蛋雞非典型新城疫的診治

王建東

（江蘇省常熟市虞山動物防疫站，常熟 215500）

蛋雞非典型新城疫的診治

王建東

（江蘇省常熟市虞山動物防疫站，常熟 215500）

1 發(fā)病情況

江蘇省常熟市某蛋雞場從2009年3月從無錫馬山雞場購進10 000羽伊莎蛋雞苗。免疫程序為：7日齡用“新城疫-傳染性支氣管炎H120二聯(lián)活疫苗”2羽份/羽點眼，25日齡用“新城疫-傳染性支氣管炎H52二聯(lián)活疫苗”2羽份/羽飲水免疫，60日齡用新城疫I系苗肌肉注射，110日齡用新城疫-減蛋下降綜合征二聯(lián)滅活疫苗肌肉注射。2009年10月10日起這批處于產(chǎn)蛋高峰期的雞陸續(xù)發(fā)病，產(chǎn)蛋量急劇下降。

2 臨床癥狀

部分雞只表現(xiàn)為零星掉頭，采食時做“甩頭”動作，鳴叫聲減弱，后來有喘鳴聲，精神沉郁，呆立不動，雞冠顏色由鮮紅色逐漸變成淺紅甚至蒼白色，產(chǎn)畸形蛋，沙殼蛋，破碎蛋增多，蛋形變小，死亡數(shù)由開始每天10多羽逐漸發(fā)展到每天30多羽，產(chǎn)蛋量由每天520公斤降到 400 公斤。

3 病理變化

剖解病死和臨死雞20羽，病理變化表現(xiàn)為：肝脾腎不同程度腫大，心包積液，心冠脂肪有點狀出血，心肌色淡，嗉囊食少充滿酸臭液體，腺胃乳頭水腫，泄殖腔粘膜輕微出血，胸腔積液，腹水增多。

4 實驗室診斷

4.1 病料采集與處理

無菌采集剖檢雞腦、肝、脾、肺等組織，放于滅菌平皿中剪碎，用含抗生素的PBS（含2 000U/ml青霉素、2mg/ml鏈霉素、50μg/ml慶大霉素和1 000U/ml制霉菌素，用10mol/ L NaOH，調(diào)pH值至7.0～7.4）按1∶5比例對組織樣品進行勻漿，轉(zhuǎn)移至滅菌指形管中，5 000 rpm離心10 min，將上清轉(zhuǎn)入新的滅菌指形管中準備進行病毒分離接種[9]。

4.2 病毒分離

取上述處理后的上清液以尿囊腔途徑接種5只10日齡SPF雞胚，接種量為0.2ml/胚，置孵化器中37℃繼續(xù)培養(yǎng)，在接種后的18～24 h左右開始照胚，若雞胚在24 h內(nèi)死亡則棄去不用，以后每隔12 h照胚1次，死亡雞胚置4℃冰箱冷藏4～6 h以收縮血管，無菌收集雞胚尿囊液。接種的5只雞胚中，有3只于接種后48 h死亡，2只于接種后60 h死亡。在收獲尿囊液的過程中觀察發(fā)現(xiàn)所有接種胚均表現(xiàn)為胚胎全身出血，尤以頭部、足趾和翅出血明顯，符合NDV接種雞胚后產(chǎn)生的典型病變特征。

4.3 病毒鑒定

按文獻介紹的方法通過血凝和血凝抑制試驗進行分離病毒鑒定。

4.3.1 血凝試驗（HA） 在 96 孔“V”型微量反應(yīng)板中，每孔加入25μL生理鹽水；每排第1孔加入25μL 雞胚尿囊液，依次作倍比稀釋至第 11 孔，棄去。每排各孔加入 25μL 生理鹽水；每排各孔加入 25μL 濃度為1%雞紅細胞；將微量反應(yīng)板在振蕩器上稍微振蕩，充分混勻，室溫或 4℃靜置，從底部觀察。在第12孔（對照孔）的紅細胞完全沉積呈現(xiàn)“紅太陽”狀時進行結(jié)果判定，將反應(yīng)板傾斜，觀察每排沉積的紅細胞與對照孔呈相同的流淌現(xiàn)象，則說明沒有凝集，若沒有此現(xiàn)象則說明紅細胞凝集，以完全凝集的最高稀釋倍數(shù)為血凝效價，用此尿囊原液制作四單位抗原，用 HA試驗進行檢測并調(diào)整。HA實驗結(jié)果顯示5只接種胚收獲的尿囊液血凝價分別為25、25、26、25、25。

4.3.2 血凝抑制試驗（HI） 在96孔“V”型微量反應(yīng)板中，每孔加入25 μL生理鹽水；每排第一孔分別加入 25 μL新城疫或H5亞型禽流感標準診斷血清，依次作倍比稀釋至第10 孔，棄去；在每反應(yīng)孔中加入25 μL的4單位抗原，將微量反應(yīng)板在振蕩器上充分混勻，室溫靜置 30～40min；每孔加入 25 μL 1%雞紅細胞，在振蕩器上充分混勻后，室溫或4℃靜置，在第 12 孔（對照孔）的紅細胞完全沉積呈現(xiàn)“紅太陽”狀時進行結(jié)果判定，此時第11 孔（陰性對照孔）紅細胞則完全凝集，沒有此現(xiàn)象。將反應(yīng)板傾斜，完全抑制四單位抗原的凝集紅細胞的作用則表現(xiàn)為紅細胞沉積于孔底，和生理鹽水對照孔26（第12孔）流淌現(xiàn)象相同。分別用新城疫陽性血清和H5、H9亞型禽流感陽性血清進行的血凝試驗結(jié)果顯示，收獲尿囊液的血凝作用可以被新城疫陽性血清所抑制，而不能被H5、H9亞型禽流感陽性血清抑制，因此可以判定分離到的病毒為NDV。

根據(jù)臨床癥狀，流行特點，剖解病理變化及實驗室檢測結(jié)果將該雞群所發(fā)疾病診斷為非典型性新城疫。

5 防制措施

疫情確診后，我們調(diào)整飼料配方，多添加電解多維，對發(fā)病雞舍加強消毒，多通風換氣，淘汰病雞，并做好無害化處理。對尚未發(fā)病的雞應(yīng)用2羽份/羽新城疫IV系弱毒活疫苗進行緊急免疫接種，飲水中加入氟苯尼考，強力霉素防止繼發(fā)感染。10 d后，雞群不再有死亡現(xiàn)象發(fā)生，產(chǎn)蛋率逐漸上升。

6 發(fā)生原因分析及改進方法

根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查，該雞場針對新城疫采取了一定的免疫措施，但是疫苗使用后雞群仍然發(fā)生了非典型性的新城疫，屬于典型的免疫失敗，原因可能是多方面的：

6.1 雛雞母源抗體的影響

新城疫免疫失敗的原因，多數(shù)是由母源抗體的干擾所致。由于雞群的個體免疫應(yīng)答差異以及同批次雛雞群不一定來自同一雞群等原因，造成雛雞群中母源抗體的水平參差不齊，群與群之間有差異，即使同群個體間也存在差異。如果所有雛雞固定同一日齡進行接種，若母源抗體含量比較高時接種的疫苗會被母源抗體中和，導(dǎo)致機體不能正常地產(chǎn)生免疫力，使雛雞首免失敗。

6.2 疾病的影響

雛雞的免疫力主要靠法氏囊產(chǎn)生，凡是能損害法氏囊的疾病，如馬立克氏病病毒（MDV）、傳染性法氏囊病病毒（IBDV）、傳染性貧血病病毒（CAV）、淋巴性白血病病毒（ALV）、球蟲等都可使新城疫的免疫效果降低。另外，某些藥物如氯霉素、磺胺類藥、皮質(zhì)激素以及飼喂霉變飼料能導(dǎo)致機體免疫功能下降，對疫苗應(yīng)答能力減弱，對疾病易感性增加。

6.3 疫苗的影響

新城疫疫苗種類滅活苗和活苗。滅活苗又分單純滅活苗和油佐劑滅活苗，應(yīng)用較廣的是油佐劑滅活苗，此苗對雞應(yīng)用安全，免疫效果好。但接種油佐劑滅活苗，必須先接種弱毒活苗。新城疫污染區(qū)可用油佐劑滅活苗與弱毒苗同時接種效果佳。如不采取油苗或Ⅰ系，單憑用弱毒苗，新城疫病的流行很難控制。活苗分中等毒力和弱毒苗兩種。即Ⅰ系屬中發(fā)型毒株的強毒苗，一般用于2個月齡以上的雛雞；Ⅱ系（B1系）、Ⅲ系（F 系）、IV 系（Lasota 系）和克隆-30 等疫苗屬緩發(fā)型毒株的弱毒苗，可用于雛雞。在實際應(yīng)用中對雛雞免疫力較好的是克隆-30，其次是IV 系、Ⅱ系和Ⅲ系。

6.4 疫苗使用方法和接種途徑的影響

一般情況每種疫苗都有特定的接種途徑，如Ⅰ系苗采用肌肉注射、Ⅱ系苗和Ⅳ系苗采用滴鼻、點眼或飲水免疫。當采用滴鼻、點眼免疫時，未滴入鼻孔、眼睛，飲水免疫時，免疫前未限水或飲水器內(nèi)加水量太多，使配制的疫苗未能在規(guī)定時間內(nèi)飲完而影響劑量以及使用不潔凈河水、井水，含氯氣的自來水、熱水等。此外，Ⅰ系苗肌肉注射時，若稀釋倍數(shù)太大。這些都不能產(chǎn)生較好的免疫效果，甚至?xí)?dǎo)致免疫效果失敗。

6.5 先后順序和間隔時間的影響

雛雞階段要用多種疫苗，其先后順序和間隔時間會對免疫力的產(chǎn)生有一定的影響，如傳染性支氣管炎、新城疫。如果是單苗，它們之間間隔時間必須在7d以上，否則免疫效果將受到影響，如果是聯(lián)苗不受影響。

6.6 疫苗質(zhì)量問題及保管、運輸不當

部分單位生產(chǎn)疫苗質(zhì)量不過關(guān)，毒力不穩(wěn)定，接種后不能產(chǎn)生相應(yīng)免疫力等；在疫苗運輸過程中由于運輸時間長，中途周轉(zhuǎn)次數(shù)多，使疫苗的效價下降；在疫苗保管時，疫苗存放過久或超過有效期，疫苗受陽光曝曬或稀釋后長時期未用，疫苗反復(fù)凍融，保存溫度忽高忽低。這些因素都可造成疫苗失效。

6.7 應(yīng)激因素

雞營養(yǎng)不良，衛(wèi)生條件差以及高溫、寒冷、缺水、饑餓、噪音等各種應(yīng)激因素，都將影響雞體免疫應(yīng)答能力，降低新城疫的免疫效果。

針對上述這些可能導(dǎo)致免疫失敗的問題，在生產(chǎn)中都應(yīng)該制定出相應(yīng)的對策，如：

（1）防止疫苗之間的干擾。多種疫苗同時免疫，一些疫苗之間會相互產(chǎn)生干擾現(xiàn)象。如新城疫疫苗和傳染性支氣管炎疫苗同時免疫時，傳染性支氣管炎病毒會干擾機體對新城疫疫苗的免疫應(yīng)答，故兩者接種時間應(yīng)間隔10 d以上。

（2）要按規(guī)定妥善保存好疫苗。各種疫苗在貯存、使用前及使用過程中，一定要按說明書上規(guī)定的條件保存，絕不能違反操作規(guī)程。

（3）防止劑量不足和疫苗稀釋后放置時間過長：在新城疫IV系苗防疫過程中，在飲水免疫前，應(yīng)根據(jù)外界氣溫情況停止供水2～4 h。疫苗現(xiàn)配現(xiàn)用，稀釋后的疫苗要盡可能在0.5～2 h 內(nèi)飲完。

（4）免疫前后合理使用消毒藥、抗病毒藥物是帶雞消毒的關(guān)鍵。

（5）免疫程序要合理：①雛雞首免日齡應(yīng)視其來源而定。若來源于大型種雞場，因防疫相對規(guī)范，母源抗體滴定相對較高，首免日齡宜推遲。新城疫一般7～10日齡首免，若苗雞來源于收購的散養(yǎng)戶的雞蛋，則首免日齡宜提前3～5日齡。當然，如果有條件的話，最好還是根據(jù)抗體監(jiān)測的結(jié)果合理確定首免時間。②2免的時間應(yīng)避開抗體高峰期進行，在該苗保護期后期進行或在第1次免疫后間隔7～15d進行2免。

（6）抓好飼養(yǎng)管理工作：調(diào)整好雞群飼養(yǎng)密度，對雛雞要適時開飲與開食，并做好保溫工作，減少由于應(yīng)激因素而造成雞體對疫苗接種免疫應(yīng)答水平的下降。

[1] 陳溥言. 獸醫(yī)傳染病學(xué)（第五版）[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社出版，2007

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