本欧美视频一区| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 精品国产一区二区久久| 美女福利国产在线| 成人黄色视频免费在线看| 大码成人一级视频| 亚洲精品在线美女| 天天添夜夜摸| 免费av中文字幕在线| 欧美+亚洲+日韩+国产| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久久久国产一级毛片高清牌| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 一夜夜www| 91大片在线观看| www.自偷自拍.com| 国产av精品麻豆| 国产男女内射视频| 757午夜福利合集在线观看| 久久久精品免费免费高清| 免费观看a级毛片全部| 丝袜美足系列| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 午夜老司机福利片| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产男女超爽视频在线观看| svipshipincom国产片| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 黄频高清免费视频| 少妇的丰满在线观看| 一级a爱视频在线免费观看| 久久亚洲精品不卡| 欧美乱妇无乱码| 午夜日韩欧美国产| 日韩精品免费视频一区二区三区| 久久久久国内视频| 久久国产亚洲av麻豆专区| 一级a爱片免费观看的视频| 又大又爽又粗| 国产1区2区3区精品| av在线播放免费不卡| 国产精品久久视频播放| 亚洲欧美一区二区三区久久| 国产精品久久久人人做人人爽| 日本一区二区免费在线视频| 一本大道久久a久久精品| 午夜免费观看网址| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 高清欧美精品videossex| 久久狼人影院| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 一区二区三区国产精品乱码| 免费少妇av软件| 亚洲五月婷婷丁香| 丝袜美足系列| 在线观看免费视频网站a站| 国产色视频综合| 色播在线永久视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲九九香蕉| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲第一av免费看| 亚洲人成电影免费在线| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 老司机福利观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 日韩视频一区二区在线观看| 91大片在线观看| 搡老岳熟女国产| 久久香蕉激情| 激情在线观看视频在线高清 | 最近最新中文字幕大全电影3 | 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲av成人av| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 亚洲精品在线美女| 性色av乱码一区二区三区2| 欧美久久黑人一区二区| 黄色女人牲交| 免费av中文字幕在线| 老熟女久久久| 超色免费av| 欧美乱色亚洲激情| 91精品三级在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区 | 亚洲视频免费观看视频| 99热网站在线观看| 激情视频va一区二区三区| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产高清国产精品国产三级| 新久久久久国产一级毛片| 高清毛片免费观看视频网站 | 免费不卡黄色视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲七黄色美女视频| 99精品在免费线老司机午夜| avwww免费| 精品无人区乱码1区二区| 日韩中文字幕欧美一区二区| 精品免费久久久久久久清纯 | a级片在线免费高清观看视频| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 午夜两性在线视频| 一夜夜www| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 欧美国产精品一级二级三级| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产精品偷伦视频观看了| 欧美性长视频在线观看| 欧美激情极品国产一区二区三区| 国产精品 欧美亚洲| 国产精品影院久久| 久久精品亚洲av国产电影网| 老司机亚洲免费影院| 视频区欧美日本亚洲| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产真人三级小视频在线观看| 99香蕉大伊视频| 一二三四在线观看免费中文在| 成在线人永久免费视频| xxx96com| 精品国产一区二区三区四区第35| av福利片在线| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 黑人欧美特级aaaaaa片| 美女午夜性视频免费| 午夜老司机福利片| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲七黄色美女视频| 一级毛片高清免费大全| 久久中文看片网| 性色av乱码一区二区三区2| 精品久久久久久久久久免费视频 | 亚洲av成人一区二区三| 宅男免费午夜| 欧美中文综合在线视频| 亚洲国产精品sss在线观看 | 大香蕉久久网| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产淫语在线视频| 日本vs欧美在线观看视频| 免费在线观看影片大全网站| 久久精品成人免费网站| 757午夜福利合集在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 看片在线看免费视频| 亚洲av成人av| 国产精品一区二区免费欧美| 国产精品久久久人人做人人爽| 欧美成人免费av一区二区三区 | 亚洲av日韩精品久久久久久密| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 丝袜美足系列| 岛国毛片在线播放| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产精品久久久人人做人人爽| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲av日韩在线播放| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产欧美日韩精品亚洲av| 黄片播放在线免费| 黄片小视频在线播放| 久久影院123| 日韩欧美三级三区| 最新美女视频免费是黄的| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产免费现黄频在线看| 国产99久久九九免费精品| 亚洲第一青青草原| 在线播放国产精品三级| av视频免费观看在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| tube8黄色片| 在线av久久热| 午夜福利视频在线观看免费| 国产成人免费观看mmmm| 日本五十路高清| 操美女的视频在线观看| 久久精品国产a三级三级三级| 中文字幕人妻熟女乱码| 美女视频免费永久观看网站| 国产精华一区二区三区| 国产精品1区2区在线观看. | 国产成人免费观看mmmm| 精品人妻1区二区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 精品一区二区三卡| 中出人妻视频一区二区| 在线观看一区二区三区激情| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 色在线成人网| 久久久久视频综合| 国产成人系列免费观看| 婷婷丁香在线五月| 午夜福利欧美成人| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| av欧美777| 在线播放国产精品三级| 国产一卡二卡三卡精品| 久久ye,这里只有精品| 久久中文看片网| 成人影院久久| 欧美激情 高清一区二区三区| av天堂久久9| 亚洲久久久国产精品| 怎么达到女性高潮| 99在线人妻在线中文字幕 | 热99久久久久精品小说推荐| av一本久久久久| 久久天堂一区二区三区四区| 久久午夜综合久久蜜桃| 欧美激情 高清一区二区三区| 丰满迷人的少妇在线观看| 在线免费观看的www视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 脱女人内裤的视频| 久久久久久久午夜电影 | 窝窝影院91人妻| 色94色欧美一区二区| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 午夜亚洲福利在线播放| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲国产欧美一区二区综合|