胃癌組織中抑癌及相關(guān)基因的表達及其臨床意義

馬 駿 聶勝男 張建波 孟 凱 王明玉

腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移是1個復(fù)雜的過程，其中涉及到多種癌基因的激活和抑癌基因的失活［1］。nm23作為抑癌基因，通過影響微管聚合狀態(tài)及G蛋白介導(dǎo)的信號通路而調(diào)節(jié)細胞代謝，在腫瘤細胞的增殖、分化和侵襲轉(zhuǎn)移中起重要作用［2］。E-cadherin作為另1種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，與nm23能夠協(xié)同抑制胃癌的轉(zhuǎn)移［3］。CD44是1種細胞表面黏附分子，標(biāo)準(zhǔn)型CD44(CD44s)主要在間質(zhì)和造血細胞中表達，為透明質(zhì)酸鹽的主要受體，CD44s及其變異體可在多種腫瘤中表達［4］。本研究應(yīng)用免疫組化技術(shù)，檢測 nm23和 E-cadherin及CD44s基因在胃癌組織中的表達，分析其與胃癌臨床病理因素的關(guān)系，旨在探討nm23和E-cadherin及CD44s基因在胃癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移等過程中的作用。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

選取泰安市中心醫(yī)院2006年07月～2010年07月手術(shù)切除、并經(jīng)病理檢查確診的50例胃癌標(biāo)本。所有患者術(shù)前均未行化療或放療，并有完整的臨床病理資料。男性32例，女性18例。年齡25～72歲，平均年齡59.1歲，中位年齡61歲。根據(jù)UICC(1997年)第5版胃癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn):Ⅰ期10例，Ⅱ期20例，Ⅲ期12例，Ⅳ期8例。腫瘤細胞組織學(xué)分化:高分化癌22例，中分化癌15例，低分化癌13例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例。選取30例胃癌組織標(biāo)本的相應(yīng)癌旁組織(距離癌灶≥2 cm)作為對照組，所有癌旁組織標(biāo)本均經(jīng)病理檢查證實為癌旁正常組織。

1.2 主要試劑

鼠抗人nm23和CD44s單克隆抗體購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司，鼠抗人E-cadherin(MAB-4A2)為丹麥DAKO公司產(chǎn)品(1∶80稀釋);SP試劑盒、DAB顯色劑均為SantaCruz公司產(chǎn)品。免疫組化染色程序按試劑盒說明書進行操作。

1.3 實驗方法

4%甲醛固定標(biāo)本，石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片。免疫組化SP法檢測步驟:3%H2O2作用20 min，消除內(nèi)源性過氧化酶活性;0.01 mol/L PBS(pH=7.4)漂洗2 min×3次;10%正常羊血清37℃孵育2 h;PBS液沖洗5 min;Envision混合液室溫孵育2 h;DAB顯色。PBS代替一抗作為陰性對照，用已知nm23和E-cadherin及CD44s陽性表達的胃癌組織切片作為陽性對照。

1.4 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

nm23陽性表達信號為棕黃色或深棕色，陽性產(chǎn)物定位于細胞質(zhì)和細胞膜，呈彌散性分布;E-cadherin和CD44s陽性染色定位于細胞膜，陽性信號為棕黃色顆粒狀。所有切片均采用雙盲觀察，陽性細胞數(shù)＜5%，無染色或染色較弱，為陰性(－);陽性細胞數(shù)≥5%，染色較強，則為陽性(+)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

對實驗數(shù)據(jù)采用χ2檢驗和Spearman相關(guān)分析，數(shù)據(jù)計算應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計學(xué)軟件。檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織中各基因的表達情況

胃癌組織中 CD44s陽性表達率為44.5%(22/50)，癌旁組織中其陽性表達率為13.3%(4/30)，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，χ2=4.23，P ＜0.05。胃癌組織中nm23基因陽性細胞染色為黃色，定位于細胞質(zhì)和胞膜。胃癌組織中其陽性表達率為48.0%(24/50)，癌旁組織中其陽性表達率為63.3%(19/30)，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，χ2=5.89，P ＜0.05。胃癌組織E-cadherin陽性染色定位于細胞膜，為棕黃色顆粒狀。胃癌組織中E-cadherin陽性表達率為52.0%(26/50)，癌旁組織為70.0%(21/30)，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，χ2=9.45，P ＜0.05。

2.2 CD44s、E-cadherin及nm23基因陽性表達與胃癌組織臨床病理特征的關(guān)系

nm23基因表達與腫瘤組織分化程度相關(guān)，隨著腫瘤組織分化程度的增加而增強，P＜0.001;Ⅰ+Ⅱ期胃癌組織中nm23陽性表達率要高于Ⅲ+Ⅳ期組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P=0.02;無漿膜浸潤胃癌組織中其表達率要高于有漿膜浸潤者，P=0.012;無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者其表達率高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，P=0.001。CD44s陽性表達與腫瘤有無漿膜浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM 分期相關(guān)，χ2值分別為 11.62、12.58 和 9.78，P均＜0.05;CD44s陽性表達與胃癌組織分化程度無關(guān)，P＞0.05;E-cadherin陽性表達與胃癌組織分化程度、有無漿膜浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期相關(guān)，P均＜0.05(表 1)。

表1 抑癌及相關(guān)基因陽性表達與胃癌組織臨床病理特征的相關(guān)性(例，%)

2.3 CD44s與nm23表達的相關(guān)性

Spearman相關(guān)分析顯示，胃癌組織CD44s表達與nm23表達呈一定程度的負(fù)相關(guān)性(γ=－0.287，P＜0.05)，nm23表達與E-cadherin表達呈正相關(guān)性(γ=0.928，P=0.000)。

3 討論

腫瘤的轉(zhuǎn)移是1個非常復(fù)雜的過程，涉及一系列基因，包括轉(zhuǎn)移抑制基因和轉(zhuǎn)移促進基因。其中，nm23 和 E-cadherin 是較為明確的轉(zhuǎn)移抑制基因［4，5］。nm23基因的缺失和突變與胃癌腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移有關(guān)，并與短的生存期相關(guān)［6］。nm23的編碼產(chǎn)物為二磷酸核苷激酶(NDPK)，nm23/NDPK可介導(dǎo)GDP向GTP的轉(zhuǎn)化，而這一過程與G蛋白的活性有關(guān)。Ayabe等［7］研究發(fā)現(xiàn)，nm23-H1基因?qū)Ψ伟┝馨徒Y(jié)微轉(zhuǎn)移可能具有抑制作用。E-cadherin與nm23有協(xié)同作用。本研究中，nm23和E-cadherin在胃癌組織中的陽性表達率均低于癌旁組織中的陽性表達率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。nm23和E-cadherin基因的陽性表達率與胃癌組織學(xué)分級、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期等密切相關(guān)，提示其在胃癌的轉(zhuǎn)移瘤形成階段具有抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。

CD44基因位于染色體11號短臂上(11P)，共有20個外顯子構(gòu)成。有關(guān)研究表明多種腫瘤的轉(zhuǎn)移行為均與CD44基因的異常轉(zhuǎn)錄有關(guān)，CD44v6是CD44蛋白變異體，它是分布極為廣泛的細胞表面跨膜糖蛋白分子主要參與細胞與細胞、細胞與基質(zhì)間的特異性黏附過程［2］。有文獻報道，胃癌組織中CD44s表達率為64% ～77%，而且與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［3，4］。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織 CD44s陽性表達率為44.5%，在有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中的陽性率分別為56.0%和32.0%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，提示胃癌伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者CD44s表達較高。而在有、無漿膜浸潤組織中表達率分別為51.7%和33.3%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，說明CD44s與胃癌組織的浸潤程度有相關(guān)性。

CD44s和nm23屬于黏附分子范疇，CD44s在腫瘤組織生物學(xué)行為上的作用，與黏附因子之一整合素的作用呈協(xié)同作用［8］。整合素是1種膜鑲嵌糖蛋白，由α和β兩個亞單位非共價形成異二聚體復(fù)合物。由于亞單位的變異使整合素形成1個龐大的家族。有的參與不同細胞之間的黏附連接(異源細胞間黏附)，有的則協(xié)助細胞與細胞外基質(zhì)的結(jié)合，其中24β1和Mac 1同時具備上述2種功能。細胞表面的整合素可處于不活化狀態(tài)，有一些活化因子可增強整合素與相應(yīng)配體的親和力，CD44s則屬于這種強化因素之一，因而，在一定程度上影響腫瘤細胞轉(zhuǎn)移潛能的高低。nm23與上皮黏連素和金屬蛋白酶組織抑制物的基因被視為腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因［9，10］。上皮黏連素抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的作用主要是使腫瘤細胞彼此膠著在一起，使細胞之間黏附增加，瘤細胞不易脫落而發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。有關(guān)nm23抗腫瘤轉(zhuǎn)移的機制以及CD44s和nm23在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中存在怎樣的協(xié)同或拮抗作用，有待于進一步研究。本研究顯示，胃癌組織CD44s與nm23基因的表達呈一定程度的負(fù)相關(guān)性，nm23與E-cadherin基因表達呈正相關(guān)性。

本研究通過檢測胃癌組織CD44s和E-cadherin及nm23基因的表達，發(fā)現(xiàn)CD44s和E-cadherin及nm23表達與胃癌腫瘤組織分期、浸潤程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等相關(guān)，檢測其表達有助于臨床預(yù)測胃癌的轉(zhuǎn)移和侵襲程度。

［1］ 于觀貞，王杰軍，陳 穎，等.轉(zhuǎn)移相關(guān)基因nm23和 p53及S100A4在晚期胃癌中的表達及與侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究〔J〕.中華胃腸外科雜志，2006，9(2):165.

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