HPLC法測(cè)定導(dǎo)赤丸中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量

陳興田 黃金華

（1 徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科，江蘇 徐州 221002；2 *南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇 南通 226001）

導(dǎo)赤丸收載于1995年版《中國藥典》，是由大黃為主藥，配以連翹、黃連、梔子等中藥制成的大蜜丸，具有利尿通便，清熱瀉火的功效。文獻(xiàn)報(bào)道有關(guān)導(dǎo)赤丸的質(zhì)量控制研究多為熒光掃描法[1,2]，常只測(cè)定單一成分。在導(dǎo)赤丸標(biāo)準(zhǔn)中制訂了顯微鑒別與薄層色譜鑒別，但無其中大黃的含量測(cè)定；本實(shí)驗(yàn)我們采用高效液相色譜法，測(cè)定了其中大黃的5種成分含量，達(dá)到進(jìn)一步完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，更好地控制其質(zhì)量，起到良好效果。

1 儀器與試藥

KQ-250VDB型雙頻數(shù)控超聲波清洗器由昆山市超聲儀器有限公司出品；高效液相色譜儀采用島津LC-20AD型，配以Shimadzu VPODS色譜柱（規(guī)格4.6mm×250mm，5μm）紫外檢測(cè)器采用日本Shimadzu公司出產(chǎn)的SPD-20A型；電子天平采用日本Shimadzu公司的AUW120D型； LC-20AD泵；標(biāo)準(zhǔn)品蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素甲醚和大黃素為中國藥品生物制品檢定所出，純度均≥98%；試驗(yàn)樣品導(dǎo)赤丸由北京中藥五廠，批號(hào)（100817、100922、101008）。水為自制的多重蒸水，甲醇、乙腈為色譜純；其他均為分析純?cè)噭?/p>

2 方法與結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)品溶液的制備

將導(dǎo)赤丸用粉碎機(jī)粉碎，然后取細(xì)粉精密稱取1.0g，加80 mL甲醇溶解，再分2次超聲提取，每次20min，合并后濾過，回收濾液中的甲醇并濃縮至干，酸化時(shí)加40mL10%鹽酸，搖勻后分3次萃取，每次用氯仿100mL，3次萃取液合并后回收氯仿，余下殘?jiān)儆眉状枷♂屩?0 mL，用0.50μm微孔濾膜過濾，即為實(shí)驗(yàn)品溶液[3,4]。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的制備

精密稱取純度很高的對(duì)照品大黃素15mg，大黃酸5mg，蘆薈大黃素15mg，大黃酚5mg，大黃素甲醚5mg分別放置棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋到50mL，充分搖勻，得各對(duì)照品母液。然后再分別吸取母液1、2、5、10、15mL置同棕色容量瓶中，用甲醇溶解稀釋到50mL，搖勻，就成為對(duì)照品混合液。見圖1。

圖1 對(duì)照品（A）和供試品（B）色譜圖

2.3 線性關(guān)系

準(zhǔn)備好液相色譜儀，流動(dòng)相采用乙腈-0.1%磷酸梯度洗脫；設(shè)定波長262nm；控制流速1.0mL/min；柱溫30℃；每次進(jìn)樣量10μL；取對(duì)照品混合溶液1、4、8、12、20μL，依次吸注入，測(cè)定其峰面積。橫坐標(biāo)是測(cè)得的濃度，縱坐標(biāo)是相應(yīng)峰面積積分值，進(jìn)行線性回歸處理。計(jì)算測(cè)得的蘆薈大黃素的回歸方程是Y = 26312468.4012 X-368728.1998，r= 0.9994，線性范圍為0.042～0.841μg；大黃素的回歸方程為Y=1529651.5149 X-21996.5749，r= 0.9996，線性范圍為0.085～1.688μg；大黃酸的回歸方程為Y=1235866.2489 X-96883.3987，r=0.9997，線性范圍為0.167～3.371μg；大黃酚的回歸方程為Y=2120163.7978 X-23997.4768，r=0.9998，線性范圍0.091～1.1804μg；大黃素甲醚的回歸方程為Y=804967.1203X-5978.1309，r= 0.9993，線性范圍為0.170～3.61μg。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)

參照上述2.3方法，取同一供試品液連續(xù)加樣5次，測(cè)定5種活性成分的峰面積并計(jì)算出各成分的RSD。測(cè)得的蘆薈大黃素、大黃素、大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚峰面積的RSD分別是2.19%、1.63%、2.91%、2.51%和1.72%，表明該儀器的精密度良好。

2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

參照上述2.3方法制備供試品溶液，同一批5份依次測(cè)定。實(shí)驗(yàn)顯示蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚峰面積的RSD分別為2.10%、2.09%、2.18%、2.13%和1.88%，表明此法試驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按照上述色譜條件，取同一供試品溶液，在0、2、4、6、8h 5個(gè)節(jié)段分別進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果測(cè)得蘆薈大黃素、大黃素、大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚峰面積的RSD分別為0.8%、2.18%、1.63%、1.49%和1.38%，顯示供試品溶液在5分段時(shí)間內(nèi)比較穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取已知含量的導(dǎo)赤丸供試品，精密稱取1 g共5份，再各分別加入1.0mL對(duì)照品混合液，混合后使各成份含量分別約為0.056、0.19、0.12、0.23、0.19mg。按照上述“2.3”項(xiàng)的方法，進(jìn)行各成分的含量測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算回收率分別是：99.6%、99.1%、99.6%、98.8%、99.2%；RSD分別為1.30%、1.70%、0.89%、0.90%和99.6%（n= 5）。

2.8 樣品的測(cè)定

分別吸取供試品和對(duì)照品溶液各10μL，以上述同等條件測(cè)定，測(cè)得結(jié)果用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算樣品中各大黃成分的含量，其中3批樣品測(cè)定結(jié)果見表1（批號(hào)分別為100817、100922、101008）。見表1。

表1 樣品含量測(cè)定結(jié)果(mg/g)

3 討 論

本試驗(yàn)確立了導(dǎo)赤丸中五種大黃成分的含量測(cè)定方法；在實(shí)驗(yàn)過程中我們采用超聲提取法，此方法相對(duì)其它如加熱回流法操作簡便，結(jié)果也準(zhǔn)確，穩(wěn)定重復(fù)好，是一個(gè)較好的提取法，可以作為該產(chǎn)品質(zhì)量控制使用[5,6]。

[1]夏青.薄層掃描法測(cè)定導(dǎo)赤丸中鹽酸小檗堿的含量[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2008,24(6):659-660.

[2]鄔國慶,周富榮.薄層掃描法測(cè)定導(dǎo)赤丸中鹽酸小檗堿的含量[J].中國中藥雜志,1999,24(7):412-413.

[3]江蘇省藥品標(biāo)準(zhǔn).江蘇省衛(wèi)生局編[S].南京: 江蘇科學(xué)技術(shù)出版社,1977:260.

[4]國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典 (一部) [M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:214.

[5]陳廣通,李玉琴,黃金華,等. HPLC法測(cè)定十滴水中五種活性成分的含量[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2010,7(29):40-42.

[6]陳廣通,汪冬庚,李玉琴,等.赤丸中大黃5種成分的HPLC測(cè)定[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2010,20(5):621-622.