吲達帕胺片體外溶出度考查*

王 昕，唐素芳，高立勤，杭太俊

(1.天津市藥品檢驗所，天津 300070； 2.中國藥科大學，南京 210009)

吲達帕胺(Indapamide)是一種具有降壓利尿雙重作用的非噻嗪類吲哚衍生物，通過抑制遠端腎小管皮質(zhì)稀釋段的再吸收水與電解質(zhì)而發(fā)揮作用。該藥以其降壓作用持久、毒副作用小、價格低廉等特點受到廣大高血壓患者的青睞，是臨床用于抗高血壓治療的常用藥之一。目前，國內(nèi)有多個廠家生產(chǎn)吲達帕胺片，各廠家生產(chǎn)工藝的技術含量不同，其產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量也不同。

吲達帕胺片在《中國藥典》和進口藥品注冊標準中均有收載。其中，《中國藥典》2005年版二部[1]采用乙醇-水(5∶895)作為溶出介質(zhì)。不難看出，由于本品的難溶解性使得在溶出介質(zhì)中使用了有機溶劑以期達到滿意的溶出曲線，但這與人體的實際生理情況相差很大；《中國藥典》2010年版二部[2]將溶出介質(zhì)修訂為pH 6.8的磷酸鹽緩沖液；進口藥品注冊標準(J×19990200)采用0.1 mol/L鹽酸溶液作為溶出介質(zhì)。對于一個理想的藥物來說，無論患者體內(nèi)的胃酸水平是否正常、亦無論患者是身強力壯的年輕人還是胃腸蠕動功能較弱的老年人都應該具有一定的、適當?shù)捏w外溶出行為，才能保證患者服藥后有一定的療效和作用。為此，本試驗選擇上述現(xiàn)行兩方法及參照日本“藥品品質(zhì)再評價”工程中推薦使用的模擬人體消化道環(huán)境的4種溶劑和條件[3]測定溶出度，旨在考查國產(chǎn)與進口吲達帕胺片的內(nèi)在質(zhì)量。

1 儀器與藥品

1.1儀器 AT-TSmart 藥物溶出度儀(美國SOTAX公司)；UV-2450紫外分光光度計(日本島津公司)；LC-2010C高效液相色譜儀(Agilent公司)。

1.2試藥 吲達帕胺對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，純度99.5%)；吲達帕胺片A廠(法國施維雅藥廠，批號835867)；B廠(新疆，批號20091023)；C廠(河北省，批號090602)；D廠(湖北省，批號20091001)。甲醇為色譜純，甲酸、冰醋酸、鹽酸、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、醋酸鈉、氯化鈉和氫氧化鈉均為分析純。

2 試驗條件的選擇

2.1溶出度試驗條件的確定 考慮患者年齡、體質(zhì)、身體狀況等的不同，本試驗采用現(xiàn)行的進口藥品注冊標準、《中國藥典》2010年版方法及日本“藥品品質(zhì)再評價工程”中推薦使用的四種溶劑(以下分別簡稱為方法1～6)分別測定。方法為取本品，照溶出度測定法(《中國藥典》2010年版二部附錄Ⅹ C)，方法、轉(zhuǎn)速、溶出介質(zhì)見表1，依法操作，取樣時間為5、10、15、30、45、60和90 min及2、3、4、5和6 h(2 h后連續(xù)兩個取樣時間點的溶出量達到90%時可提前結(jié)束)，取溶液3 ml(同時補液)，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取吲達帕胺對照品25 mg，精密稱定，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，精密量取適量，用溶出介質(zhì)稀釋制成每1 ml中含吲達帕胺約為5 μg或2.5 μg的溶液，作為對照品溶液，測定方法見表1。

2.2溶出度測定方法的建立 方法1和2分別采用紫外分光光度法中的雙波長(A240-A275)和單波長(A240)法測定，日本再評價方法只提供了模擬人體消化液的4種溶出介質(zhì)。經(jīng)試驗，采用各生產(chǎn)廠提供的處方配制輔料溶液(采用各方法項下的溶劑制備)，經(jīng)紫外吸收圖譜的掃描可以看出，輔料溶液在本品的最大吸收波長240 nm處有紫外吸收，由于供試液自身的吸收度值偏低，故輔料對測定有一定的影響，且除方法2中A240和A275近似為等吸收外，其他方法兩吸收值均有一定差距。為使測定結(jié)果準確，建立專屬性更強的HPLC法進行測定。

表1 溶出度試驗條件

2.2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水-甲酸(55∶45∶0.1)為流動相，檢測波長為240 nm，進樣20 μl,流速1.0 ml/min，理論板數(shù)按吲達帕胺峰計算為5 063。在該色譜條件下，輔料溶液對測定無影響，被測成分峰保留時間適宜，與相鄰雜質(zhì)峰可達基線分離，結(jié)果滿意。色譜圖見圖1。圖1中A圖1-6分別代表表1 方法1～6測得結(jié)果。

1.吲達帕胺

2.2.2線性關系考查 取吲達帕胺對照品約12.5 mg，精密稱定，置250 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，精密量取該溶液1、2、4、6、8、10和20 ml，分別置200 ml量瓶中，用各自的溶出介質(zhì)定容至刻度，搖勻，精密量取上述溶液各20 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度C為橫坐標，以峰面積A為縱坐標，繪制A-C曲線，結(jié)果表明，吲達帕胺在0.250 6～5.012 μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關系良好，見表2。

表2 線性試驗測定結(jié)果

2.2.3回收率試驗 取吲達帕胺對照品約25 mg，精密稱定，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。精密量取對照品儲備液3、4和5 ml各3份置50 ml量瓶中，分別加入1片的輔料量，用各自的溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，再分別精密量取5 ml置50 ml量瓶(方法1)或100 ml量瓶(方法2～6)中，用各自的溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另精密量取對照品儲備液適量，用各自的溶出介質(zhì)稀釋制成每1 ml中含吲達帕胺5 μg(方法1)或2.5 μg(方法2～6)的溶液作為對照品溶液。精密量取供試品溶液和對照品溶液各20 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算各濃度水平的平均回收率，結(jié)果見表3。

2.2.4穩(wěn)定性試驗 取對照品溶液和供試品溶液分別在室溫下放置0、2、8和24 h后進樣測定峰面積，結(jié)果顯示本品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3 溶出度測定

3.1溶出度測定 取4批樣品，按上述6種試驗條件分別測定不同時間的累積溶出百分率，溶出曲線見圖2。

表3 回收率測定結(jié)果(n=3)

圖2 6種測定條件下4批樣品的溶出曲線

3.2數(shù)據(jù)處理及分析 采用美國FDA推薦使用的相似因子法。相似因子f2的數(shù)學表達式為：

式中：Ti為i時間參比制劑累積釋藥百分率；Ri為i時間受試制劑累積釋藥百分率；n為取樣時間點個數(shù)。該方法計算的基本假設是受試制劑與參比制劑的累積溶出度差的平方和最小。

3.2.1在相同測定條件下國產(chǎn)制劑與進口制劑溶出行為的差異 以進口制劑(樣品A)的溶出曲線為參比，分別將相同測定條件下國產(chǎn)樣品的溶出曲線與其相比，計算f2值(表4)。以“相似因子f2≥42認為曲線相似”為判定原則，B廠制劑在上述試驗條件下的溶出行為與進口制劑均相似；而C、D廠制劑無論溶出介質(zhì)酸性如何，其溶出度與A制劑相比不相似。說明與進口制劑相比，國產(chǎn)制劑質(zhì)量參差不齊，有些產(chǎn)品還有顯著差異。

表4 與進口制劑(A)相比f2計算結(jié)果(n=4)

3.2.2不同測定條件下同批樣品溶出行為的差異 以方法1中的溶出曲線為參比，每批樣品在其他條件下的溶出曲線分別與其相比，計算f2值(表5)。結(jié)果表明，A、B、C三制劑溶出曲線間f2值均大于等于42，說明三家產(chǎn)品受溶出介質(zhì)酸堿性、轉(zhuǎn)速快慢等影響不大；而樣品D在不同測定條件下f2值間有顯著差異，說明其溶出行為受介質(zhì)酸堿性影響很大，見圖3。

表5 與方法1溶出曲線相比f2計算結(jié)果(n=4)

圖3 4批樣品在6種測定條件下的溶出曲線

4 討論

4.1相似因子f2的計算過程中注意到比較時間點的選擇，由于選取的點數(shù)過多或不合適都有可能導致差異較大的溶出曲線得出“相似”的錯誤結(jié)論，故每批樣品選擇重要、關鍵的溶出點位(n=4)進行比較，其中溶出量為85%以上的時間點最多選擇一點。

4.2由于溶出度試驗中所采用的溶出介質(zhì)(主要是pH值不同的各種溶液)是模擬患者消化道的各種生理環(huán)境，轉(zhuǎn)籃和槳板以及轉(zhuǎn)速是模擬胃部和小腸的蠕動，因而，對于一個理想的藥物來說，是應該在上述各種測定條件下都能具有穩(wěn)定一致的溶出曲線，才有可能在任何年齡、任何體質(zhì)患者中具有相似的溶出行為，進而產(chǎn)生同樣的療效。但從試驗結(jié)果來看，國產(chǎn)制劑D在酸性介質(zhì)中的溶出行為明顯不同于其他pH介質(zhì)，那么該藥對體內(nèi)胃酸水平不同的患者來說，極有可能產(chǎn)生不同的療效，這在臨床應用中具有指導意義，應該引起重視。

4.3從溶出曲線的測定結(jié)果不難看出，進口制劑具有令人滿意的溶出曲線形狀，且在各種試驗條件下的溶出曲線幾乎一致，顯示了相當穩(wěn)定的質(zhì)量水平。國產(chǎn)B制劑溶出曲線與其相比較為相似，C、D制劑與其差異較大，說明國產(chǎn)制劑質(zhì)量參差不齊，生產(chǎn)工藝、處方等尚需做深入探討。另外，多家制劑體外溶出行為的這種差異是否與藥物體內(nèi)吸收切實相關，還需做進一步的體內(nèi)試驗研究。

1 中國藥典.2005.二部.2005:253

2 中國藥典.2010.二部.2010:345

3 謝沐風.簡介日本“藥品品質(zhì)再評價”工程(溶出度研究系列一).中國藥品標準，2005，6(6)：42