中藥制劑復(fù)方薏藍(lán)顆粒中龍膽苦苷的含量分析

陳毅華 楊志華 劉鎮(zhèn)峰

復(fù)方薏藍(lán)顆粒是本醫(yī)院的中藥自制制劑，于2010年在本醫(yī)院制劑室現(xiàn)有生產(chǎn)條件的基礎(chǔ)上，聯(lián)合廣東一方制藥廠的技術(shù)力量進(jìn)行生產(chǎn)，經(jīng)申報廣東省藥監(jiān)局審核批準(zhǔn)取得醫(yī)院中藥自制制劑注冊生產(chǎn)批準(zhǔn)文號(粵Z20100090)。該制劑由板藍(lán)根、連翹、龍膽草、夏枯草、重樓、紫草、薏苡仁等中藥材組成，具有清熱除濕、活血解毒的功效。臨床上用于治療濕熱蘊(yùn)毒型引起的帶狀皰疹、單純皰疹、濕疣、扁平疣等癥，療效確切。該制劑中藥材成分復(fù)雜，為控制本制劑的內(nèi)在質(zhì)量，保證臨床用藥效果，龍膽苦苷作為制劑中的主要成分之一，本文參考文獻(xiàn)［1，2］采用高效液相色譜法測定制劑中龍膽苦苷的含量，作為該制劑生產(chǎn)質(zhì)量的內(nèi)部控制標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 美國Waters 2695高效液相色譜系統(tǒng)，Waters 2487雙波長紫外檢測器，N2000色譜工作站，MILLIPOKE Smiplicity 185純水器，瑞士 CAMAG Reprostar(薄層成像系統(tǒng))，硅膠G薄層板(浙江省路橋四甲生化塑料廠)，G2170AA數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)。

1.2 試藥 龍膽苦苷對照品(批號0737-9910)購于中國藥品生物制品檢定所。復(fù)方薏藍(lán)顆粒由本醫(yī)院制劑室生產(chǎn)的中藥制劑，所用藥材均為生產(chǎn)用同批藥材。試劑：甲醇為進(jìn)口色譜純，水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。

1.3 含量測定

1.3.1 色譜條件 填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠;色譜柱：Shimpack CLC ODS(150 mm ×6.0 mm，5 μm);流動相：乙腈-水(13∶87);流速：1.0 ml/min，檢測波長：276 nm，進(jìn)樣量：20 μl［1，2］。

1.3.2 對照品溶液的制備 取龍膽苦苷對照品適量，精密稱定，用流動相溶解，并稀釋定容，制成每1 ml含龍膽苦苷0.5 mg的溶液，即得。

1.3.3 供試品溶液的制備 精密稱取本品粉末(過三號篩)5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25 ml，稱定重量，超聲提取20 min，取出放置室溫，加50%甲醇至原稱重。搖勻，濾過，棄去初濾液，續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.3.4 陰性對照溶液的制備 處方中除去龍膽按制劑工藝制備，制得陰性對照品溶液。

1.3.5 陰性試驗(yàn) 按上述儀器和試驗(yàn)條件，將龍膽苦苷對照品溶液，供試品溶液及陰性對照溶液分別進(jìn)樣測定，結(jié)果其他成分對龍膽苦苷的測定無干擾。

1.3.6 線性關(guān)系考察 精密吸取上述對照品溶液，并適當(dāng)稀釋。按測定時實(shí)際配制的對照品溶液濃度分別為0.259、0.518、0.777、1.036、1.295 mg/ml，分別精密吸取 10 μl注入液相色譜儀，每種濃度進(jìn)樣3次，測得平均峰面積分別為206758、413915、625456、8228830、1035451，以龍膽苦苷峰面積積分值對進(jìn)樣量(μg)進(jìn)行直線回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線：Y=392+8.0 ×104X，r=0.9998，表明龍膽苦苷進(jìn)樣量在2.6 ～13 μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

1.3.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一批號(20110513)的黃芩苷對照品溶液20 μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測得峰面積積分值，結(jié)果RSD為0.94%。

1.3.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取龍膽苦苷對照品溶液和供試品溶液各20 μl，按含量測定項(xiàng)下方法測定，在8 h內(nèi)每次間隔2 h進(jìn)樣測定1次，結(jié)果峰面積積分值前后變化不明顯，對照品溶液RSD為0.57%，供試品溶液的RSD為0.93%。

1.3.9 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批樣品(批號：20110513)5份，按以擬定的樣品測定方法，分別測定 5次，結(jié)果 RSD為1.21%。

1.3.10 回收率試驗(yàn) 精密稱取已知龍膽苦苷含量的樣品，分別加入一定量的龍膽苦苷對照品(3種不同水平，各3份)，按上述的樣品溶液制備并進(jìn)樣測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

1.3.11 樣品測定 分別精密吸取對照品溶液與樣品供試液各20 μl，按上述色譜條件測定。5批樣品中龍膽苦苷的含量測定結(jié)果見表2。

表1 龍膽苦苷回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 樣品中龍膽苦苷的含量測定結(jié)果(mg/g)

2 小結(jié)與討論

2.1 關(guān)于龍膽藥材中龍膽苦苷的含量測定方法，根據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)記載已有薄層色譜法、比色法和高效液相色譜法等。本文采用高效液相色譜法對樣品的測定具有較好的分辨性及重現(xiàn)性。在測定過程中發(fā)現(xiàn)：若采用流動相甲醇∶水(1∶4)得到的龍膽苦苷峰，峰形較寬。故采用乙腈∶水(13∶87)作為流動相，得到的龍膽苦苷峰峰形對稱，陰性樣品無干擾，與其他成分達(dá)到基線分離。

2.2 分析過程中，由于使用不同的硅膠板，必然存在著厚薄差異，影響測量結(jié)果，所以要測量板與板之間的矯正系數(shù)，方法如下：在各薄層板上各點(diǎn)5 μl的標(biāo)準(zhǔn)品，它的峰面積積分值與繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線板上的5 μl標(biāo)準(zhǔn)品峰面積積分值的比值，即為校正系數(shù)。

2.3 在桔梗的定性鑒別中曾采用了加酸水解，再用氯仿萃取的方法，但上樣量太大，效果不好，后改用酸水、氯仿雙項(xiàng)水解的方法，達(dá)到了很好效果。展開時，曾采用展開系統(tǒng)石油醚(60℃ ～90℃)-醋酸乙酯-冰醋酸(25∶7∶0.5)，斑點(diǎn)的分離度不好;氯仿-異丙醇-冰醋酸(9∶1∶0.5)，Rf值太大，后改為氯仿-異丙醇-冰醋酸(15∶1∶0.5)則達(dá)到了較好分離效果。

2.4 本文通過薄層鑒別分析，中藥材桔梗、枳殼、連翹的鑒別不僅專屬性強(qiáng)且重現(xiàn)性好，可作為復(fù)方清肺消痤顆粒制劑的定性指標(biāo)。對于定量測定，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)，選定制劑中黃芩苷的含量作為指標(biāo)。在測定時，對超聲提取法和熱回流提取法進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)效果相近，故選擇操作較簡便的超聲提取法。按處方制備工藝制成不含黃芩的陰性樣品，按樣品測定方法同法測定。結(jié)果表明陰性樣品中其他組分對黃芩苷的含量測定無干擾。

［1］中華人民共和國藥典(一部).北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010．

［2］何偉，張峰.龍膽瀉肝顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.山東醫(yī)藥工業(yè)，2002，21(2)：1．