胃癌組織中微管聚合蛋白的表達(dá)及意義

潘理會(huì)，李春輝，張德力

(1承德醫(yī)學(xué)院，河北承德067000;2承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院)

微管是細(xì)胞有絲分裂期紡錘體的主要成分，可使細(xì)胞分裂順利進(jìn)行，為癌細(xì)胞無(wú)限增殖提供條件，微管相關(guān)蛋白(MAP)是結(jié)合于微管上的非微管結(jié)構(gòu)蛋白，參與微管的組裝，維持微管的穩(wěn)定和微管與其它骨架纖維間的連接;Tau蛋白即微管聚合蛋白，與微管結(jié)合能誘導(dǎo)微管成束，增強(qiáng)微管的穩(wěn)定性，可能會(huì)加速惡性腫瘤的進(jìn)展。2008年12月～2010年3月，我們檢測(cè)了60例胃癌患者胃癌組織中Tau蛋白的表達(dá)，探討其在胃癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用。

1 資料與方法

1.1 材料 手術(shù)切除經(jīng)病理證實(shí)的胃癌組織標(biāo)本60份(觀察組)，患者男49例，女11例;年齡43～77(58.3±10.0)歲;高中分化 28 例，低分化 32 例;無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例。另取10份正常胃組織標(biāo)本(距腫瘤10cm以上)作為對(duì)照組。AMV第一鏈cDNA合成試劑盒購(gòu)自上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司(SK2030);引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成;50 bp DNA Ladder購(gòu)自北京天根生化有限公司(MD108);Trizol購(gòu)自Invitrogen公司;溴化乙錠購(gòu)自美國(guó)Promega公司;氯仿、異丙醇、無(wú)水乙醇、EDTA、Tris-乙酸、Tris-硼酸、NaOH、DEPC、瓊脂糖等常規(guī)試劑購(gòu)自北京化學(xué)試劑公司。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 Tau mRNA檢測(cè) 采用RT-PCR法。取組織標(biāo)本50～100 mg加入1 ml Trizol提取液，室溫下充分勻漿，離心，取上清提取RNA樣本按試劑盒說(shuō)明合成cDNA。取PCR產(chǎn)物10 μl用1.5%瓊脂糖凝膠電泳，經(jīng)EB染色后，在紫外熒光數(shù)字成像儀下照像并進(jìn)行光密度定量分析。以每例Tau蛋白與其相應(yīng)β-actin擴(kuò)增產(chǎn)物條帶累積光密度(IOD)的比值作為Tau mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.2 Tau蛋白檢測(cè) 采用免疫組織化學(xué)方法。將組織標(biāo)本用福而馬林固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，微波修復(fù)抗原，進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。Tau蛋白陽(yáng)性信號(hào)表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)。在染色均勻的區(qū)域，選取5個(gè)高倍鏡視野(×400)進(jìn)行觀察。按陽(yáng)性細(xì)胞百分率(A值)評(píng)分:＜25%為1分，25% ～50%為2分，＞50%為3分;按染色強(qiáng)度(B值)評(píng)分:不著色為0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。A值與B值相加判斷結(jié)果，＞2分為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料用±s表示，采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用兩獨(dú)立樣本秩和檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組及對(duì)照組Tau mRNA相對(duì)含量分別為0.78 ±0.08、0.53 ±0.01(P ＜0.05);Tau 蛋白陽(yáng)性率分別為 83.3%、70.0%(P ＜0.05)。Tau 表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1。

3 討論

Tau蛋白是一種磷酸蛋白，其分子質(zhì)量較小，多見于神經(jīng)軸、樹突中，其磷酸化水平的調(diào)節(jié)隨發(fā)育而不同，在成熟人腦中可找到6種異構(gòu)體，共含有352～441個(gè)氨基酸殘基，由于存在或缺乏三個(gè)插入片段而彼此不同，每種Tau蛋白分子的羧基端一側(cè)都存在3～4個(gè)由31～32個(gè)氨基酸殘基組成的重復(fù)序列，這些重復(fù)序列在正常生理?xiàng)l件下是微管的結(jié)合部位;同時(shí)部分Tau蛋白異構(gòu)體在氨基端附近包含由29或58個(gè)氨基酸殘基組成的插入片段，Tau蛋白與微管結(jié)合可降低它們的動(dòng)力學(xué)不穩(wěn)定性，提高微管生長(zhǎng)端微管蛋白分子連結(jié)的速率，降低微管蛋白分子分離的速率，抑制它們向縮短結(jié)局相轉(zhuǎn)變。Tau蛋白在體內(nèi)也有相似的功能，已有數(shù)個(gè)實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)染Tau基因進(jìn)入正常并不表達(dá)Tau蛋白的細(xì)胞。在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中，Tau蛋白與微管結(jié)合，增強(qiáng)微管的穩(wěn)定性，有時(shí)誘導(dǎo)微管成束，成束可能是受Tau蛋白影響使微管穩(wěn)定［1］。

表1 Tau表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

關(guān)于Tau蛋白的研究以往多傾向于神經(jīng)系統(tǒng)［2，3］，胃癌中涉及較少。本研究結(jié)果表明 Tau 蛋白在正常胃組織中的表達(dá)低于胃癌組織，Tau表達(dá)與胃癌的分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，證實(shí)Tau蛋白參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展，其機(jī)制可能為:①對(duì)微管組裝具有調(diào)節(jié)控制作用。一方面，MAP以其肽鏈中微管結(jié)合區(qū)與數(shù)個(gè)微管蛋白同時(shí)結(jié)合的機(jī)制，促成微管蛋白聚合核心的形成，加速微管蛋白的聚合，使微管得以生長(zhǎng)延伸;另一方面，MAP又能通過(guò)其外伸功能區(qū)域可被MAP激酶(MAPK)磷酸化的特性，解除對(duì)微管的結(jié)合活性，阻滯微管蛋白的聚合，延緩微管的組裝，促進(jìn)微管的解離。②對(duì)細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的建立、穩(wěn)定和增強(qiáng)作用。③參與胞內(nèi)物質(zhì)的軌道定向轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程。④參與和介導(dǎo)細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)［4］。

綜上所述，Tau蛋白可促進(jìn)胃癌的發(fā)生發(fā)展;同時(shí)Tau蛋白可作為胃癌靶向治療的靶點(diǎn)。

［1］Michel Goedert.Tau protein and the neurofibrillary pathology of Alzheimer＇s disease［J］.TINS，1993，16(11):460.

［2］Liu F，Shi J，Tanimukai H，et al.Reduced O-GlcNAcylation links lower brain glucose metabolism and tau pathology in Alzheimer＇s disease［J］.Brain，2009，1329(7):1820-1832.

［3］Lace G，Savva GM，F(xiàn)orster G，et al.Hippocampaltau pathology is related to neuroanatomical connections:an ageing population-based study［J］.Brain，2009，132(5):1324-1334.

［4］楊撫華.醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)［M］.5版.北京:科學(xué)出版社，2007:211.