HPLC法同時測定竹瀝止咳液中黃芩苷和柚皮苷的含量

蔣 玲 左梅方

(1廣西桂林食品藥品檢驗所，廣西桂林市轄區(qū)西城路22號，541002;2桂林醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系)

竹瀝止咳液由竹瀝、黃芩、化橘紅等9味中藥組成，具有清熱化痰，止咳平喘之功效，用于治療風(fēng)熱咳嗽，咳痰不爽等癥。竹瀝止咳液現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定項目［1］，該制劑中的黃芩含黃芩苷［2］，化橘紅含柚皮苷［3］，我們采用高效液相色譜法同時測定竹瀝止咳液中黃芩苷和柚皮苷的含量，結(jié)果較為滿意。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 PE－200高效液相色譜儀(美國珀金埃尓默公司)，包括低壓四元泵、UV/VIS檢測器、自動進(jìn)樣器、在線脫氣機(jī)、柱溫箱及Tcnav色譜工作站;A＆D GR－202電子分析天平(日本 A＆D公司);島津 UV－2450紫外分光光度計(日本島津公司)。

1.2 試藥 黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110715－200815，質(zhì)量分?jǐn)?shù)95.2%);柚皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110722－200309);竹瀝止咳液(由桂林市某醫(yī)院提供，批號20080710，20081010，20081217);乙腈、磷酸為色譜純，其他試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:phenomenex C18柱，(250mm×4.6mm，5μm);流動相:乙腈 －1mL·L－1磷酸(21∶79);流速:1.0mL·min－1;檢測波長:283nm;柱溫35℃;進(jìn)樣量 10μL。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對照品10.20mg，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為黃芩苷對照品儲備液。取儲備液3mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得(含黃芩苷58.2624μg·mL－1)。精密稱取柚皮苷對照品12.60mg，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為柚皮苷對照品儲備液。取儲備液2mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得(含柚皮苷50.4μg·mL－1)。

2.3 供試品溶液的制備 精密吸取樣品2mL，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 空白溶液的制備 按處方比例，分別制備缺黃芩或化橘紅的陰性樣品，依2.3項下制備空白溶液。

2.5 專屬性實驗 取上述供試品溶液、對照品溶液和空白溶液，照色譜條件測定，結(jié)果空白溶液在與黃芩苷對照品和柚皮苷對照品保留時間相應(yīng)的位置無色譜峰出現(xiàn)，表明處方中其他藥味對測定無干擾。見圖1。

2.6 線性范圍考察 分別取黃芩苷對照品儲備液3mL和柚皮苷對照品儲備液2mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，分別進(jìn)樣1、5、10、15 和 20μL，進(jìn)行測定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得黃芩苷線性方程:Y=3046512.5X+61516.3，r=0.9999，和柚皮苷線性方程:Y=1633465.5X+38875.4，r=0.9997。結(jié)果表明黃芩苷和柚皮苷分別在0.05826～1.16525μg和0.05040～1.00800μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 穩(wěn)定性實驗 取同一份供試品溶液，室溫放置0、5、10、15 和20h，按2.1 項下色譜條件，分別進(jìn)樣測定，記錄峰面積，黃芩苷峰面積RSD為0.5%;柚皮苷峰面積RSD為0.9%，說明供試品溶液在20h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 精密度實驗 分別取黃芩苷對照品溶液和柚皮苷對照品溶液，按2.1項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，峰面積的RSD分別為0.4%和0.3%，說明精密度良好。

2.9 重復(fù)性實驗 精密量取同一樣品(批號20080710)6份，按2.3項下方法制備供試品溶液，按色譜條件測定，以峰面積外標(biāo)法計算。結(jié)果平均含量為黃芩苷2.3037mg·mL－1，RSD=0.7%;柚皮苷 0.5721mg·mL－1，RSD=0.7%，表明重復(fù)性良好。

2.10 回收率實驗 精密量取已知含量的樣品(批號20080710)1mL，精密加入 0.21877mg·mL－1的黃芩苷對照品溶液10mL和0.25200mg·mL－1的柚皮苷對照品溶液3mL，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定并計算回收率。結(jié)果，黃芩苷平均回收率為99.6%，RSD=1.3%，柚皮苷平均回收率為100.8%，RSD=0.7%(n=6)，見表1。

表1 黃芩苷和柚皮苷回收率實驗結(jié)果

2.11 樣品測定 取批號為 20080710、20081010、20081217的三批樣品，分別按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定，以峰面積外標(biāo)法計算，結(jié)果3批樣品中黃芩苷含量分別為2.3037、1.3953 和 2.2916mg·mL－1，柚皮苷含量分別為 0.5721、0.7028 和0.5593mg·mL－1。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 分別以黃芩苷對照品及柚皮苷對照品的甲醇溶液作紫外光譜掃描，黃芩苷在278nm處有最大吸收，柚皮苷在283nm處有最大吸收，考慮到樣品中柚皮苷含量較小，選擇283nm為測定波長，以獲得較大的響應(yīng)值。

3.2 流動相的選擇 筆者比較了乙腈－磷酸水溶液、乙腈－乙酸水溶液、甲醇－磷酸水溶液、甲醇－乙酸水溶液等不同的組分和比例，結(jié)果選定乙腈－1mL·L－1磷酸(21∶79)為流動相，在此條件下，2個待測組分峰形良好、分離效果佳，其他成分無干擾，流動相配制也簡單。

3.3 本方法操作簡便，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和回收率較好，可用于竹瀝止咳液的質(zhì)量控制。

［1］廣西壯族自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑注冊批件［S］.桂 C060035，2006，11，8.

［2］肖培根.新編中藥志第一卷［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2002:862－875.

［3］肖培根.新編中藥志第二卷［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2002:156－161.