氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定肉及肉制品中的2,4-D-丁酯

李曉玉，王 梅，隋 濤，李金強(qiáng)，于 杰

氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定肉及肉制品中的2,4-D-丁酯

李曉玉1，王 梅2，隋 濤1，李金強(qiáng)1，于 杰1

(1.煙臺(tái)出入境檢驗(yàn)檢疫局，山東 煙臺(tái) 264000；2.中國(guó)科學(xué)院福建物質(zhì)結(jié)構(gòu)研究所，福建 福州 350002)

建立肉及肉制品中2,4-D-丁酯的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)方法。樣品采用乙腈提取，弗羅里硅土柱固相萃取柱凈化，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明：方法添加量為5～100μg/kg時(shí)，回收率均大于70%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.0%～3.6%，線性相關(guān)系數(shù)為0.99996，方法的檢出限為5μg/kg。本方法適用于肉及肉制品中2,4- D-丁酯的測(cè)定。

2,4-D-丁酯；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用；肉及肉制品

2,4-D-丁酯是一種苯氧羧酸類(lèi)除草劑[1]，純品為無(wú)色油狀液體，熔點(diǎn)169℃，密度1.2428g/cm3，大鼠急性經(jīng)口LD50值為500～1500mg/kg。口服中毒先為消化道癥狀，然后出現(xiàn)感覺(jué)異常、嗜睡、肌肉無(wú)力和肌纖維顫動(dòng)，嚴(yán)重者出現(xiàn)抽搐、昏迷、大小便失禁和呼吸衰竭。2,4-D-丁酯由于具有選擇性強(qiáng)、殺草譜廣、用量少、成本低等特點(diǎn)[2]，在我國(guó)生產(chǎn)量、使用量和出口量非常大。給人類(lèi)健康構(gòu)成極大的安全隱患，因而得到了國(guó)際社會(huì)的廣泛關(guān)注[3]。

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，2,4-D-丁酯的檢測(cè)以氣相色譜方法居多，且多數(shù)為檢測(cè)蔬菜、糧谷、水果中2,4-D-丁酯的殘留量[4-8]，毒理學(xué)方面的研究報(bào)告也較多[9-10]，而以氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)法測(cè)定肉及肉制品中2,4-D-丁酯殘留量的文獻(xiàn)未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以乙腈處理樣品，經(jīng)多種凈化方法的篩選，建立肉及肉制品2,4-D-丁酯的GCMS檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

2,4-D-丁酯標(biāo)準(zhǔn)品(96.5%) 美國(guó)Dr. Ehrenstorser GmbH公司；乙腈、正己烷、丙酮均為色譜純；弗羅里硅土(60～80目)，650℃烘烤2h，放置備用。

1.2 儀器與設(shè)備

6890N-5973氣相色譜型質(zhì)譜聯(lián)用儀 美國(guó)安捷倫公司；高速組織搗碎機(jī)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；低速離心機(jī)(5000r/min)。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件

氣相色譜：DB-35MS彈性石英鍵合毛細(xì)管柱(30m× 0.25mm，0.25μm)，程序升溫：初始柱溫60℃，以20℃/min升至250℃，保持3min，再以30℃/min升至280℃，保持1min；進(jìn)樣口溫度250℃；高純氦氣(純度99.999%)為載氣，流速為1.5mL/min；不分流進(jìn)樣1μL。

1.3.2 質(zhì)譜條件

電子轟擊(EI)離子源；電子能量70eV；傳輸線溫度280℃；離子源溫度250℃；質(zhì)量掃描范圍m/z 50～500；2,4-D-丁酯m/z 185、162、276。

1.3.32 ,4-D-丁酯的提取

稱取約5g樣品于50mL離心管中，加入5g氯化鈉固體，20mL乙腈，均質(zhì)完全后，5000r/min離心5min，將上清液移入分液漏斗中，離心管中的殘?jiān)?0mL乙腈重復(fù)提取一次，合并提取液于分液漏斗中。

1.3.4 凈化

向分液漏斗中加入80mL乙腈飽和的正己烷，搖勻，靜置分層，將下層液通過(guò)無(wú)水硫酸鈉，濾入平底燒瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于39℃蒸至1～2mL。

用帶有砂芯墊的300mm×15mm(內(nèi)徑)的玻璃層析柱，依次裝入1cm無(wú)水硫酸鈉、5g弗羅里硅土，1cm無(wú)水硫酸鈉，先以50mL乙腈預(yù)洗層析柱，棄去預(yù)洗液，再將濃縮液轉(zhuǎn)移至層析柱上進(jìn)行凈化洗脫，用100mL乙腈淋洗柱子。將淋洗液全部接收至圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至1～2mL，氮?dú)獯蹈伞Ｓ帽?正己烷混合溶液(1:1，V/V)定容至2mL，供氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑的選擇

根據(jù)相似相溶原理，先后實(shí)驗(yàn)了乙醚、乙酸乙酯和乙腈作溶劑提取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)于去除基質(zhì)雜質(zhì)和分離度來(lái)說(shuō)，乙醚效果不佳，而乙酸乙酯和乙腈效果均不錯(cuò)，但是乙腈提取時(shí)2,4-D-丁酯的回收率略高于乙酸乙酯，因此最終選擇乙腈作為提取溶劑。

2.2 凈化方法的確定

由2,4-D-丁酯的結(jié)構(gòu)可以看出，其苯氧羧酸的鄰對(duì)位各含一個(gè)氯原子，極性較強(qiáng)，因此需選用順相柱進(jìn)行凈化，分別選擇弗羅里硅土柱、離子交換柱Carb柱與NH2柱的混合柱和SAX/PAX柱3種順相柱進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，同時(shí)過(guò)Carb與NH2兩種柱回收可以達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求但是靈敏度不及過(guò)弗羅里硅土柱效果好；過(guò)SAX/ PAX柱產(chǎn)生基質(zhì)干擾導(dǎo)致定量離子m/z 185的基線過(guò)高(圖1)。因此最終選擇弗羅里硅土柱對(duì)樣品進(jìn)行凈化。

2.3 方法回收率和精密度實(shí)驗(yàn)

在5g樣品中分別添加相當(dāng)于5、50、100μg/kg三個(gè)水平的2,4-D-丁酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)水平加標(biāo)5個(gè)樣品，測(cè)定5次，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4 檢出限

圖1 提取液過(guò)不同色譜柱的色譜圖Fig.1 Chromatographs of sample extract on different columns

表1 回收率及精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=5)Table 1 Results of recovery rate and precision experiments (n=5)

測(cè)定檢出限是采用添加法進(jìn)行實(shí)測(cè)的情況確定的。在陰性豬肉樣品中添加水平為5μg/kg時(shí)，本方法仍可定量檢出，信噪比≥10，其色譜圖見(jiàn)圖2。由此可以確定本方法2,4-D-丁酯的檢出限為5μg/kg。

圖2 陰性豬肉樣品中添加水平為5 μg/kg 2,4-D-丁酯色譜圖Fig.2 Gas chromatogram of negative pork sample spiked with 2,4-D butyl ester at 5 μg/kg

3 結(jié) 論

運(yùn)用GC-MS測(cè)定肉及肉制品中2,4-D-丁酯的殘留量。所建立的方法在5～100μg/kg添加水平下平均回收率為71.7%～101.2%。本方法的檢出限5μg/kg，低于國(guó)內(nèi)外制定的2,4-D-丁酯最大殘留限量。線性相關(guān)系數(shù)為0.99996，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于3.6%。由此可見(jiàn)，本方法具有回收率穩(wěn)定、靈敏度高、準(zhǔn)確度好和簡(jiǎn)便快速等特點(diǎn)，適合肉及肉制品中2,4-D-丁酯的測(cè)定。

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Determination of 2, 4-D Butyl Ester in Meat and Meat Products by Gas Chromatography-Mass Spectrometry

LI Xiao-yu1，WANG Mei2，SUI Tao1，LI Jin-qiang1，YU Jie1
(1. Yantai Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Yantai 264000, China；2. Fujian Institute of Research on Structure of Matter, Chinese Academy of Sciences, Fuzhou 350002, China)

A gas chromatography-mass spectrometry method was established to determine 2,4-D butyl ester in meat and meat products. Samples were extracted using acetonitrile and purified on florisil solid-phase extraction cartridge, quantified by external standard method. This reliable and stable method exhibited recovery rates of more than 70% at spike levels ranging from 5 to 100μg/kg, relative standard deviations of 1.0%-3.6%, a linear regression coefficient of 0.99996 and a detection limit of 5μg/kg.

2,4-D butyl ester；gas chromatography-mass spectrometry；meat and meat products

O657.63

A

1002-6630(2011)04-0193-03

2010-03-09

李曉玉(1980—)，女，工程師，碩士，研究方向?yàn)槭称返霓r(nóng)藥殘留檢測(cè)。E-mail：lixiaoyu19802004@163.com