高效液相色譜法測(cè)定鹽酸嗎啉胍注射液的含量

張樹強(qiáng)

(安徽省蚌埠市食品藥品檢驗(yàn)所，安徽 蚌埠 233000)

鹽酸嗎啉胍為抗病毒藥，主要用于流感病毒及皰疹病毒感染。鹽酸嗎啉胍注射液的含量測(cè)定方法為紫外分光光度法[1]。筆者參考文獻(xiàn)[2－3]，采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定鹽酸嗎啉胍注射液的含量，方法靈敏、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100 Serise高效液相色譜儀，VWD紫外可變檢測(cè)器，Agilent 1100型自動(dòng)進(jìn)樣器，Agilent液相色譜工作站;日本島津UV－2401PC型紫外可見分光光度計(jì);Mettler AE－240型電子分析天平(0.01 mg)。鹽酸嗎啉胍對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為100483－200402，供含量測(cè)定用);鹽酸嗎啉胍注射液(河北天成藥業(yè)有限公司，批號(hào)分別為0811221，0901129，0901174，規(guī)格均為1 mL∶50 mg);甲醇為色譜純;冰醋酸、三乙醇胺為分析純;水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent Technologies Eclipse XDB C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:三乙醇胺(冰醋酸調(diào)節(jié) pH 至 4.2)－ 水－甲醇(1 ∶400 ∶100);檢測(cè)波長:237 nm;流速:0.8 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL。

2.2 溶液制備

精密量取鹽酸嗎啉胍注射液2 mL，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相振搖使溶解，取1 mL，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密稱取鹽酸嗎啉胍對(duì)照品100.68 mg，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量，振搖使溶解，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，取10 mL，置200 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。按處方比例稱取除鹽酸嗎啉胍外的輔料適量，制成鹽酸嗎啉胍陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性考察:分別精密量取2.2項(xiàng)下3種溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。由圖1可見，輔料對(duì)鹽酸嗎啉胍的含量測(cè)定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取對(duì)照品溶液 2.0，3.0，4.0，5.0，8.0，10.0，15.0，20.0 mL，置 50 mL 量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取各質(zhì)量濃度溶液10 μL，注入液相色譜儀，每種質(zhì)量濃度重復(fù)進(jìn)樣4次，記錄峰面積，以鹽酸嗎啉胍峰面積為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(μg)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=55.6039 X+14.6354，r=0.9999(n=8)。結(jié)果表明，鹽酸嗎啉胍質(zhì)量濃度在 4.03 ～40.27μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密量取對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣8次，記錄色譜圖。結(jié)果峰面積的 RSD為0.088%(n=8)。

重復(fù)性試驗(yàn):精密量取鹽酸嗎啉胍注射液(批號(hào)為0811221)共6份，按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，精密量取10 μL，注入液相色譜儀。結(jié)果鹽酸嗎啉胍含量的 RSD為0.24%(n=6)。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取依法制備的供試品溶液，于0，4，8，12 h時(shí)分別進(jìn)樣測(cè)試，記錄色譜圖。結(jié)果鹽酸嗎啉胍峰峰面積的 RSD為0.36%(n=4)，表明鹽酸嗎啉胍在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):精密量取鹽酸嗎啉胍注射液(批號(hào)為0811221)2 mL，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)項(xiàng)稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，共9份，分成3組，每組按高、中、低分別加入對(duì)照品溶液6，10，14 mL，加流動(dòng)相稀釋至刻度，精密量取10 μL，注入液相色譜儀，計(jì)算鹽酸嗎啉胍含量。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測(cè)定

精密量取鹽酸嗎啉胍注射液2 mL，依法制備供試品溶液，精密量取10 μL，注入液相色譜儀進(jìn)行色譜分析，計(jì)算含量。與國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中紫外分光光度法比較，結(jié)果見表2。

3 討論

在流動(dòng)相選擇中，曾試驗(yàn)三乙醇胺(冰醋酸調(diào)節(jié)pH至4.2)－水－甲醇(1∶400∶100)、庚烷磺酸鈉溶液－甲醇－乙腈(25∶30∶18)、磷酸鹽緩沖液(含0.025 mol/L磷酸二氫鉀、0.025 mol/L庚烷磺酸鈉和0.2%三乙胺，用磷酸調(diào) pH至3.0)－甲醇(65∶35)，均得到了很好分離效果，考慮流動(dòng)相配制的難易和毒性，最終選擇第1種流動(dòng)相。本法靈敏、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便，可作為鹽酸嗎啉胍注射液含量測(cè)定方法的檢查方法。

表1 鹽酸嗎啉胍加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

表2 鹽酸嗎啉胍注射液含量測(cè)定結(jié)果(標(biāo)示量%，n=3)

[1]WS－10001－(HD－0651)－2002.國家藥品標(biāo)準(zhǔn)·化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)(第七冊(cè))[S].

[2]周小露，何勇虎，伍思強(qiáng)，等.治感佳片中對(duì)乙酰氨基酚和鹽酸嗎啉胍的含量測(cè)定[J].中國藥業(yè)，2008，17(24):24.

[3]方東偉，王正權(quán).反相高效液相色譜法測(cè)定鹽酸嗎啉胍片的含量[J].中國藥業(yè)，2006，15(3):41.