博心通軟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

張耕，程璐，徐宏峰

(武漢市第一醫(yī)院制劑中心，430022)

博心通軟膠囊是本院自制制劑(批準(zhǔn)文號(hào):鄂藥制字Z20093124，每粒0.4 g)，是以蔥白為原料，經(jīng)二氧化碳超臨界萃取，并加入適當(dāng)輔料而制成的軟膠囊。臨床上主要用于治療脂肪肝和高脂血癥等。為控制該制劑的質(zhì)量，筆者在本實(shí)驗(yàn)中采用化學(xué)反應(yīng)及薄層色譜法對(duì)其中甾體皂苷化合物和β-谷甾醇進(jìn)行定性鑒別，并采用高效液相色譜法對(duì)β-谷甾醇進(jìn)行含量測(cè)定，為博心通軟膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供定性和定量檢測(cè)方法[1-7]。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(島津LC-10A，檢測(cè)器SPD-10A，浙大N2000色譜工作站)，電子天平(賽多利斯ME215S，d=0.01 mg)，β-谷甾醇對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，鑒定用，批號(hào):110851-200504)，β-谷甾醇對(duì)照品(西格瑪公司，含量測(cè)定用，批號(hào):058K3787)，博心通軟膠囊(自制，批號(hào):080319，080403，080510)，甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 鑒別

2.1 甾體皂苷化合物的鑒別取本品1粒，取其中內(nèi)容物，溶于冰醋酸2 mL，加濃硫酸-醋酐(1∶20)1 mL，搖勻，最后反應(yīng)顏色為污綠色。結(jié)果表明內(nèi)容物中含有甾體化合物，空白輔料對(duì)鑒別均無干擾。

2.2 β-谷甾醇的鑒別取本品1粒的內(nèi)容物，加甲醇2 mL溶解，濾過，作為供試品溶液。取未加蔥白提取物的空白輔料，同法制成陰性對(duì)照溶液。另取β-谷甾醇對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含0.1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB)實(shí)驗(yàn)，吸取上述溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%磷鉬酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾，展開距離為9.5 cm，結(jié)果見圖1。

3 含量測(cè)定

3.1 色譜條件色譜柱:Dikma Technologies DiamonsilTMC18(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇-水(98∶2);檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量20 μL。β-谷甾醇和其他組分分離度R＞1.5，理論板數(shù)按β-谷甾醇峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

圖1 3種溶液的薄層色譜圖

3.2 對(duì)照品溶液的制備精密稱取在60℃減壓干燥4 h的β-谷甾醇對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含20 μg的溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物0.6 g，精密稱定，置于25 mL量瓶，加甲醇適量，超聲處理10 min使其溶解，并用甲醇稀釋至刻度，經(jīng)孔徑0.45 μm濾膜過濾，取續(xù)濾液即得。

3.4 專屬性實(shí)驗(yàn)按本品處方制備不含蔥白提取物的陰性對(duì)照，同“3.3”項(xiàng)下制備方法制得陰性對(duì)照溶液。按擬定的色譜條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果供試品溶液主峰保留時(shí)間與對(duì)照品溶液主峰保留時(shí)間一致，陰性對(duì)照在β-谷甾醇對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的保留時(shí)間處沒有出峰，表明處方中的其他成分對(duì)β-谷甾醇測(cè)定無干擾，結(jié)果見圖2。

3.5 線性關(guān)系考察精密稱取β-谷甾醇對(duì)照品5.28 mg，置20 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，得對(duì)照品儲(chǔ)備液;分別精密量取該儲(chǔ)備液0.5，1，2，3，4，5 mL置20 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻;分別吸取20 μL注入液相色譜儀，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程:Y=1.968 6X+0.001 6，r=0.999 7)?？梢姦?谷甾醇在6.6～66.0 μg·mL-1范圍內(nèi)，峰面積與濃度的線性關(guān)系良好。

3.6 精密度實(shí)驗(yàn)取β-谷甾醇對(duì)照品溶液，按擬定色譜條件注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄β-谷甾醇峰面積，RSD為1.58%，結(jié)果顯示精密度良好。

3.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取供試品溶液，在擬定的色譜條件下，分別于0，3，6，9，15，24 h進(jìn)樣，記錄β-谷甾醇峰面積，RSD為0.84%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取博心通軟膠囊(批號(hào):080319)，按照“3.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法平行制備6份，照“3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定β-谷甾醇的含量。平均含量為0.56 mg·g-1，RSD為1.15%，結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。

3.9 回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取β-谷甾醇對(duì)照品5.92 mg，置50 mL量瓶，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密稱取已知含量的博心通軟膠囊(批號(hào):080319，0.56 mg·g-1)9份，分別精密加入β-谷甾醇對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0，2.0，3.0 mL，按“3.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法處理并按擬定的色譜條件測(cè)定并計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為98.1%，RSD為1.53%，結(jié)果見表1。

表1 β-谷甾醇加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.10 供試品含量測(cè)定取博心通軟膠囊，按“3.2”及“3.3”項(xiàng)下方法分別制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

表2 β-谷甾醇含量測(cè)定結(jié)果

4 討論

蔥屬植物中大部分研究?jī)H局限于薤白及大蒜等少數(shù)幾個(gè)品種，有關(guān)蔥的研究報(bào)道在國(guó)內(nèi)外幾乎為空白，蔥白多用于復(fù)方制劑或民間偏方，將其作為主藥制成制劑應(yīng)用于臨床，目前筆者尚未見報(bào)道。筆者在本實(shí)驗(yàn)中對(duì)博心通軟膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，曾經(jīng)采用香草醛-高氯酸比色法測(cè)定制劑中甾體化合物的含量，但最終選擇專屬性較高的高效液相色譜法測(cè)定β-谷甾醇的含量。

4.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇取β-谷甾醇對(duì)照品適量，用甲醇稀釋至一定濃度，在190～400 nm波長(zhǎng)進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果β-谷甾醇在約203 nm有最大吸收，但是空白輔料與溶劑在203 nm處均有一定程度的吸收，為了排除干擾，選擇210 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

4.2 檢測(cè)線與定量限按信噪比為3∶1，測(cè)得β-谷甾醇的最低檢測(cè)濃度為2.15 μg·mL-1，最低檢測(cè)量為0.04 μg;按信噪比為10∶1，測(cè)得β-谷甾醇的最低定量濃度為8.6 μg·mL-1，最低定量限為0.17 μg。

4.3 流動(dòng)相的選擇筆者曾經(jīng)采用甲醇-0.1%磷酸(98∶2)[8]流動(dòng)相體系，結(jié)果峰形和分離度不理想，后改用甲醇-水的流動(dòng)相體系，經(jīng)調(diào)節(jié)比例甲醇-水(98∶2)后得到了較好的理論板數(shù)和分離度。

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