硬脂酸透明法對(duì)免疫組化制片的影響與對(duì)策

顧文賢

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬常州第二人民醫(yī)院病理科,江蘇常州,213003)

目前,在常規(guī)石蠟切片工作中,普遍采用二甲苯作為透明劑。但二甲苯屬有毒物質(zhì),其毒性主要是對(duì)中樞神經(jīng)和植物神經(jīng)的麻醉及粘膜的刺激作用[1]。使用硬脂酸做透明劑,無毒無味,不污染工作環(huán)境。國內(nèi)有報(bào)道用其來做包埋劑[2]。硬脂酸對(duì)組織有軟化作用,對(duì)質(zhì)地較硬、較韌的組織更容易切片,不會(huì)出現(xiàn)二甲苯所致的組織收縮,變脆情況[3]。有不遜色于二甲苯的組織處理效果[4]。但是,作者在應(yīng)用硬脂酸透明的工作中發(fā)現(xiàn)使用硬脂酸較二甲苯容易脫片,尤其在免疫組化工作中,雖然不影響免疫組化的結(jié)果[5],但有較高的掉片率,給免疫組化制片帶來了一定的困難。針對(duì)這一問題,作者進(jìn)行了技術(shù)實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果如下。

1 材料與方法

本實(shí)驗(yàn)標(biāo)本均為本科免疫組化蠟塊。包括胃癌,腸癌,甲狀腺組織,子宮內(nèi)膜癌,乳腺癌,前列腺等等。實(shí)驗(yàn)分組:對(duì)照組,質(zhì)量控制前免疫組化制片,35例,427張切片;實(shí)驗(yàn)組,質(zhì)量控制后免疫組化制片,37例,324張切片。

對(duì)照組:常規(guī)組織固定取材后脫水,硬脂酸石蠟混合液3:2 500 mL透明8 h,免疫組化石蠟切片3μm,45℃水溫裱片,70℃烤片,烤片60 min。二甲苯脫蠟,梯度酒精清洗,入蒸餾水,入PBS液緩沖液。視一抗要求抗原修復(fù),煮沸15 min,自然冷卻。一抗試劑共有74種。冰箱4℃過夜。采用Envision兩步法免疫組化標(biāo)記。蘇木精淡染細(xì)胞核,常規(guī)脫水透明封固。實(shí)驗(yàn)組 與對(duì)照組相比,更換了新的浸蠟的純石蠟1和2兩缸。

結(jié)果:對(duì)照組質(zhì)量控制前的免疫組化切片掉片嚴(yán)重。切片完整率常規(guī)法為88.33%,抗原修復(fù)法為72.33%。實(shí)驗(yàn)組,常規(guī)法為99.2%,抗原修復(fù)法為92.12%。免疫組化切片完整率在浸蠟石蠟質(zhì)量控制前后有明顯差異(P<0.05)。

2 討 論

作者觀察發(fā)現(xiàn),免疫組化標(biāo)記的切片完整率與硬脂酸透明后的浸蠟石蠟質(zhì)量(濃度和純度)有密切相關(guān)性。即蠟塊中硬脂酸含量越高組織脫片率也越大。硬脂酸在硬脂酸透明蠟液中的含量呈梯度遞減狀況,與脫水透明標(biāo)本數(shù)量及應(yīng)用次數(shù)有關(guān)。同樣在浸蠟石蠟缸1中隨著浸蠟標(biāo)本數(shù)量和應(yīng)用次數(shù)增加,此缸中硬脂酸的含量呈梯度遞增狀況。在浸蠟石蠟缸2中,硬脂酸含量也呈梯度遞增狀況。硬脂酸粘附力差,如果最后一缸浸蠟蠟液中硬脂酸含量過高,極易造成制片過程中的脫片現(xiàn)象。在免疫組化標(biāo)記制片過程中,這是硬脂酸透明最顯著的缺陷。所以有人提議在用硬脂酸透明時(shí),采用低濃度硬脂酸[6],可使脫片率明顯下降。但濃度過低會(huì)導(dǎo)致透明不徹底,切片困難[7]。

作者采用硬脂酸石蠟混合液透明時(shí),硬脂酸:石蠟為3:2的濃度,針對(duì)高濃度的硬脂酸導(dǎo)致脫片問題,采取了保證浸蠟的石蠟缸1和2的石蠟純度方法,從按標(biāo)本量定期更換到按質(zhì)量更換,切片完整率得到顯著的提高,具有明顯的使用效益。常規(guī)染色鮮艷,免疫組化切片標(biāo)記效果好背景清晰,陽性表達(dá)好,染色鮮艷。并且硬脂酸透明對(duì)抗原的表達(dá)無特別影響[8],這與二甲苯處理的組織是一致的。

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