HPLC法測(cè)定云芝肝泰顆粒中葡萄糖的含量

馬新民 趙俊華

（吉林省白城市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 白城 137000）

云芝肝泰顆粒由多孔菌科真菌云芝干燥子實(shí)體粗提取物制成的混懸性顆粒，收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》十三冊(cè)[1]。本品有免疫調(diào)節(jié)劑，臨床上主要用于治療慢性活動(dòng)性肝炎。處方中云芝的主要成分有云芝多糖、三萜類成分，其他有核苷類、甾醇類、生物堿類等，2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷為云芝肝泰顆粒的主要指標(biāo)之一[2]。高效液相色譜法有很高分離能力、所達(dá)到的靈敏度極高、應(yīng)用也非常廣泛。應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定云芝肝泰顆粒中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，測(cè)定準(zhǔn)確、快捷、可信。

1 儀器與材料

日本島津LC-2010A高效液相色譜儀，（包括二元梯度泵、紫外線檢測(cè)器）。甲醇為色譜純（USA DIKMA-PURE：LOT：57440）；2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品110844-200505（中國生物制品檢定所）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑：乙腈∶水（24∶76）為流動(dòng)相；流速0.8mL/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量10μL；檢測(cè)波長320nm；理論板數(shù)按2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面積計(jì)算不低于1500。

2.2 對(duì)照品溶液制備

取2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成每lmL含20μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液制備

精密稱取裝量差異項(xiàng)下的供試品，精密稱取2.5g，置25mL棕色量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，離心，取上清液，即得。

2.4 陰性對(duì)照溶液

取本品處方缺云芝的其他組分，按“2.3”項(xiàng)下方法制備。

2.5 線性關(guān)系考察

圖1 干擾試驗(yàn)

精密吸取2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品溶液（0.02010mg/mL）4.0μL、7.0μL、10.0μL、13.0μL、16.0μL，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（mg）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：Y=3968841.3X-2682.5，r=0.99999，結(jié)果表明2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在8.04～32.16μg/mg范圍內(nèi)具備良好的線性關(guān)系。

2.6 干擾試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液，按上述色譜條件測(cè)定，陰性樣品無干擾。結(jié)果見圖1。2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷出峰位置在3min左右，與其他組分均能達(dá)到基線分離。

2.7 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品溶液（0.02010mg/mL），10μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，RSD為0.4%（n：5）。結(jié)果表明，精密度較好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液（批號(hào)20080303），分別于配置后0，2，4，6，8，12，18h進(jìn)樣，依次進(jìn)行測(cè)定，最終結(jié)果表明，供試品溶液在18h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

同一批號(hào)樣品（批號(hào)20080303）稱取5份，分別按上述方法測(cè)定，RSD為1.0%結(jié)果表明此法重復(fù)性良好。

2.10 回收試驗(yàn)

采用加樣回收法，精密稱取同一批號(hào)樣品（批號(hào)20080303，含量43μg/袋，）9份各約1.25g，分別精確加入對(duì)照品適量，按“2.3”項(xiàng)下方法及色譜條件，進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果表

2.11 樣品測(cè)定結(jié)果

按照“2.2”、“2.3”的處理方法，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定3批樣品，測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果表

3 結(jié) 論

通過紫外分光光度法與樣品HPLC法測(cè)定樣品含量對(duì)比，HPLC法更適合，方法簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性較好，靈敏度極高，從而準(zhǔn)確可行。

[1]WSB-2527-97,衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第十三冊(cè))[S].1997.

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.