快速石蠟切片在小塊活檢組織中的應用

周永梅陳明城 賴續(xù)文 張福田

(廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院病理科,廣東 510010)

快速石蠟切片在小塊活檢組織中的應用

周永梅＊陳明城 賴續(xù)文 張福田

(廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院病理科,廣東 510010)

快速石蠟切片; 小塊活檢組織

目前,病理科普遍開展的常規(guī)石蠟技術,制片程序時間較長,三個工作日才能發(fā)出病理診斷報告;而有時在某些特殊情況下,送檢組織已固定,不能行冰凍切片檢查時,就必須在很短的時間內制好片。目前冰凍切片作為一種最快速制片方法,廣泛用于術中病理診斷,但由于冰凍切片容易出現冰晶、細胞腫脹變形等現象,常導致診斷困難。為此我科開展了小組織快速石蠟切片技術,程序只需要3個半小時就能制出較好的切片,切片 HE染色核質分明,免疫組化質量近似于常規(guī)石蠟切片,現介紹如下。

材料和方法

1 材料

1.1 組織來源于我院手術的活檢標本,涉及的組織部位有肺、胃、腸等組織,組織直徑為0.1cm-0.5cm。

1.2 儀器和設備:德國Leica Peloris快速組織脫水機,國產塑料包埋盒,不銹鋼脫水籃。

2 方法 新鮮組織取材后,分為常規(guī)石蠟處理組(對照組)和快速石蠟處理組(實驗組),兩組標本及組織塊大小基本一致。對照組:運行時間為10個小時,處理過程:(1)10%福爾馬林固定150分鐘,35℃;(2)70%乙醇80分鐘,常溫;(3)80%乙醇 60分鐘,常溫;(4)95%乙醇 Ⅰ50分鐘,常溫;(5)95%乙醇Ⅱ40分鐘,常溫;(6)95%乙醇Ⅲ40分鐘,常溫;(7)無水乙醇Ⅰ30分鐘,常溫;(8)無水乙醇Ⅱ30分鐘,常溫;(9)二甲苯Ⅰ30分鐘,常溫;(10)二甲苯Ⅱ30分鐘,常溫;(11)石蠟 Ⅰ30分鐘,62℃;(2)石蠟Ⅱ30分鐘,62℃;(3)石蠟Ⅲ30分鐘,62℃。

實驗組:運行時間為3小時27分,處理過程:(1)10%福爾馬林固定15分鐘,55℃;(2)70%乙醇8分鐘,55℃;(3)80%乙醇8分鐘,55℃;(4)95%乙醇Ⅰ15分鐘,65℃;(5)95%乙醇Ⅱ15分鐘,65℃;(6)95%乙醇Ⅲ15分鐘,65℃;(7)無水乙醇Ⅰ15分鐘,60℃;(8)無水乙醇Ⅱ15分鐘,60℃;(9)二甲苯Ⅰ15分鐘,65℃;(10)二甲苯Ⅱ15分鐘,65℃;(11)石蠟Ⅰ15分鐘,70℃;(2)石蠟Ⅱ15分鐘,70℃;(3)石蠟Ⅲ15分鐘,70℃。兩組組織均進行石蠟包埋和切片,兩種方法所做切片同時進行 HE染色和免疫組化染色。

結 果

兩組 HE染色結果:實驗組切片組織完整,組織細胞結構清晰,細胞核與細胞漿對比染色好(如圖1)。對照組制片均達到優(yōu)良標準,組織結構清晰,細胞收縮少,無皺紋(如圖2)。兩組免疫組化染色結果均無脫片現象,陽性與陰性對比明顯,陽性物質定位準確,背景干凈清晰,無非特異性著色,染色結果穩(wěn)定可靠(如圖3,4)。完全達到診斷要求,大大提高了工作效率。

討 論

1 我們對臨床常送檢的小塊活檢組織用上述的實驗方法處理,時間明顯縮短,組織脫水、透明、和浸蠟效果良好,標本處理適當,組織結構完整,細胞輪廓清晰且境界清楚,更接近常規(guī)石蠟 HE切片,可避免冰凍切片造成的組織學假象而誤診[1]。提高了工作效率,提供了準確的病理診斷依據,快速石蠟切片不失為一種簡便、快捷的好方法。

2 脫水機的程序設定與制片質量的優(yōu)劣密切相關,不僅涉及常規(guī)切片的制作和診斷,對于免疫組化及分子生物學技術等幾乎所有與之相關的病理學項目均產生重要的影響。磁力攪拌器是由電機帶動磁鋼利用電磁產生的旋力磁場而使燒杯內的鐵質攪拌子轉動,并依照轉速大小在溶液中形成一種龍卷風樣震波,組織在高溫和經強化轉動的高濃度脫水液作用下,內部產生震波來加速分子間的熱運動,兼之離心效果組織內的水分在比重與滲透壓等因素的影響下,較快地被置換和析出而達到脫水之目的。

我們使用Leica Peloris脫水機設定的快速石蠟程序,充分利用了磁力攪拌器的先進技術,在適宜的溫度和壓力條件下,加速溶液分子運動,以促進脫水溶液與組織內水分交換及透明時對組織的滲透力,縮短透明浸蠟時間,加強組織的處理效果,從而使組織達到加速固定、脫水、透明浸蠟作用[2],有利于制作切片。

[1]孟奎,李博,石群立,等.提高快速石蠟切片質量的廣法和經驗體會.臨床與實驗病理學雜志,2001,17(4):362-363

[2]泮黎明.介紹小組織活檢標本快速石蠟切片方法.診斷病理學雜志,1998,5(2):109

圖 版 說 明

圖1 同一直腸癌組織,快速石蠟制片顯示切片組織細胞結構清晰,細胞核與細胞漿染色對比好?！?00

圖2 常規(guī)法處理的直腸癌組織?！?00

圖3 同一食管癌組織,快速石蠟切片后免疫組化染色染色結果與常規(guī)處理組織無明顯差異,Ki67陽性定位準確、背景清晰。EnVision法?！?00

圖4 常規(guī)法處理的食管癌組織,Ki-67陽性表達于細胞核。EnVision法?！?00

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1 The same rectal cancer tissue treated by rapid paraffin methed shows clear structure and obvious contrast of nuclei to cytoplasm.×200

Fig.2 Rectal cancer tissue treated by routine method ×200

Fig.3 Ki-67 positively expressed in cell nuclei of the same esophageal carcinoma tissue treated by rapid paraffin methed.There is no obvious difference of stain result compared with the routine method.×100

Fig.4 Ki-67 positively expressed in cell nuclei of esophageal carcinoma tissue treated by routine method.×100

R466

A

10.3870/zgzzhx.2011.02.022

2010-10-10

2010-11-01

周永梅,女(1978年),漢族,技師

＊通訊作者(To whom correspondence should be addressed)