吡喹酮對(duì)曼氏裂頭蚴感染小鼠治療效果的進(jìn)一步觀察＊

王中全，王明明，祁 欣，姜 鵬，李 楠，藺西萌，崔 晶

2：河南省疾病預(yù)防控制中心，鄭州 450016

吡喹酮對(duì)曼氏裂頭蚴感染小鼠治療效果的進(jìn)一步觀察＊

王中全1，王明明1，祁 欣1，姜 鵬1，李 楠1，藺西萌2，崔 晶1

目的 進(jìn)一步觀察吡喹酮對(duì)曼氏裂頭蚴感染小鼠的療效。方法 將72只小鼠分為8組（每組9只），每只小鼠經(jīng)口感染5條裂頭蚴，感染后1周1－3組分別應(yīng)用2 000、2 800、3 600mg/kg吡喹酮治療1個(gè)療程（每日3次，療程3d）后1周剖殺，4－6組治療2個(gè)療程后1周剖殺，7、8組為對(duì)照組。另選40只小鼠分為4組（每組10只），每只經(jīng)口感染5條裂頭蚴，感染后14周1～3組應(yīng)用2 000mg/kg吡喹酮治療后1、3、5周剖殺；4組為對(duì)照組。各組小鼠剖殺后收集裂頭蚴數(shù)并計(jì)算各組的平均檢出蟲(chóng)數(shù)和減蟲(chóng)率，光鏡下觀察蟲(chóng)體形態(tài)變化。結(jié)果 小鼠感染裂頭蚴后1周，應(yīng)用2 000、2 800、3 600mg/kg吡喹酮治療1個(gè)療程后的減蟲(chóng)率分別為70.6%、77.3%及84% （P＞0.05），治療2個(gè)療程后的減蟲(chóng)率分別為57.1%、54.6%及54.6%（P＞0.05）。小鼠感染裂頭蚴后14周，應(yīng)用2 000mg/kg吡喹酮治療后1、3及5周的減蟲(chóng)率分別只有28%、20%及20%（P＞0.05）；雖然治療后裂頭蚴蟲(chóng)體有斷裂現(xiàn)象，體壁上出現(xiàn)突起、潰爛及溶解等，但蟲(chóng)體頭部無(wú)明顯破壞。結(jié)論 增加劑量與療程不能提高吡喹酮對(duì)裂頭蚴感染小鼠的療效；吡喹酮對(duì)裂頭蚴病的治療效果可能與感染后的治療時(shí)間有關(guān)。

裂頭蚴??；治療；吡喹酮；小鼠

2：河南省疾病預(yù)防控制中心，鄭州 450016

曼氏裂頭蚴病是由曼氏迭宮絳蟲(chóng)（Spirometramansoni）的幼蟲(chóng)（裂頭蚴）侵入人體引起的疾病，在我國(guó)主要分布于南方地區(qū)（廣東、海南、湖南、福建等）。近年來(lái)在河南省農(nóng)村，部分居民認(rèn)為生食蝌蚪有“清熱解毒，涼血祛病”的功效，故在民間有生吞蝌蚪治療皮膚瘙癢等疾病的習(xí)俗。血清流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明，河南省部分居民血清裂頭蚴抗體陽(yáng)性率為5.7%。河南省已為近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的裂頭蚴病的自然疫源地，現(xiàn)已將其列入新出現(xiàn)的疾?。?］。

目前，裂頭蚴病的治療主要是采用手術(shù)摘除蟲(chóng)體或者局部應(yīng)用40%酒精－2%普魯卡因殺死蟲(chóng)體。但對(duì)內(nèi)臟及皮下多發(fā)性裂頭蚴病，目前尚無(wú)滿意的治療方法。吡喹酮是一種廣譜抗吸蟲(chóng)與絳蟲(chóng)藥物，但其治療裂頭蚴病的療效目前尚不確定。我們?cè)鴮?duì)小鼠感染裂頭蚴后5周應(yīng)用1200、1800mg/kg吡喹酮治療1個(gè)療程（4d），僅取得了部分治療效果，治療后1周的減蟲(chóng)率分別為41.56%與70.83%［2］。為了進(jìn)一步觀察吡喹酮對(duì)裂頭蚴感染小鼠的治療效果，我們對(duì)裂頭蚴感染小鼠后不同時(shí)間應(yīng)用不同劑量吡喹酮的治療效果進(jìn)行了觀察。

1 材料方法

1.1 裂頭蚴與實(shí)驗(yàn)小鼠 裂頭蚴采自鄭州市郊區(qū)的青蛙，蟲(chóng)體長(zhǎng)1～11cm（平均5cm）；選取伸縮活動(dòng)劇烈的裂頭蚴，用無(wú)菌生理鹽水清洗3次后接種小鼠。健康雄性6周齡昆明小鼠，體重20～25g，購(gòu)自鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 吡喹酮 吡喹酮片劑（200mg）為南京制藥廠有限公司產(chǎn)品（批號(hào)20091109），用蒸餾水根據(jù)所需劑量配制成吡喹酮懸液。采用灌胃方法給藥，每只小鼠每次灌胃0.2mL。

1.3 小鼠的裂頭蚴實(shí)驗(yàn)感染與治療 將72只小鼠隨機(jī)分為8組（每組9只），每只小鼠經(jīng)口感染5條裂頭蚴，感染方法按文獻(xiàn)操作［3］。感染后1周1－3組分別應(yīng)用總劑量為2 000、2 800、3 600mg/kg的吡喹酮治療（每日3次，療程3d），治療后1周剖殺；4－6組治療1個(gè)療程后間隔7d，再進(jìn)行第2療程治療，劑量同上，第2療程結(jié)束后1周剖殺；7、8組小鼠僅灌服蒸餾水作為對(duì)照組。

另選40只小鼠隨機(jī)分為4組（每組10只），每只小鼠經(jīng)口感染5條裂頭蚴，感染后14周1－3組小鼠應(yīng)用總劑量為2 000mg/kg的吡喹酮治療（每日3次，療程3d），治療后1、3、5周分別剖殺；4組小鼠僅灌服蒸餾水作為對(duì)照組。

1.4 治療效果與蟲(chóng)體形態(tài)變化的觀察 所有感染小鼠在剖殺后，在全身皮下、肌肉及內(nèi)臟等部位尋找并計(jì)數(shù)裂頭蚴，計(jì)算平均檢出裂頭蚴數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差及減蟲(chóng)率，減蟲(chóng)率＝（對(duì)照組平均檢出蟲(chóng)數(shù)－治療組平均檢出蟲(chóng)數(shù)）/對(duì)照組平均檢出蟲(chóng)數(shù)×100%。從感染后14周應(yīng)用吡喹酮治療后1周剖殺的小鼠，收集裂頭蚴分別進(jìn)行蟲(chóng)體大體形態(tài)及組織切片蘇木素伊紅染色后鏡下觀察。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用多個(gè)及兩個(gè)獨(dú)立樣本的秩和檢驗(yàn)、卡方檢驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)設(shè)定為α＝0.05。

2 結(jié) 果

2.1 吡喹酮對(duì)裂頭蚴感染小鼠后1周的治療效果小鼠感染裂頭蚴后1周，應(yīng)用2 000、2 800、3 600 mg/kg吡喹酮治療1個(gè)療程后的減蟲(chóng)率分別為70.6%、77.3%及84%（P＞0.05）（表1）；不同劑量組的檢出蟲(chóng)數(shù)均明顯低于與對(duì)照組（P＜0.01）。應(yīng)用吡喹酮治療2個(gè)療程后的減蟲(chóng)率分別為57.1%、54.6%及54.6%（P＞0.05）；不同劑量組的檢出蟲(chóng)數(shù)亦明顯低于對(duì)照組（P＜0.01）。2 000mg/kg吡喹酮治療2個(gè)療程與1個(gè)療程的減蟲(chóng)率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；2 800、3 600mg/kg劑量組治療2個(gè)療程的減蟲(chóng)率反而低于治療1個(gè)療程后的減蟲(chóng)率（P＜0.05）。

2.2 吡喹酮對(duì)裂頭蚴感染小鼠后14周的治療效果小鼠感染裂頭蚴后14周，應(yīng)用2 000mg/kg吡喹酮治療后1、3及5周的減蟲(chóng)率分別為28%、20%及20%（P＞0.05）（表2），治療后1、3及5周的檢出蟲(chóng)數(shù)與對(duì)照組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。

2.3 吡喹酮治療后裂頭蚴蟲(chóng)體形態(tài)變化的觀察裂頭蚴感染小鼠后14周，應(yīng)用2 000mg/kg吡喹酮治療后1周時(shí)發(fā)現(xiàn)有蟲(chóng)體斷裂現(xiàn)象，蟲(chóng)體活動(dòng)減弱，但頭部均完整；光鏡下可見(jiàn)裂頭蚴蟲(chóng)體斷裂，體壁腫脹、顆粒狀或球狀突起、片狀潰爛及網(wǎng)狀溶解等（圖1）；在組織切片上，吡喹酮治療后裂頭蚴蟲(chóng)體內(nèi)可見(jiàn)大小不等的空泡（圖2），但蟲(chóng)體頭部無(wú)明顯破壞。

表1 吡喹酮對(duì)裂頭蚴感染小鼠后1周的治療效果Table 1 Therapeutic effect of praziquantel on mice infected with sparganum at 1week post infection

表2 吡喹酮對(duì)裂頭蚴感染小鼠后14周的治療效果（n＝5）Table 2 Therapeutic effect of praziquantel on mice infected with sparganum at 14weeks post infection

圖1 吡喹酮治療后光鏡下裂頭蚴形態(tài)變化（×40）Fig.1 Morphological changes of spargana under light microscope after treatment with praziquantel（×40）

3 討 論

筆者以前發(fā)現(xiàn)裂頭蚴感染小鼠后5周，應(yīng)用1 800mg/kg吡喹酮治療后1周的減蟲(chóng)率為70.83%［2］。為了研究治療裂頭蚴病的適宜劑量，本文又應(yīng)用2 000、2 800、3 600mg/kg吡喹酮對(duì)裂頭蚴感染后1周的小鼠進(jìn)行了療效觀察，發(fā)現(xiàn)應(yīng)用上述劑量治療1個(gè)療程后的減蟲(chóng)率分別為70.6%、77.3%及84%，治療2個(gè)療程后的減蟲(chóng)率分別為57.1%、54.6%及54.6%；結(jié)果表明，增大劑量與延長(zhǎng)療程并不能提高吡喹酮對(duì)裂頭蚴感染小鼠的治療效果。小鼠感染裂頭蚴后14周才開(kāi)始應(yīng)用2 000mg/kg吡喹酮進(jìn)行治療的小鼠，治療后1、3及5周的減蟲(chóng)率僅分別為28%、20%及20%，檢出蟲(chóng)數(shù)與對(duì)照組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；吡喹酮治療后可見(jiàn)裂頭蚴蟲(chóng)體斷裂，體壁腫脹、突起、潰爛及網(wǎng)狀溶解等，但蟲(chóng)體頭部無(wú)明顯變化。上述結(jié)果表明，吡喹酮對(duì)裂頭蚴感染小鼠的治療效果與感染后的治療時(shí)間有關(guān)，提示裂頭蚴感染后開(kāi)始治療的時(shí)間越晚，效果越差；對(duì)于感染后14周的小鼠無(wú)明顯治療效果。Kim等［4］發(fā)現(xiàn)應(yīng)用吡喹酮治療5例腦裂頭蚴病患者無(wú)效；王輝等［5］對(duì)4例腦裂頭蚴病患者先應(yīng)用吡喹酮治療，無(wú)效后手術(shù)才切除蟲(chóng)體，4例患者均發(fā)現(xiàn)裂頭蚴蟲(chóng)體，其中有2條活蟲(chóng)。

圖2 吡喹酮治療后裂頭蚴組織學(xué)變化（HE染色，×100）Fig.2 Histological changes of spargana under light microscope after treatment with praziquantel（×100）

小鼠口服吡喹酮的半數(shù)致死量為3 712mg/kg［6］，小鼠與人體使用藥物的等效計(jì)量換算關(guān)系為小鼠是人的12.33倍［7］。本研究應(yīng)用總劑量為2 000、2 800、3 600mg/kg的吡喹酮對(duì)裂頭蚴感染小鼠進(jìn)行治療，換算成人體口服的總劑量分別為162、227、292mg/kg，而國(guó)外教科書(shū)中推薦治療裂頭蚴病患者的總劑量為120～150mg/kg（療程2d）［8］，國(guó)內(nèi)推薦治療裂頭蚴病患者的總劑量為120～300mg/kg（療程2～4d）［9］，本研究治療1個(gè)療程所用的劑量已等于或明顯高于國(guó)內(nèi)外治療裂頭蚴病的劑量。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)第2療程的減蟲(chóng)率反而低于第1療程，可能是治療后早期裂頭蚴后部蟲(chóng)體斷裂崩解后被宿主吸收，而殘留的蟲(chóng)體頭部較小，在解剖時(shí)不易被肉眼發(fā)現(xiàn)，從而造成了治療1個(gè)療程后蟲(chóng)荷明顯降低的假象，而第2療程結(jié)束后1周剖殺小鼠時(shí)殘留的蟲(chóng)體已生長(zhǎng)成為較長(zhǎng)的裂頭蚴、更容易被肉眼發(fā)現(xiàn)，故檢出蟲(chóng)數(shù)增加而致減蟲(chóng)率有所下降。Hong等發(fā)現(xiàn)5條裂頭蚴感染小鼠后回收的裂頭蚴數(shù)與回收時(shí)間明顯有關(guān)，隨感染后時(shí)間的延長(zhǎng)回收數(shù)逐漸升高，裂頭蚴接種小鼠后1、2、4、10周的回收率分別是72%、80%、95%及92%，至接種后6個(gè)月回收率達(dá)100%［10］。筆者曾發(fā)現(xiàn)裂頭蚴在1640培養(yǎng)液中也有蟲(chóng)體斷裂現(xiàn)象，將殘留蟲(chóng)體的頭部接種小鼠后2周又能長(zhǎng)成完整的裂頭蚴［2］。此外，1與5條裂頭蚴感染小鼠后3周應(yīng)用2 800mg/kg吡喹酮治療后18周剖殺時(shí)減蟲(chóng)率分別為20%與0，且檢出的裂頭蚴囊包形成率為36.21%（21/58），與未經(jīng)治療的對(duì)照組的囊包形成率40%（4/10）的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。裂頭蚴感染小鼠后蟲(chóng)體周圍囊包的形成可能是吡喹酮治療無(wú)效的重要因素，有人發(fā)現(xiàn)甲苯噠唑?qū)πx(chóng)成囊期幼蟲(chóng)無(wú)殺傷作用［11］。

［1］Cui J，Lin XM，Zhang HW，et al.Sparganosis，Henan province，central China［J］.Emerg Infect Dis，2010，17（1）：146－147.

［2］李楠，藺西萌，崔晶，等.不同劑量吡喹酮治療曼氏裂頭蚴感染小鼠的療效觀察［J］.中國(guó)血吸蟲(chóng)病防治雜志，2010，22（1）：51－55.

［3］Cui J，Li N，Wang ZQ，et al.Serodiagnosis of experimental sparganum infections of mice and human sparganosis by ELISA using ES antigens ofSpirometramansonispargana［J］.Parasitol Res，2011，108（6）：1551－1556.

［4］Kim DG，Paek SH，Chang KH，et al.Cerebral sparganosis：clinical manifestations，treatment，and outcome［J］.J Neurosurg.1996，85（6）：1066－1071.

［5］王輝，李文勝，蔡梅欽，等.腦裂頭蚴病的診斷與外科治療［J］.中國(guó)醫(yī)師進(jìn)修雜志，2010，33（23）：33－35

［6］肖樹(shù)華.抗血吸蟲(chóng)及抗絳蟲(chóng)新藥吡喹酮的實(shí)驗(yàn)研究［J］.國(guó)外醫(yī)學(xué)參考資料（寄生蟲(chóng)病分冊(cè)），1978，（6）：241－245.

［7］黃繼汗，黃曉暉，陳志揚(yáng)，等.藥理試驗(yàn)中動(dòng)物間和動(dòng)物與人體間的等效劑量換算［J］.中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2004，9（9）：1069－1072.

［8］John DT，Petri Jr WA.Medical Parasitolology［M］.9th ed，Missouri：Saunders，2006：207－238.

［9］陳興保，吳觀陵，孫新，等.現(xiàn)代寄生蟲(chóng)病學(xué)［J］.北京：人民軍醫(yī)出版社，2002：715－721.

［10］Hong ST，Kim KJ，Huh S，et al.The changes of histopathology and serum anti－sparganum IgG in experimental sparganosis of mice［J］.Kisaengchunghak Chapchi，1989，27（4）：261－269.

［11］Pozio E，Sacchini D，Sacchi L，et al.Failure of mebendazole in the treatment of humans withTrichinellaspiralisinfection at the stage of encapsulating larvae［J］.Clin Infect Dis，2001，32（4）：638－642.

Further study on efficacy of praziquantel on mice infected withSparganummansoni

WANG Zhong－quan，WANG Ming－ming，QI Xin，JIANG Peng，LI Nan，LIN Xi－meng，CUI Jing

（DepartmentofParasitology，MedicalCollege，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450052，China）

In order to further study the efficacy of praziquantel on mice infected withSparganummansoni，72mice were divided into 8groups（9mice in each group），and each mice was orally infected with 5sparana.At one week after infection，1－3groups were treated with praziquantel（2 000，2 800，and 3 600mg/kg in three doses per day for 3days），and sacrificed at 1 week after 1course；4－6groups were treated with the second course of praziquantel as the same dosage，and sacrificed at 1 week after 2courses；7and 8groups were used as control.Additional 40mice were divided into 4groups（10micein each group），and each mice was orally infected with 5sparana.At 14weeks after infection，1－3groups were treated with praziquantel（2 000mg/kg），and sacrificed at 1，3，and 5weeks after treatment.After the infected mice were sacrificed，the number of worms recovered was observed and worm reduction rate was determined，and the morphological changes of sparana post treatment were observed under microscope.When treating with one course of 2 000，2 800，and 3 600mg/kg of praziquantel at 1 week post infection，the worm reduction rate in three groups of the infected mice was 70.6%，77.3%and 84%（P＞0.05）.After treatment with two course of praziquantel，the worm reduction rate was 57.1%，54.6%and 54.6%（P＞0.05）.When the infected mice were treated with 2 800mg/kg of praziquantel at 14weeks post infection，the worm reduction rate in the infected mice was only 28%，20%and 20%at 1，3and 5weeks after treatment（P＞0.05）.After treatment with praziquantel，the spargana was ruptured，and the protuberance and dissolution of cuticles were observed，but the destruction of the anterior end of spargana were not found.The results showed that the increase of dosage and course of treatment did not improve the therapeutic effect of praziquantel on mice infected with sparganum，and the efficacy of praziquantel for sparganosis might be related to time of therapy after infection.

sparganosis；treatment；praziquantel；mice

R383.3

A

1002－2694（2011）10－0921－04

＊河南省醫(yī)學(xué)科技攻關(guān)（201003006）資助項(xiàng)目

崔晶：Email：cuij＠zzu.edu.cn

1.鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院寄生蟲(chóng)學(xué)教研室，鄭州 450052；

2011－06－17；

2011－08－06