夏 蓮(廣西北海食品藥品檢驗所,北海市 536000)
復方銀連顆粒是由金銀花、連翹等多味中藥組成的臨床驗方,具有清熱、解毒、涼血的功效,臨床用于治療痤瘡效果良好。原方以煎劑入藥,筆者將其改成顆粒劑,既保持了煎劑吸收較快、作用迅速的優(yōu)點,又克服了煎劑需臨時煎煮、服用量大、攜帶儲存不方便、久置易發(fā)霉變質等缺點。本試驗采用高效液相色譜(HPLC)法,對復方銀連顆粒君藥金銀花中有效成分綠原酸的含量進行了測定,以為該制劑的質量控制提供參考依據(jù)。
Agilent1100型HPLC儀、8453紫外分光光度計(美國安捷倫公司);LG16-W高速微量離心機(北京醫(yī)用離心機廠);SHZ-DⅢ予華牌循環(huán)水真空泵(2 800 r·min-1,鞏義市英峪予華儀器廠);BS224S電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司);SB5200DT超聲波清洗機(寧波新芝生物科技股份有限公司,工作頻率:40 kHz,功率:200 W)。
綠原酸對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110715-200815);乙腈(色譜純,天津市四有科技發(fā)展有限公司);磷酸(分析純,中國醫(yī)藥集團上?;瘜W試劑公司);復方銀連顆粒(批號:100901、100903、100906)及其陰性對照顆粒(筆者自制)。
參照2010年版《中國藥典》(一部)“金銀花”項下綠原酸的測定條件[1],并通過綠原酸對照品的紫外掃描結果,選擇327 nm為檢測波長。
色譜柱:Welchrom C18(150 mm×4.6 mm,5 μm);流動相:乙腈-0.1%磷酸(10∶90);檢測波長:327 nm;流速:1.0 mL·min-1;柱溫:30℃。分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液與陰性對照溶液各10 μL,注入液相色譜儀進行測定。結果表明,綠原酸峰與其他峰分離良好,陰性對照無干擾;理論板數(shù)按綠原酸峰計算應不低于3 000。色譜見圖1。
2.3.1 對照品溶液 精密稱取綠原酸對照品適量,置10 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成每1 mL含0.607 mg的對照品溶液。再精密量取0.5 mL,置2 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成每1 mL含151.75 μg的對照品溶液。再精密量取1 mL,置2 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成每1 mL含75.87 μg的對照品溶液,備用。
2.3.2 供試品溶液 取本品10 g,研細,取約1 g,精密稱定,置25 mL量瓶中,加純凈水超聲溶解,冷卻至室溫后定容,搖勻,即得。
2.3.3 陰性對照溶液 按處方量稱取缺金銀花的其他藥材,制成缺綠原酸成分的陰性對照顆粒,并根據(jù)“2.3.2”項下方法制成陰性對照溶液。
分別精密量取濃度為151.75 μg·mL-1的對照品溶液2、4、6、8、10 μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。以峰面積積分值(Y)為縱坐標,進樣量(X,μg)為橫坐標,進行線性回歸,得回歸方程為Y=2 970.3X+61.42(r=0.999 6,n=5)。結果表明,綠原酸進樣量在0.303 5~1.517 5 μg范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。
精密量取濃度為75.87 μg·mL-1的對照品溶液10 μL,按上述色譜條件注入液相色譜儀,重復進樣5次,記錄峰面積。結果,平均峰面積為2 369.9,RSD=1.72%(n=5),表明儀器精密度良好。
取復方銀連顆粒細粉(批號:100901)適量,共6份,分別按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液,按上述色譜條件測定。結果,樣品中綠原酸的平均含量為1.520 mg·g-1,RSD=2.37%(n=6),表明本方法重復性良好。
取同一供試品溶液,分別于制備后0、2、4、8、12 h進樣10 μL,按上述色譜條件測定。結果,綠原酸峰面積的RSD=1.15%(n=5),表明供試品溶液在12 h內穩(wěn)定。
取已知含量的復方銀連顆粒細粉(批號:100901)6份,每份約0.5 g,精密稱定,分別精密加入濃度為0.607 mg·mL-1的綠原酸對照品溶液1.2 mL,按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液,按上述色譜條件測定,計算加樣回收率,結果見表1。
表1 加樣回收率試驗結果(n=6)Tab 1Results of recovery tests(n=6)
分別取3批復方銀連顆粒各10 g,研細,取約1 g,按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液,并按上述色譜條件測定樣品中綠原酸的含量,結果見表2。
表2 樣品含量測定結果(n=3)Tab 2Results of content determination of samples(n=3)
《中國藥典》和某些文獻采用不同比例的乙腈-0.4%磷酸溶液[1~5]作為流動相測定綠原酸的含量,但該流動相酸度較大,易損傷柱子,縮短柱子的壽命。因此,筆者通過參考文獻[6,7],采用乙腈-0.1%磷酸溶液(10∶90)作為流動相。結果表明,綠原酸的峰分離效果與峰形的對稱性等方面與乙腈-0.4%磷酸溶液作流動相時比較無顯著差異,故選擇該系統(tǒng)作為流動相。
筆者曾對比乙醇超聲提取法[5~10]和純凈水超聲提取法對供試品制備的影響,結果表明,采用乙醇超聲法制備供試品時,綠原酸的提取量僅約為純凈水超聲法提取量的69%;同時曾采用乙酸乙酯萃取法[11,12]對供試品進行純化,結果表明此法雖能除去部分雜質,但綠原酸損耗較高。綜合考慮,選擇純凈水超聲提取法作為供試品的制備方法。
綜上,本方法操作簡便、可靠,可用于復方銀連顆粒的質量控制。
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