多靶位FISH技術(shù)在膀胱癌診治中的應(yīng)用進展

余 義，黃紅衛(wèi)

(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院，南昌330006)

膀胱癌是泌尿系最常見的惡性腫瘤，由于膀胱癌發(fā)病率高以及需要對腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的監(jiān)測，它已經(jīng)成為治療花費最高的腫瘤之一［1］。尿細(xì)胞學(xué)分析為診斷膀胱癌的主要實驗室檢查，其特異性強，但敏感性較低。最近研究表明尿細(xì)胞學(xué)檢查實際上只發(fā)現(xiàn)了71%的G3級腫瘤，診斷低級別腫瘤的敏感性則很更低［2］。此外，膀胱腫瘤抗原、核基質(zhì)蛋白-22等標(biāo)記物檢查也可用于膀胱癌的診斷，但其敏感性和特異性均不很理想。研究表明［3］多靶位熒光原位雜交(FISH)技術(shù)對于膀胱癌具有高度的敏感性和特異性，可以用于早期診斷膀胱腫瘤及其預(yù)后評估?，F(xiàn)將多靶位FISH在膀胱癌診治中的應(yīng)用綜述如下。

1 FISH技術(shù)的原理及特點

FISH是一種非放射性分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，其基本原理是通過標(biāo)記的DNA探針與細(xì)胞核內(nèi)的DNA靶序列雜交，獲得細(xì)胞內(nèi)多條染色體(或染色體片段)或多種基因狀態(tài)的信息，用已知的熒光素標(biāo)記單鏈核酸為探針，按照堿基互補的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行特異性結(jié)合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱軸呈線性排列，因此探針可以直接與染色體進行雜交，從而將特定的基因在染色體上定位。多靶位FISH即利用FISH技術(shù)，通過多種熒光標(biāo)記的DNA探針，以及定位p16抑癌基因的9p21位點特異探針對膀胱癌相關(guān)遺傳學(xué)改變進行檢測。與傳統(tǒng)的放射性標(biāo)記原位雜交相比，多靶位FISH具有安全、快速、靈敏度高、檢測信號強、雜交特異性高、能同時顯示多種顏色等優(yōu)點，不但能顯示細(xì)胞中期分裂相，還能顯示間期核［4］。

2 多靶位FISH的應(yīng)用

隨著人們對疾病與染色體基因改變之間的研究不斷深入，檢測與疾病發(fā)生和進展相關(guān)的染色體及基因改變成為某些疾病早期診斷、風(fēng)險評估、療效監(jiān)測過程中重要的分子水平檢測方法。多靶位FISH技術(shù)是基因檢測，與形態(tài)學(xué)檢測相比，可以更早的發(fā)現(xiàn)細(xì)胞異常，降低漏診率，且該技術(shù)為快速無創(chuàng)的檢測技術(shù)，僅用患者的尿液或膀胱沖洗液檢測腫瘤脫落細(xì)胞，24 h內(nèi)即可獲得檢測結(jié)果。

2．1 多靶位FISH在血尿檢查中的應(yīng)用 血尿是大部分膀胱癌患者的最初臨床表現(xiàn) ，但卻不是膀胱癌的特異性表現(xiàn)［5，6］。Sarosdy 等［3］發(fā)現(xiàn)，對血尿患者行 FISH 和尿細(xì)胞學(xué)檢查，其膀胱癌的診斷率分別為69%和38%，除外TaG1膀胱癌，其診斷率分別升高至83%和50%，前者對膀胱癌檢出率明顯高于后者。如果對血尿患者直接進行膀胱鏡檢查，則會給患者帶來一些不必要的痛苦，并可能漏診一些微小或不典型病灶，導(dǎo)致早期診斷的延誤和最佳治療時機的錯失，這就極大地影響了患者的存活率［7］。因此，對血尿患者行膀胱鏡檢查前應(yīng)用多靶位FISH進行篩查。

2．2 多靶位FISH在尿細(xì)胞學(xué)檢查中的應(yīng)用 對于血尿患者尿細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果不明確在臨床很常見。有數(shù)據(jù)表明有＜50%尿細(xì)胞學(xué)檢查不明確者在隨訪過程中發(fā)現(xiàn)了腫瘤［8］。而有研究結(jié)果［9］表明，對尿細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果不明確者行多靶位FISH檢查，其陽性率為91%，這些患者在隨后的首次活檢中發(fā)現(xiàn)了腫瘤，F(xiàn)ISH檢查陰性的患者中未發(fā)現(xiàn)腫瘤，這說明FISH是一種可以檢測細(xì)胞學(xué)不明確患者是否患有腫瘤的方法。尿細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果不明確，而FISH檢查漏診的腫瘤多為膀胱乳頭狀瘤，后者行膀胱鏡容易發(fā)現(xiàn)［9］，因此對尿細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果不明患者宜采用多靶位FISH技術(shù)與膀胱鏡聯(lián)合檢查，以提高其診斷率。最近，有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)FISH有助于判斷尿細(xì)胞學(xué)檢查及膀胱鏡檢查不明確或陰性的患者的情況［10］。

2．3 多靶位FISH在膀胱癌復(fù)發(fā)預(yù)測中的應(yīng)用 多靶位FISH檢查陽性但膀胱鏡或尿細(xì)胞學(xué)檢查陰性的膀胱癌(治療后)患者被稱作預(yù)測陽性患者［11］。臨床中常見如下情況:膀胱鏡診斷膀胱癌復(fù)發(fā)前，F(xiàn)ISH檢查即為陽性;約有27%尿細(xì)胞學(xué)檢查陰性或不典型，且膀胱鏡檢查陰性的治療后的膀胱癌患者FISH呈陽性，而這些患者在隨訪的29個月中有近65%的患者膀胱癌復(fù)發(fā)［12］。這進一步提示FISH檢查可以預(yù)測膀胱癌復(fù)發(fā)。

2．4 FISH在膀胱灌注治療中的應(yīng)用 早期、中分化的膀胱癌患者多采用卡介苗(BCG)膀胱灌注治療，而后者導(dǎo)致的膀胱黏膜嚴(yán)重炎性反應(yīng)紅斑，在膀胱鏡和尿細(xì)胞學(xué)檢查時，其與原位癌均不易鑒別。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)［13］膀胱灌注BCG治療不會影響FISH檢查結(jié)果，且發(fā)現(xiàn)FISH檢查陽性患者，其膀胱癌復(fù)發(fā)及進展為肌層浸潤的可能性分別是FISH檢查陰性患者的4．6倍和9．4倍。因此，對膀胱灌注BCG治療結(jié)束后的膀胱癌患者，進行FISH檢查可評估其治療效果，預(yù)測其復(fù)發(fā)性。

綜上所述，多靶位FISH在膀胱癌的診斷和治療中具有極其廣闊的應(yīng)用前景，但目前膀胱癌的FISH結(jié)果只停留在陽性與陰性的判斷上，對于FISH陽性細(xì)胞比率(定量)與膀胱癌診斷、治療及預(yù)后的關(guān)系有待于進一步研究。

［1］ Hong YM，Loughlin KR．Economic impact of tumor markers in bladder cancer surveillance［J］．Urology，2008，71(1):131-135．

［2］Jones JS．DNA-based molecular cytology for bladder cancer surveillance［J］．Urology，2006，67(Suppl 1):35-45．

［3］Sarosdy MF，Kahn PR，Ziffer MD，et al．Use of a multi-target fluorescence in situ hybridization assay to diagnose bladder cancer in patients with hematuria［J］．J Urol，2006，176(1):44-47．

［4］Stephens JL，Brown SE，Lapitan NL，et al．Physical mapping of bar1ey genes using an ultrasensitive fluorescence in situ hybridization technique［J］．Genome，2004，47(1):179-189．

［5］Tissot WD，Diokno AC，Peters KM．A referral center's experience with Transition cell carcinoma misdiagnosed as interstitial cystitis［J］．J Urol，2004，172(2):478-480．

［6］Madeb R，Messing EM．Long-term outcome of home dipstick testing for hematuria［J］．World J Urol，2008，26(1):19-24．

［7］Chang SS，Hassan JM，Cookson MS，et al．Delaying radical cystectomy for muscle invasive bladder cancer results in worse pathological stage［J］．J Urol，2003，170(4):1085-1087．

［8］Voss JS，Kipp BR，Kruger AK，et al．Changes in specimen preparation methodology rosy impact urine cytology evaluation［J］．Am J Clin Pathol，2008，130(3):428-433．

［9］Kipp BR，Halling KC，Campion MB，et al．Assessing the value of reflex fluorescence in situ hybridization testing in the diagnosis of bladder cancer when routine urine cytological examination is equivocal［J］．J Urol，2008，179(4):1296-1301．

［10］Schlomer BJ，Ho R，Sagalowsky A，et al．Prospective validation of the clinical usefulness of reflex fluorescence in situ hybridization assay in patients with aytpical cytology for the detection of urothelial carcinoma of the bladder［J］．J Urol，2010，183(1):62-67．

［11］Sarosdy MF，Schellhammer P，Bokinsky G，et al．Clinical evaluation of a multi-target fluorescence in situ hybridization assay for detection of bladder cancer［J］．J Urol，2002，168(5):1950-1954．

［12］Yoder BJ，Skacel M，Hedgepeth R，et al．Reflex UroVysion testing of bladder cancer surveillance patients with equivocal or negative urine cytology:a prospective study with focus on the natural history of anticipatory positive findings［J］．Am J Clin Pathol，2007，127(2):295-301．

［13］Kipp BR，Karnes RJ，Brankley SM，et al．Monitoring intravesical therapy for superficial bladder cancer using fluorescence in situ hybridization［J］．J Urol，2005，173(2):401-404．