原發(fā)性肝癌的體外化療藥物敏感性探析

崔茹龍

（吉林省敦化市醫(yī)院腫瘤泌尿外科，吉林 敦化 133700）

原發(fā)性肝癌是常見的惡性腫瘤之一，惡性度高，且近年來發(fā)病有上升的趨勢[1]，原發(fā)性肝癌的治療方法較多，現(xiàn)在主張?jiān)缙趶氐?、積極的綜合治療，其中，化療在原發(fā)性肝癌的治療屬于較為有效的手段之一，但由于患者對藥物的敏感性不盡相同臨床上化療藥物的選擇是進(jìn)行化療的難題之一，本研究旨在通過測定5例肝癌患者對7種化療藥的敏感率，以探究 原發(fā)性肝癌的體外化療藥物敏感性。

1 資料與方法

1.1 入選標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn)

入選標(biāo)準(zhǔn)：符合原發(fā)性肝癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)（影像學(xué)檢查有＞2cm的原發(fā)病灶且影像檢查手段超過兩種，AFP超過400μg/L，經(jīng)組織病理證實(shí)為原發(fā)性肝癌），無其他嚴(yán)重心、肺、腦、腎等嚴(yán)重疾病以及貧血等血液方面疾病，之前從未進(jìn)行過化療，對化療藥物不過敏，在我院進(jìn)行全程治療并隨訪完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：缺乏組織病理檢查，對化療藥物過敏，哺乳妊娠期婦女除外。

1.2 一般資料

選取我院2005年1月至2010年12月間確診的原發(fā)性肝癌患者50例，男41例，女9例，年齡17～75歲，平均年齡53歲，所有患者均符合入選標(biāo)準(zhǔn)，患者行手術(shù)治療后，第一時(shí)間采集新鮮肝癌樣本50例，并在無菌條件下及時(shí)送至實(shí)驗(yàn)室。

1.3 化療藥物及其濃度

本實(shí)驗(yàn)所選的化療藥物均為注射液，且均為臨床上常用的治療原發(fā)性肝癌的化療藥物，藥物體外濃度根據(jù)體內(nèi)最大血藥濃度：阿霉素（ ADM，意大利進(jìn)口，0.4μg/mL） 、5-氟脲嘧啶（5-Fu，上海啟東制藥廠產(chǎn)品，10μg/mL） 、順鉑（DDP，錦州九泰藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，4μg/mL） 、絲裂霉素（ MMC，日本進(jìn)口，3μg/mL） 、長春新堿（VCR，中國民生藥廠，0.5μg/mL）、羥基喜樹堿（黃石李時(shí)珍藥業(yè)生產(chǎn)，4μg/mL）、甲氨蝶呤（ MTX，上海12制藥廠產(chǎn)品，2μg/mL） 。

1.4 儀器與試劑

酶標(biāo)儀、倒置顯微鏡、圖像分析儀、100級工作臺、二氧化碳培養(yǎng)箱、小牛血清、二甲亞砜、四甲基氮唑藍(lán)、RPMT-1640培養(yǎng)液、96孔培養(yǎng)板、Ficoll分離液。

1.5 方法

標(biāo)本處理方法：所有標(biāo)本均為肝癌患者手術(shù)中在無菌環(huán)境下切取，將各標(biāo)本周緣的壞死組織、脂肪以及纖維組織等切掉，剩下生長較好的腫瘤組織塊，將腫瘤組織塊放進(jìn)D-Hank液中充分洗滌，洗凈之后將組織塊剪成1mm大小的碎塊，將0.25%的胰蛋白酶注入組織碎塊中，并在37°C下放置30min，使組織塊充分消化，然后采用鋼篩進(jìn)行過濾，制備單細(xì)胞懸液，將制備好的細(xì)胞懸液放于含F(xiàn)icoll分離液的分離管中進(jìn)行離心，取懸液上層的乳白色層，將其放于RPMT-1640培養(yǎng)液，采用臺盼藍(lán)染色，并進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)，在96孔培養(yǎng)板接種，各孔均加入100μL細(xì)胞懸浮液。MTT檢測法：在二氧化碳培養(yǎng)箱中放入96孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)箱溫度37°C，5%CO2飽和濕度，培養(yǎng)時(shí)間24h，將所有孔分為兩組，實(shí)驗(yàn)孔與對照孔，化療藥物加入實(shí)驗(yàn)孔中，等量PBS液加入對照孔中，延長培養(yǎng)時(shí)間至48h，在各孔中加入MTT25μL，在培養(yǎng)6h，在每孔中加DMSO100μL，通過震蕩使藍(lán)色結(jié)晶盡快溶解，結(jié)晶徹底溶解后將培養(yǎng)板放于酶標(biāo)儀上并測量各個(gè)孔的光密度值，檢測波長為570nm。參考波長630nm。計(jì)算抑制率，公式為：抑制率=（1-實(shí)驗(yàn)孔平均OD值/對照孔平均OD值）×100%。高度敏感為IR＞50，敏感為30＜IR＜50，不敏感為IR＜30。

2 結(jié) 果

經(jīng)過數(shù)據(jù)采集，在所檢測的化療藥物中，羥基喜樹堿敏感率最高，為100%，長春新堿敏感率最低，為18%，肝癌患者對化療藥物的敏感率由高到低的順序?yàn)榱u基喜樹堿＞5-氟脲嘧啶＞絲裂霉素＞順鉑＞阿霉素＞甲氨蝶呤＞長春新堿（表1），各組敏感性具有明顯的差異（P＜0.05）。

表1 體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果

3 討 論

原發(fā)性肝癌是常見的惡性腫瘤之一，惡性度高，且近年來發(fā)病有上升的趨勢，原發(fā)性肝癌的治療方法較多，現(xiàn)在主張?jiān)缙趶氐住⒎e極的綜合治療[2]，將多種治療手段序貫結(jié)合應(yīng)用，例如，原發(fā)性肝癌動(dòng)脈化療栓塞治療后合并采用手術(shù)切除治療、手術(shù)治療后合并采用放、化療等其他治療手段。在原發(fā)性肝癌的治療上，采用全身化療取得的臨床效果不明顯，且在患者合并腹水、黃疸以及全身衰竭等情況下不能采用全身化療，同時(shí)，肝癌患者對化療藥物的敏感性反應(yīng)也參差不齊，即使同種病理類型的肝癌敏感性反應(yīng)也不盡相同，因此，在原發(fā)性肝癌的化療中，檢測患者對藥物的敏感性是非常必要的。

在本研究的所用7中化療藥物中，羥基喜樹堿敏感率最高，為100%，長春新堿敏感率最低，為18%，肝癌患者對化療藥物的敏感率由高到低的順序?yàn)榱u基喜樹堿＞5-氟脲嘧啶＞絲裂霉素＞順鉑＞阿霉素＞甲氨蝶呤＞長春新堿，各組敏感性具有明顯的差異（P＜0.05），5-氟脲嘧啶在臨床治療肝癌中較為常用，但本研究的結(jié)果中，敏感率最高的化療藥物為羥基喜樹堿，在臨床應(yīng)用中，可以考慮將兩種藥物聯(lián)合應(yīng)用，以減少毒副作用以及耐藥性的發(fā)生，5-氟脲嘧啶屬抗代謝藥[3]，能夠阻斷DNA的合成以及干擾RNA的合成，羥基喜樹堿能夠與DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶發(fā)成反應(yīng)，從而抑制DNA合成，二者合用可以起到更好的療效，長春新堿能夠影響微管蛋白聚合影響癌細(xì)胞有絲分裂，并可以干擾蛋白質(zhì)代謝，對腫瘤具有一定的殺傷作用，但在本研究中，長春新堿的敏感率為18%，在所用7中化療藥物中最低，具體機(jī)制有待進(jìn)一步探究。本研究中所采用的藥敏試驗(yàn)為MTT比色法，MTT比色法屬于藥敏試驗(yàn)中的一種，具有簡便、經(jīng)濟(jì)、重復(fù)性好的特點(diǎn)，并且能夠篩選多種藥物[4]，可以為臨床上腫瘤個(gè)體化治療提供較為可靠的依據(jù)。

綜上所述，原發(fā)性肝癌對化療藥物的敏感性不同，即使同種病理類型的肝癌同同種化療藥物的敏感性亦有差別，臨床治療應(yīng)該根據(jù)藥敏試驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行個(gè)體化綜合治療。

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