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    雞新城疫活疫苗種毒HB1株和F株保存期試驗(yàn)

    2011-05-29 10:16:12毛婭卿蔣桃珍
    中國獸藥雜志 2011年6期
    關(guān)鍵詞:保存期免疫原性生物制品

    吳 濤,毛婭卿,王 嘉,王 哲,蔣桃珍

    (中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所,北京 100081)

    雞新城疫(ND)是一種具有高度傳染性的病毒性疾病,世界各地養(yǎng)禽業(yè)均采用疫苗進(jìn)行免疫接種來控制雞新城疫的發(fā)生[1]。雞新城疫病毒HB1株(Ⅱ系)和F株(Ⅲ系)是制備雞新城疫低毒力活疫苗的生產(chǎn)用毒種,《中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程》[2](二〇〇〇年版)中規(guī)定,雞新城疫病毒HB1株和F株,在-15℃以下,保存期為6年。對(duì)疫苗生產(chǎn)用毒種的繁殖凍干與檢定,不僅需要較長的時(shí)間,還消耗一定的人力、物力和財(cái)力,增加污染外源病毒的機(jī)會(huì),因此需要對(duì)毒種制定更加合理的保存期。

    1 材料和方法

    1.1 材料 雞新城疫病毒HB1株(Ⅱ系),本實(shí)驗(yàn)室分別在1993年6月、1997年3月、2003年2月繁殖凍干,檢定合格后交菌種保藏室-70℃保存。雞新城疫病毒F株(Ⅲ系),本實(shí)驗(yàn)室分別在1989年12月、1995年4月、2001年3月繁殖凍干,-70℃保存。雞新城疫強(qiáng)毒(北京株),中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所2006年6月凍干、檢定,-70℃保存。

    SPF雞:1月齡,SPF雞胚:10日齡,均購自北京梅里亞維通實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 毒種病毒含量測定 每批凍干的毒種在試驗(yàn)時(shí)從-70℃冰柜中任取3支,按照《中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程》(二〇〇〇年版)中病毒含量測定方法,分別按瓶簽注明的裝量加滅菌生理鹽水恢復(fù)后,繼續(xù)做10倍系列稀釋至 10-9,取10-7、10-8、10-9三個(gè)滴度,各經(jīng)尿囊腔途徑接種 10日齡SPF雞胚5枚,每胚接種0.1 mL,至37℃條件孵育,每日照蛋。孵育120 h后,取出所有活胚,逐個(gè)收獲胚液,分別測定血凝價(jià);48~120 h死胚(48 h以前死胚,棄去不計(jì))同一稀釋度等量混合,分別測定血凝價(jià),計(jì)算EID50。

    1.2.2 毒種的免疫原性鑒定

    1.2.2.1 接種 每批種毒任取1支,用滅菌生理鹽水分別進(jìn)行稀釋,使其含毒量分別為2500 EID50/0.1 mL、5000 EID50/0.1 mL 和 10000 EID50/0.1 mL,每個(gè)滴度滴鼻接種1月齡SPF雞10只,每只滴鼻0.1 mL;同時(shí)設(shè)空白對(duì)照5只,隔離飼養(yǎng)觀察14 d。

    1.2.2.2 攻毒 取ND強(qiáng)毒(北京株)1支,用滅菌生理鹽水進(jìn)行105倍稀釋后,對(duì)所有雞進(jìn)行攻毒,每只雞肌肉注射1 mL(含毒104ELD50/mL),隔離飼養(yǎng)觀察14 d。

    2 結(jié)果

    2.1 毒種的病毒含量測定 結(jié)果如表1、表2所示。

    表1 不同保存年代的新城疫病毒HB1株病毒含量測定結(jié)果

    表2 不同保存年代的新城疫病毒F株病毒含量測定結(jié)果

    由表1和表2可以看出,雞新城疫病毒HB1株和F株毒種在-70℃分別保存16年和19年,病毒含量仍符合《中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程》(二〇〇 〇 年 版)[2]規(guī) 定 (病 毒 含 量應(yīng) ≥108.0EID50/0.1 mL)。

    2.2 毒種的免疫原性鑒定 結(jié)果如表3、表4所示。

    表3 不同保存年代的新城疫病毒HB1株免疫原性試驗(yàn)結(jié)果

    表4 不同保存年代的新城疫病毒F株免疫原性試驗(yàn)結(jié)果

    由表3和表4可以看出,雞新城疫病毒HB1株和F株毒種在-70℃分別保存16年和19年,免疫原性仍符合《中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程》(二〇〇〇年版)中最小免疫量應(yīng)≤5000 EID50的規(guī)定。

    3 討論

    3.1 對(duì)疫苗生產(chǎn)用毒種的繁殖凍干與檢定,不僅需要較長的時(shí)間,消耗一定的人力、物力和財(cái)力,而且還會(huì)增加污染外源病毒的機(jī)會(huì),因此需要對(duì)毒種的保存制定更加合理的保存期。按照《中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程》(二〇〇〇年版)的規(guī)定,雞新城疫病毒HB1株和F株毒種在-15℃的保存期為6年。從本試驗(yàn)的結(jié)果看,新城疫病毒HB1株毒種在-70℃條件下保存6年、12年、16年;新城疫病毒F株毒種在-70℃條件下保存8年、14年、19年,病毒含量、免疫原性均無明顯變化,均符合《中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程》(二〇〇〇年版)規(guī)定。本試驗(yàn)結(jié)果表明,可延長新城疫病毒HB1株和F株毒種的保存期。

    3.2 雞新城疫病毒HB1株和F株毒種在繁殖凍干時(shí)已按《中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程》(二〇〇〇年版)進(jìn)行了相應(yīng)的鑒定工作,此次保存期試驗(yàn)對(duì)不同保存年代毒株的病毒含量和免疫原性進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果均符合規(guī)定,表明該毒株在-70℃保存15年以上仍可作為制備雞新城疫低毒力活疫苗毒種使用。

    [1]殷 震,劉景華.動(dòng)物病毒學(xué)[M].第2版.北京:科學(xué)出版社,1997:748-749.

    [2]農(nóng)業(yè)部獸用生物制品規(guī)程委員會(huì).中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程(二〇〇〇年版)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2000:220-221.

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