B細胞非霍奇金淋巴瘤患者FHIT與Bcl-2關(guān)系的初步探討

楊 敏，陳 琦

(遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院，貴州遵義563003)

脆性組氨酸三聯(lián)體(FHIT)是一種抑癌基因，主要參與細胞生長與生長抑制信號的調(diào)控，在體內(nèi)可誘導細胞凋亡和抑制腫瘤細胞的增殖。Bcl-2基因在淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用［1］。本研究采用免疫組化EnVision法對B細胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)組織中FHIT、Bcl-2蛋白進行檢測，以探討二者異常與B細胞NHL發(fā)病的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 NHL組為52例淋巴瘤標本，來自遵義醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院病理科2003～2008年病理存檔石蠟包埋標本，其中男32例、女20例，年齡8～76歲、平均40歲。標本經(jīng)甲醛液固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm切片，并以HE染色、免疫組化確定診斷。淋巴結(jié)內(nèi)病變34例，淋巴結(jié)外病變18例。經(jīng)形態(tài)及免疫組化證實為B細胞型NHL，病理分類和惡性度分級參照WHO(2001年)標準，其中低度惡性組12例為惰性淋巴瘤，中—高度惡性組40例為侵襲性淋巴瘤。另取10例組織細胞性壞死性淋巴結(jié)炎標本作對照。兩組在年齡、性別上差異無統(tǒng)計學意義。

1.2 檢測方法 試劑盒均購自Gene Tech(上海)有限公司，操作按說明書進行。以PBS代替一抗作陰性對照，試劑盒中已知陽性片作為陽性對照。主要步驟包括:制備的切片常規(guī)脫蠟水化;置0.3%過氧化氫中，PBS洗3次×5min;將切片浸泡于抗原修復液(FHIT蛋白用Tris-EDTA緩沖液pH 9.0微波煮沸10min后PBS洗3次×5min，Bcl-2用枸櫞酸鹽緩沖液pH 6.0高壓煮沸2min)抗原修復;加一抗(即用型)鼠抗人抗體，4℃孵育24 h，PBS洗3次×5min;加二抗(EnVision復合物)，37℃孵育20min，PBS洗3次×5min;經(jīng)DAB染色后，以蘇木素復染細胞核，常規(guī)脫水、透明、封片。

1.3 結(jié)果判定 陽性信號呈棕黃色顆粒，陽性判定分別由兩位病理醫(yī)師在不了解臨床情況下記數(shù)500個細胞，結(jié)果用半定量記分方法［2］。①按陽性細胞占細胞總數(shù)的多少分為:≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。②按細胞著色強弱分為:無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。然后以兩項記分之和判斷陽性程度:0～1分為(-)，2～3分為(+)，4～5分為(++)，6～7分為(+++)。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0軟件進行秩和檢驗、秩相關(guān)分析，以P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 FHIT蛋白缺失結(jié)果 NHL組(-)38例、(+)4例、(++)5例、(+++)5例，缺失率為67.3%;對照組分別為 1、1、12、7 例，缺失率為73.1%。FHIT蛋白在NHL組中表達低于對照組(P＜0.01)。

2.2 Bcl-2蛋白表達結(jié)果 NHL組(-)8例、(+)3例、(++)16例、(+++)25例，陽性率為84.6%;對照組分別為6、1、2、1例，陽性率為40%。Bcl-2蛋白在NHL組中表達高于對照組(P＜0.05)。

2.3 相關(guān)性結(jié)果 NHL組中FHIT蛋白、Bcl-2蛋白表達呈負相關(guān)關(guān)系(秩相關(guān) rs=-0.593、P＜0.01)。

3 討論

很多研究證實人類多種腫瘤存在FHIT結(jié)構(gòu)的異常，其中以外顯子的異常最為常見［3］，主要是缺失外顯子5和8，其他異常較少見。FHIT蛋白通過調(diào)控細胞周期和誘導細胞凋亡來抑制腫瘤發(fā)生。研究表明，在肺、食管、胃、腎、子宮頸、胰腺、乳腺等腫瘤組織中存在FHIT蛋白表達下降或缺失［4］。

Bcl-2是一種原癌基因，通過阻斷細胞凋亡來影響細胞生存［5］。Bcl-2基因過度表達可引起腫瘤細胞對凋亡的抵抗。Bcl-2基因在淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。研究報道約15%的彌漫大B細胞淋巴瘤患者有染色體t(14∶18)易位，然而有40%～60%的彌漫大B細胞淋巴瘤患者表達Bcl-2蛋白，且與預后不良相關(guān)［6］。

B細胞NHL患者FHIT蛋白的研究國內(nèi)尚未見報道。本研究結(jié)果顯示，53例B細胞NHL病理切片中35例(73.1%)存在FHIT蛋白表達缺失，而Bcl-2蛋白陽性表達率為84.6%，二者呈負相關(guān)。提示FHIT蛋白的缺失在B細胞NHL的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，在FHIT蛋白缺失的病理切片中存在Bcl-2蛋白的高表達，支持FHIT蛋白可誘導細胞凋亡的發(fā)生，而Bcl-2蛋白過度表達可引起腫瘤細胞對凋亡的抵抗，F(xiàn)HIT蛋白的缺失可能與線粒體的內(nèi)部通道細胞凋亡受阻有關(guān)，但該過程如何介導細胞凋亡有待進一步研究。

［1］Miyashita T，Reed JC.Bcl-2 oncoprotein blocks chemotherapy-induced apoptosis in a human leukemia cell line［J］.Blood，1993，81(1):151-157.

［2］馬大烈，白辰光.免疫組織化學陽性標記結(jié)果的觀察和判斷［J］.臨床與實驗病理學雜志，2003，19(5):557-560.

［3］Tai SK，Lee JI，Ang KK，et al.Loss of Fhit expression in head and neck squamous cell carcinoma and its potential clinical implication［J］.Clin Cancer Res，2004，10(16):5554-5557.

［4］An HJ，Kim KR，Kim IS，et al.Prevalence of human papillomavirus DNA in various histological subtypes of cervical adenocarcinoma:a population-based study［J］.Mod Pathol，2005，18(4):528-534.

［5］Hermine O，Haioun C，Lepage E，et al.Prognostic significance of bcl-2 protein in expression in aggressive non-Hodgkin's lymphoma:Groupe d'Etude des Lymphomas de I'Adulte(GELA)［J］.Blood，1996，87(1):265-272.

［6］Gascoyne RD，Adomat SA，Krajewski S，et al.Prognostic significance of Bcl-2 protein expression and Bcl-2 gene rearrangement in diffuse aggressive non-Hodgkin's lymphoma［J］.Blood，1997，90(1):244-251.