兒童EB病毒感染的分子生物學(xué)診斷及臨床分析

王 蕾，李玉芬

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院，河北張家口075000)

近幾年來特殊病毒及變異病毒引起兒童呼吸道感染的情況增加，且病情特殊、發(fā)病嚴(yán)重、病死率增高。EB病毒是兒童常見的感染源，其臨床表現(xiàn)多樣復(fù)雜，可造成全身多系統(tǒng)損傷，但以呼吸道感染最多見［1，2］，不易早期診斷。為提高認(rèn)識(shí)，我們對(duì)呼吸道感染患兒采集咽拭子標(biāo)本，應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)(FQ-PCR)檢查EB-DNA并進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 本院2010年6月～2011年6月門診及住院不明原因呼吸道感染的127例患兒，經(jīng)EB-DNA監(jiān)測(cè)陽性，確診為EB病毒感染的68例，其中男39例、女29例，年齡0～1歲12例、1～3歲23例、3～5歲18例、5～7歲10例、7～9歲3例、＞9歲2例。

1.2 臨床表現(xiàn) 68例EB病毒感染患兒除典型的呼吸道感染癥狀如咳嗽、咽痛、咽峽部充血、肺部可聞及干、濕羅音等外，均有發(fā)熱，其中高熱30例(44.1%)、中度熱38 例(55.8%)，淋巴結(jié)腫大 9 例(13.2%)，頭痛 18 例(20.5%)，驚厥 4 例(5.9%)，眼瞼浮腫 6 例(8.8%)，腹瀉 3 例(4.4%)，皮膚出血點(diǎn)8 例(12.5%)，肝腫大7 例(12.9%)，脾腫大5例(7.3%)。另有皮疹10例(14.7%)，多為猩紅熱樣皮疹及斑丘疹，分布全身各部位。所有就診患兒均進(jìn)行血常規(guī)、肝功能、心肌酶譜等常規(guī)化驗(yàn)及胸片正側(cè)位檢查。

1.3 FQ-PCR實(shí)驗(yàn)室檢查 無菌咽拭子采集患兒咽喉分泌物、痰液標(biāo)本放入試管中備用。檢測(cè)儀器為羅氏公司Light Cycle全自動(dòng)熒光定量PCR儀。采用EB核酸擴(kuò)增熒光定量檢測(cè)試劑盒(中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司)對(duì)咽拭子標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測(cè)，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。操作步驟包括細(xì)胞分離、DNA提取和PCR擴(kuò)增分析。以病毒載量＞50 copies/ml為陽性。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)室及其他輔助檢查 血常規(guī):外周白細(xì)胞＞10×109/L 21例(30.9%)、＜10×109/L 8例(12.5%)，分類中異型淋巴細(xì)胞 ＞10%10例(12.5%)、單核細(xì)胞 ＞10%9 例(13.2%)，血小板減少4例(5.9%);肝功能:丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)增高(60～210 U/L)、天門冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)增高(90～320 U/L)5例(7.3%);心肌酶譜:肌酸激素(CR)增高4例(5.9%)、乳酸脫氨酶增高19例(27.9%)。X光胸片檢查23例，其中雙肺紋理紊亂及部分斑點(diǎn)狀陰影14例(20.6%)、肺門淋巴結(jié)腫大9例(13.2%)。FQ-PCR檢查本組127例標(biāo)本中EB-DNA陽性68例(53.3%)。

2.2 診斷 本組68例EB病毒感染陽性患兒，結(jié)合各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果及其臨床表現(xiàn)，診斷上呼吸道感染19例、咽炎扁桃體炎7例、支氣管炎肺炎15例、傳染性單核細(xì)胞增多癥17例、心肌炎3例、血小板減少性紫癜4例、病毒性腦炎1例、腎炎2例，大多數(shù)患兒有并發(fā)癥?；純簭陌l(fā)病到確診時(shí)間1～20 d、平均7 d。這些患兒從發(fā)病到確診為EB病毒感染時(shí)為止均給予過口服或靜點(diǎn)抗生素治療，甚至是長時(shí)間使用抗生素，但沒有顯著療效，確診后在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上加抗病毒治療(更昔洛韋)，多數(shù)患兒在2周內(nèi)臨床癥狀減輕，全部病例均好轉(zhuǎn)、痊愈出院，預(yù)后良好。

3 討論

EB病毒是皰疹病毒科γ亞科中惟一能引起人類感染的淋巴濾泡病毒，是目前臨床常見病毒之一［3］。EB病毒也是兒童常見病毒性疾病的感染源，其臨床表現(xiàn)變化多樣、輕重不一，可引起多系統(tǒng)病變，以發(fā)熱、咽喉炎典型癥狀及肝脾腫大、淋巴結(jié)腫大及周圍血液中淋巴細(xì)胞增多，并出現(xiàn)異型淋巴細(xì)胞為臨床特征，易于診斷［4］。但對(duì)非典型EB病毒感染或以循環(huán)、泌尿、呼吸、血液及神經(jīng)系統(tǒng)為主要癥狀的患兒易出現(xiàn)誤診和漏診。患兒如在原發(fā)病基礎(chǔ)上再感染EB病毒，可使其病情復(fù)雜并加重，致使延誤治療，出現(xiàn)并發(fā)癥等。因此，在診斷過程應(yīng)重視病原學(xué)診斷，凡對(duì)以呼吸道感染起病，伴有多系統(tǒng)臨床表現(xiàn)的患兒應(yīng)及時(shí)進(jìn)行EB-DNA檢測(cè)，以指導(dǎo)臨床正確診斷、合理用藥。

分離EB病毒病原體做病毒培養(yǎng)的技術(shù)要求高、操作復(fù)雜、所需時(shí)間長、陽性率低，一般在臨床較少采用。許多醫(yī)療機(jī)構(gòu)采用ELISA或免疫熒光技術(shù)檢測(cè)血清中特異性EB病毒抗體，但檢出率較低且只能定性，而且由于方法的局限性常有假陽性發(fā)生，給臨床確診帶來不便［5］。本院采集患兒呼吸道分泌物，以咽拭子提取標(biāo)本用FQ-PCR技術(shù)對(duì)病毒進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果證實(shí)該生物學(xué)診斷技術(shù)取材方便、快捷、靈敏、準(zhǔn)確率高，在輔助確診EB病毒感染和指導(dǎo)臨床治療方面具有良好的應(yīng)用前景。

［1］李中躍，樓金玕，陳潔.兒童EB病毒感染首發(fā)癥狀及其相關(guān)性疾病譜分析［J］.中華兒科雜志，2004，42(1):20-21.

［2］羅燕，王春如，毛瑋.兒童EB病毒感染相關(guān)疾病臨床分析［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)生，2009，47(34):25-26.

［3］Epstein M，Achong B，Bart Y.Virus particles in cultured lympho2 blasma from Burkitt’s lymphoma［J］.Lancet，1964，1(2):702-703.

［4］王群，謝正德.兒童EB病毒相關(guān)疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)和治療原則［J］.實(shí)用兒科臨床雜志，2010，25(10):706-708.

［5］莊國華，李標(biāo).EB病毒兩種實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法對(duì)比分析［J］.中國醫(yī)院感染學(xué)雜志，2009，19(13):1762-1764.