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    普洱茶固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中環(huán)境因子變化的研究

    2011-03-06 13:09:06單治國(guó)張春花袁文俠周紅杰
    茶葉通訊 2011年2期
    關(guān)鍵詞:環(huán)境濕度有益菌黑曲霉

    單治國(guó) 張春花 袁文俠 周紅杰*

    (1云南農(nóng)業(yè)大學(xué)·昆明·650201;2云南思茅師范高等專科學(xué)?!て斩?65000)

    20世紀(jì)70年代以來(lái),現(xiàn)代普洱茶(即普洱熟茶)加工工藝發(fā)展逐步成熟,發(fā)酵微生物接種方式分兩種[1]:一是人工渥堆快速發(fā)酵,即利用周?chē)h(huán)境中的微生物自然接種發(fā)酵生產(chǎn)普洱熟茶,這實(shí)際上是建立了一個(gè)復(fù)雜的多種微生物發(fā)酵體系。二是人工接種優(yōu)勢(shì)有益微生物進(jìn)行微生物固態(tài)發(fā)酵加工生產(chǎn)普洱熟茶[2],此工藝將從普洱熟茶發(fā)酵體系中分離出的有益微生物,加以純化、快繁等處理,將純化的有益菌種按照一定的數(shù)量比接種于用于發(fā)酵的云南大葉種曬青毛茶,以發(fā)酵生產(chǎn)普洱熟茶,在這一生產(chǎn)過(guò)程中,結(jié)合人為控制固態(tài)發(fā)酵時(shí)間、發(fā)酵用菌量等技術(shù)措施,經(jīng)生產(chǎn)實(shí)踐證明,所加工出的普洱熟茶品質(zhì)優(yōu)良,耐泡性好,普洱熟茶的發(fā)酵周期也有一定程度的縮短。

    所謂微生物固態(tài)發(fā)酵[3]是指在幾乎無(wú)自由水存在或有一定濕度的水不溶性固態(tài)基質(zhì)中,采用自然接種、人工接種或自然與人工接種相結(jié)合的方法,使用一種或多種微生物進(jìn)行發(fā)酵的一個(gè)生物反應(yīng)過(guò)程。這種固態(tài)基質(zhì)既提供微生物生長(zhǎng)代謝所需的碳源、氮源、礦物質(zhì)元素、水及其它營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),又提供微生物生長(zhǎng)的微環(huán)境。究其生物反應(yīng)過(guò)程的本質(zhì),固態(tài)發(fā)酵是以氣相為連續(xù)相的生物反應(yīng)過(guò)程,適宜好氧微生物的生長(zhǎng)。固態(tài)發(fā)酵的基質(zhì)大多為不溶于水的物料,物料的水分含量低于12%時(shí),微生物的生長(zhǎng)就會(huì)受到抑制,固態(tài)發(fā)酵要控制物料的最低限含水量為12%。曬青毛茶一般含水量在9%~12%,必須增加茶葉含水量才能較好地發(fā)揮濕熱作用,增加水分必須根據(jù)茶葉老嫩、空氣溫度、空氣濕度、季節(jié)、固態(tài)發(fā)酵場(chǎng)地等不同情況,掌控發(fā)酵葉水分含量[4]。曬青毛茶經(jīng)潮水至必要的含水量,接種菌種后即可進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵。在這種發(fā)酵環(huán)境中,茶葉就是發(fā)酵基質(zhì)[5]。

    本文試對(duì)有益菌固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中的發(fā)酵因子進(jìn)行觀察記錄,探索其變化趨勢(shì),并結(jié)合對(duì)發(fā)酵階段茶樣進(jìn)行感官審評(píng),利用多元線性回歸分析建立普洱熟茶品質(zhì)和發(fā)酵因子的回歸模型,探明發(fā)酵因子對(duì)普洱熟茶品質(zhì)形成的影響,為有益優(yōu)勢(shì)菌種接種發(fā)酵特色風(fēng)味普洱熟茶工藝提供理論參考和技術(shù)參數(shù)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)菌種及來(lái)源

    少根根霉、黑曲霉、釀酒酵母、綠色木霉,均為云南省自然科學(xué)基金、國(guó)家自然科學(xué)基金普洱茶項(xiàng)目研究組分離、純化、鑒定、保存、篩選、擴(kuò)繁而得,上述菌種均獲授權(quán)專利。

    1.2 實(shí)驗(yàn)茶樣

    本實(shí)驗(yàn)所采集普洱熟茶發(fā)酵階段樣均為人工添加有益菌進(jìn)行微生物固態(tài)發(fā)酵工藝加工的普洱熟茶生產(chǎn)樣及其對(duì)照樣,其編號(hào)、品名及產(chǎn)地等見(jiàn)表1,每個(gè)樣重復(fù)3次。

    1.3 實(shí)驗(yàn)時(shí)間及地點(diǎn)

    時(shí)間:2007年9~12月;地點(diǎn):云南昆明萬(wàn)紅揚(yáng)茶廠。

    1.4 有益菌固態(tài)發(fā)酵

    設(shè)五個(gè)處理(少根根霉、黑曲霉、釀酒酵母、綠色木霉、對(duì)照),大體積堆放普洱茶原料各1噸,重復(fù)3次,進(jìn)行普洱熟茶固態(tài)發(fā)酵。

    潮水:選用凈化水,潮水量30%,并均勻添加有益菌,堆高1.5m,表面適當(dāng)噴水,至堆表面濕透1.5cm,蓋上濕布,增溫保濕以利發(fā)酵的進(jìn)行。

    表1 普洱熟茶加工階段樣的編號(hào)、品名、原料產(chǎn)地及采樣時(shí)間Table 1 The sam ple number,brand and producing area and time ofsamples of Pu-erh tea

    翻堆:視發(fā)酵堆溫、濕度及發(fā)酵環(huán)境的變化,進(jìn)行適時(shí)翻堆。

    取樣:每次翻堆時(shí)按五點(diǎn)取樣法分別取上層(厚10cm)、中層(厚 30cm)、下層(離地面 5cm)及混合四個(gè)樣各5kg,室內(nèi)自然晾干供感官審評(píng)用。

    茶堆溫度、環(huán)境溫度及其濕度等情況每天上午(9:00)、下午(15:00)、晚上(21:30)分別觀察記錄。

    1.5 感官審評(píng)方法

    感官審評(píng):干評(píng)茶葉外形的條索、色澤、整碎、凈度,濕評(píng)茶葉內(nèi)質(zhì)的湯色、香氣、滋味、葉底,根據(jù)品質(zhì)特性給予相應(yīng)的評(píng)語(yǔ),評(píng)分采用百分制。外形30分(條索占10分,整碎占5分,色澤占10分,凈度占5分),內(nèi)質(zhì)70分(香氣占25分,滋味占25分,湯色占10分,葉底占10分),由10位具有良好感官審評(píng)能力的專業(yè)人員進(jìn)行審評(píng)打分,取其平均值為最后得分。審評(píng)時(shí)取茶樣3.0g,150ml沸水沖泡,靜置 5min,重復(fù) 3 次[6~8]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 發(fā)酵過(guò)程中重要物理指標(biāo)變化情況

    普洱熟茶固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中,茶堆溫度、環(huán)境溫度、環(huán)境濕度等發(fā)酵因子是普洱熟茶固態(tài)發(fā)酵得以順利進(jìn)行和普洱熟茶良好品質(zhì)形成的關(guān)鍵因素。

    表2 不同有益菌固態(tài)發(fā)酵普洱熟茶過(guò)程中發(fā)酵因子變化情況Table 2 The variation of fermentational factors during solid-state fermentation by differentbeneficial fungi

    如表2所示:

    ①在五種處理中,接種(綠色木霉、少根根霉、黑曲霉、釀酒酵母)茶堆溫度在30℃~50℃,環(huán)境溫度在7℃~11℃,環(huán)境濕度在50%~80%,對(duì)照樣(不人工接種任何菌),茶堆溫度在25℃~60℃,環(huán)境溫度在7℃~11℃,環(huán)境濕度在58%~80%。

    ②整個(gè)有益菌固態(tài)發(fā)酵的過(guò)程中,茶堆溫度都在60℃以下。

    ③第一翻至第三翻,茶堆溫度均能達(dá)到最高溫度,因接入的有益菌種類不同,其達(dá)到最高溫的翻數(shù)也不同。接種黑曲霉的茶堆二翻時(shí)達(dá)到最高溫55℃;接種釀酒酵母菌的茶堆一翻時(shí)達(dá)到最高溫58℃;接種綠色木霉的茶堆,第三翻時(shí)茶堆溫度達(dá)到50℃,因其特殊性,出堆時(shí)溫度達(dá)到最高點(diǎn)53℃,對(duì)照樣(不人工接種任何菌),二翻時(shí)茶堆溫度達(dá)到最高溫60℃。

    ④每次翻堆后的一至三天內(nèi),茶堆的溫度均迅速升高,在達(dá)到最高溫后,逐漸下降,隨著翻堆的進(jìn)行,茶堆升溫的程度逐漸減弱,并且呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。

    ⑤接種不同有益菌(綠色木霉、少根根霉、黑曲霉、釀酒酵母)固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中,環(huán)境溫度、環(huán)境濕度的變化趨勢(shì)大體一致,環(huán)境溫度主要在7℃~11℃之間,環(huán)境濕度呈現(xiàn)下降→升高→下降的規(guī)律,一般在50%~80%之間變化,因接種的有益菌之間的適生差異,環(huán)境濕度變化有所差異。

    ⑥茶堆溫度、環(huán)境溫度和環(huán)境濕度三者之間相互協(xié)調(diào),相互制約。茶堆溫度升高,環(huán)境溫度也相應(yīng)有所上升,環(huán)境濕度則呈下降趨勢(shì)。

    ⑦因所接種有益菌的最適生長(zhǎng)條件的差異,茶堆溫度、環(huán)境溫度和環(huán)境濕度的變化規(guī)律也存在一定差異性。

    2.2 感官審評(píng)結(jié)果

    從表3可以看出:用有益菌(綠色木霉、黑曲霉、釀酒酵母菌、少根根霉)固態(tài)發(fā)酵的普洱熟茶出堆樣外形差異不明顯,內(nèi)質(zhì)上有一定的差異,主要表現(xiàn)在滋味和香氣方面。用綠色木霉發(fā)酵的普洱熟茶滋味醇厚回甘,香氣陳香透花木香;黑曲霉發(fā)酵的普洱熟茶滋味醇厚,陳香透花果香;少根根霉發(fā)酵的普洱熟茶滋味醇厚甘滑,陳香濃;釀酒酵母菌發(fā)酵的普洱熟茶滋味醇和甘滑,香氣陳香較顯;對(duì)照普洱熟茶滋味醇厚微苦,香氣陳香。

    表3 感官審評(píng)結(jié)果Table 3 The sensory taste result in solid-state fermentation tea

    綠色木霉發(fā)酵加工的普洱熟茶感官品質(zhì)得分為94分,黑曲霉發(fā)酵加工的普洱熟茶感官品質(zhì)得分為93分,少根根霉發(fā)酵加工的普洱熟茶感官品質(zhì)得分為90分,釀酒酵母發(fā)酵加工的普洱熟茶感官品質(zhì)得分為88分,對(duì)照的普洱熟茶感官品質(zhì)得分為79分。

    2.3 發(fā)酵因子與品質(zhì)量化關(guān)系多元線性回歸分析

    通過(guò)對(duì)人工接種有益菌(綠色木霉、黑曲霉、釀酒酵母菌、少根根霉)進(jìn)行普洱熟茶固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中的發(fā)酵因子的觀察、記錄和分析,結(jié)合對(duì)不同發(fā)酵茶樣的感官審評(píng)評(píng)分結(jié)果,探明在人工接種不同有益菌進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)普洱熟茶過(guò)程中,發(fā)酵因子的變化規(guī)律及其與發(fā)酵普洱熟茶品質(zhì)的關(guān)系,并建立普洱熟茶加工過(guò)程中發(fā)酵因子與品質(zhì)關(guān)系的回歸模型。

    品質(zhì)得分(Y)、發(fā)酵天數(shù)(X1)、茶堆溫度(X2)、環(huán)境溫度(X3)、環(huán)境濕度(X4)的觀察記錄值進(jìn)行多元線性回歸分析,可以得到回歸方程:

    ①綠色木霉固態(tài)發(fā)酵的回歸方程:

    Y=91.243+0.107X1+0.073X2+0.337X3-0.131X4(復(fù)相關(guān)系數(shù) R2=0.9685)

    回歸系數(shù)為+0.107、+0.073、+0.337、-0.131

    回歸方程常數(shù)項(xiàng)β=91.2426

    ②黑曲霉固態(tài)發(fā)酵的回歸方程:

    Y=90.442+0.066X1-0.011X2-0.069X3+0.006X4(復(fù)相關(guān)系數(shù) R2=0.9607)

    回歸系數(shù)為+0.066、-0.011、-0.069、+0.006

    回歸方程常數(shù)項(xiàng)β=90.4422

    ③少根根霉固態(tài)發(fā)酵的回歸方程:

    Y=87.144+0.055X1+0.012X2+0.16X3+0.014X4(復(fù)相關(guān)系數(shù) R2=0.9944)

    回歸系數(shù)為+0.055、+0.012、+0.160、+0.014

    回歸方程常數(shù)項(xiàng)β=87.1444

    ④釀酒酵母菌固態(tài)發(fā)酵的回歸方程:

    Y=83.898+0.164X1+0.008X2+0.223X3-0.082X4(復(fù)相關(guān)系數(shù) R2=0.9969)

    回歸系數(shù)為+0.164、+0.008、+0.223、-0.082

    回歸方程常數(shù)項(xiàng)β=83.8978

    3 討論與結(jié)論

    普洱熟茶固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中,微生物種類、發(fā)酵溫度、發(fā)酵時(shí)間、環(huán)境溫度和濕度等因素對(duì)普洱熟茶品質(zhì)的形成均具有重要的影響作用。這些發(fā)酵條件不僅影響微生物的生命活動(dòng),而且影響制茶過(guò)程中化學(xué)成分的轉(zhuǎn)化,從而影響所發(fā)酵出的普洱熟茶的感官品質(zhì)。普洱熟茶進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵大生產(chǎn)過(guò)程中發(fā)酵條件的差異導(dǎo)致了普洱熟茶品質(zhì)的差異。

    3.1 發(fā)酵過(guò)程中茶堆溫度變化情況探討

    溫度是標(biāo)志物體冷熱程度的參數(shù),反映了物體分子運(yùn)動(dòng)的劇烈程度。

    茶堆溫度是普洱熟茶固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中的主要控制因子,茶堆溫度的高低,直接反映了茶堆中茶內(nèi)含物質(zhì)和水分子的運(yùn)動(dòng)速度,發(fā)酵茶堆內(nèi)部的最低溫度不能低于28℃,最高溫度不能高于65℃,當(dāng)前普洱熟茶大生產(chǎn)中的堆溫主要通過(guò)翻堆來(lái)進(jìn)行調(diào)控。

    人工接種一定比例的有益菌(綠色木霉、少根根霉、黑曲霉、釀酒酵母)進(jìn)行普洱熟茶固態(tài)發(fā)酵后,堆溫上升較快,這是由于有益菌附著在具有一定濕度的茶坯基質(zhì)上,茶坯基質(zhì)為有益菌提供其生長(zhǎng)代謝所需的碳源、氮源、礦物質(zhì)元素、水及其它營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),使得有益菌快速大量地繁殖,隨著有益菌數(shù)量的增加,呼吸代謝中釋放的熱量也相應(yīng)增加,使茶堆溫度迅速升高,隨著發(fā)酵的持續(xù)進(jìn)行,茶堆升溫的程度逐漸減弱,達(dá)到最高溫后呈現(xiàn)下降趨勢(shì),這是因?yàn)榇蠖鄶?shù)有益菌的適宜生長(zhǎng)溫度為28℃~37℃,最高耐受溫度為45℃~50℃,一般不超過(guò)60℃,隨著固態(tài)發(fā)酵的進(jìn)行,有益菌代謝產(chǎn)物的積累,代謝呼吸中放熱較多,使得茶堆溫度升高,酸度增加,逐漸偏離了有益菌的最佳生長(zhǎng)條件,有益菌生命活動(dòng)減弱,茶堆溫度下降。

    人工接種有益菌種進(jìn)行普洱熟茶固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中,發(fā)酵葉的溫度一般保持在符合微生物生長(zhǎng)的范圍內(nèi),適宜的溫度既能促使發(fā)酵葉中產(chǎn)生多種物質(zhì)的化學(xué)變化,還能抑制有害雜菌的生長(zhǎng),更為重要的是促使有益微生物大量滋生,使得微生物分泌的胞外酶的量及其高效的催化活性相應(yīng)增加,促進(jìn)發(fā)酵葉的系列變化[9,10]。當(dāng)堆溫保持在一定的范圍時(shí),加工出的普洱熟茶具有較好的品質(zhì)特征,當(dāng)堆溫低于或高于一定的范圍時(shí),加工出的普洱熟茶的品質(zhì)不是很理想,堆溫過(guò)低,一些化學(xué)成分氧化降解所需的能量無(wú)法滿足,導(dǎo)致發(fā)酵不足;堆溫過(guò)高,又會(huì)導(dǎo)致碳化燒心,同樣不利于普洱熟茶良好風(fēng)味品質(zhì)的形成。

    因此,在人工接種優(yōu)勢(shì)微生物進(jìn)行普洱熟茶固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中,有效地控制好發(fā)酵溫度有利于普洱熟茶良好品質(zhì)的形成。

    3.2 發(fā)酵過(guò)程中發(fā)酵因子之間關(guān)系的探討

    環(huán)境溫度是表示環(huán)境冷熱程度的物理量,是決定普洱熟茶發(fā)酵室內(nèi)溫度高低的重要指標(biāo)之一,不同環(huán)境溫濕度條件對(duì)人工接種有益菌進(jìn)行普洱熟茶發(fā)酵的影響程度不同。

    高溫高濕情況下,有利于減少茶堆中水分的散失,有利于茶堆持續(xù)高溫,提高酶的活性,加速發(fā)酵葉內(nèi)含物質(zhì)的轉(zhuǎn)化速率,抑制有害雜菌的生長(zhǎng)、散發(fā)雜異味,縮短發(fā)酵時(shí)間,提高普洱熟茶的品質(zhì)。

    高溫低濕情況下,茶堆水分會(huì)不斷散失,茶堆高溫持續(xù)時(shí)間短,發(fā)酵葉內(nèi)含物質(zhì)的轉(zhuǎn)化速率慢,發(fā)酵不均勻,不利于普洱熟茶品質(zhì)的形成。

    低溫高濕情況下,茶堆中雖然水分散失較慢,但堆溫升溫慢,發(fā)酵葉內(nèi)含物質(zhì)轉(zhuǎn)化速率慢,導(dǎo)致腐生菌滋生,對(duì)普洱熟茶良好品質(zhì)的形成不利。

    低溫低濕情況下,茶堆水分散失慢,導(dǎo)致茶堆溫度內(nèi)部高而外層低,不利于發(fā)酵葉內(nèi)含物質(zhì)成分的均勻轉(zhuǎn)化,發(fā)酵均勻度差,可控性差,不利于普洱熟茶品質(zhì)的形成。

    綜上所述,本文針對(duì)人工接種有益菌進(jìn)行普洱熟茶固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中的茶堆溫度、環(huán)境因子進(jìn)行了分析研究,揭示了各因子間的相互協(xié)調(diào)、相互影響的關(guān)系。茶堆溫度要控制在40℃~60℃,在冬季,環(huán)境溫度控制在7℃~10℃,環(huán)境濕度控制在70%~80%,發(fā)酵時(shí)間控制在50~60d,有利于普洱熟茶品質(zhì)風(fēng)味的形成。通過(guò)對(duì)不同有益菌發(fā)酵生產(chǎn)的普洱熟茶感官品質(zhì)及發(fā)酵因子研究而建立起不同優(yōu)勢(shì)有益微生物固態(tài)發(fā)酵普洱熟茶回歸方程,在人工接種有益菌進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)普洱熟茶的過(guò)程中,利用回歸方程可以實(shí)現(xiàn)定向控制溫度、濕度、翻堆周期等技術(shù),改善普洱熟茶固態(tài)發(fā)酵因子,以縮短生產(chǎn)周期,促進(jìn)內(nèi)含物質(zhì)的轉(zhuǎn)化,使普洱熟茶固態(tài)發(fā)酵朝著有益于特定品質(zhì)形成的方向發(fā)展,生產(chǎn)不同風(fēng)味普洱熟茶。

    1 梁名志.普洱茶渥堆工序的研究現(xiàn)狀.海峽兩岸茶葉科技學(xué)術(shù)研討會(huì)(中國(guó)福州)論文集,2000.

    2 趙龍飛,周紅杰.云南普洱茶渥堆過(guò)程中主要微生物初探[J].商丘師范學(xué)院學(xué)報(bào),2005,21(2):129~133.

    3 姚躍飛,曾柏全.現(xiàn)代固態(tài)發(fā)酵技術(shù)在食品加工業(yè)中的應(yīng)用[J].食品與機(jī)械,2005.11.

    4 周紅杰.云南普洱茶[M].昆明:云南科技出版社,2004.

    5 龔加順,周紅杰,張新富,等.云南曬青綠毛茶的微生物固態(tài)發(fā)酵及成分變化研究[J].茶葉科學(xué),2005,25(4):300~306.

    6 黃意歡.茶學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,1995.

    7 沈培和,張育松,陳洪德,等.茶葉審評(píng)指南[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,1998.

    8 陸松侯,施兆鵬.茶葉審評(píng)與檢驗(yàn)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2001.

    9 王漢生.關(guān)于普洱茶的人工渥堆發(fā)酵工序[J].廣東茶葉,2005,(4):3~4.

    10 周紅杰,龔加順等.云南普洱茶的學(xué)科地位和現(xiàn)實(shí)意義[J].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(普洱茶專輯),2006,21:38~44.

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