ClC－3氯通道蛋白磷酸化及其功能的研究進(jìn)展*

柏志全， 李華榮， 張海峰， 朱林燕， 王立偉△， 陳麗新△

(暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院1生理學(xué)系，2藥理學(xué)系，廣東廣州510632)

細(xì)胞容積調(diào)節(jié)廣泛參與細(xì)胞的各種生理病理過程，如上皮細(xì)胞物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、物質(zhì)代謝、細(xì)胞興奮性、激素釋放、細(xì)胞遷移、細(xì)胞增殖及細(xì)胞壞死凋亡等［1，2］。在低滲環(huán)境刺激下，容積激活性氯通道參與細(xì)胞容積調(diào)節(jié)，對(duì)維持細(xì)胞容積起著重要調(diào)節(jié)作用。目前，普遍認(rèn)為容積激活性氯通道的候選蛋白是電壓門控氯通道家族蛋白成員3［voltage－gated chloride channel(ClC)family protein 3，ClC－3］。ClC－3氯通道分布廣泛，各種組織器官和細(xì)胞中都有表達(dá)，并且具有較高基礎(chǔ)活性，通道開放，Cl－外流形成氯電流，參與細(xì)胞容積調(diào)節(jié)、介導(dǎo)物質(zhì)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)、胞內(nèi)有機(jī)物釋放及突觸囊泡酸化等過程。不同生理病理過程中，各種刺激信號(hào)通過各自的信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)或者直接刺激氯通道，導(dǎo)致通道開放或者關(guān)閉，說(shuō)明ClC－3氯通道門控特性是由多種機(jī)制參與調(diào)節(jié)。那么，研究ClC－3門控調(diào)節(jié)機(jī)制對(duì)理解其在多種生理病理過程的作用成為關(guān)鍵點(diǎn)。

磷酸化和去磷酸化是蛋白質(zhì)功能調(diào)節(jié)的重要機(jī)制之一，通過磷酸化或去磷酸化使該蛋白激活或者失活從而影響其功能。研究發(fā)現(xiàn)，多種蛋白激酶參與了ClC－3氯通道的開放或關(guān)閉過程。因此，探討不同蛋白激酶對(duì)ClC－3氯通道的調(diào)節(jié)，從而推斷其在不同生理病理過程中的作用具有重要意義。本文將討論ClC－3氯通道相關(guān)蛋白激酶及其對(duì)ClC－3氯通道功能調(diào)節(jié)作用。

1 ClC－3氯通道及蛋白磷酸化

1.1 ClC－3氯通道 ClC－3氯通道蛋白是電壓門控氯離子通道ClC家族成員之一，該蛋白與ClC－4及ClC－5兩種氯離子轉(zhuǎn)運(yùn)體氨基酸序列相近。位于常染色體4q33區(qū)的CLCN3基因，編碼ClC－3蛋白，ClC－3氯通道有2種亞型:其一，Transcript variant e(NM_173872.2)翻譯的ClC－3e蛋白全長(zhǎng)866個(gè)氨基酸;其二，Transcript variant b(NM_001829.2)翻譯的ClC－3b蛋白全長(zhǎng)818個(gè)氨基酸，ClC－3b在羧基末端較ClC－3e少48個(gè)氨基酸。

ClC－3由Sasaki等［3］在大鼠腎臟克隆并鑒定，隨后研究發(fā)現(xiàn)該蛋白分布廣泛，在不同種屬的不同組織器官和細(xì)胞都有表達(dá)。ClC－3蛋白不僅分布在細(xì)胞膜上，同時(shí)在胞漿和細(xì)胞核內(nèi)都有分布［4，5］。對(duì)其通道特性、生理功能研究時(shí)發(fā)現(xiàn)ClC－3氯通道可以調(diào)節(jié)細(xì)胞多種功能，參與到各種生理病理過程中，其開放或關(guān)閉受多種因素調(diào)節(jié)，如氯離子濃度、滲透壓、pH、膜電位、ATP、鈣離子及蛋白激酶等。其中，已發(fā)現(xiàn)可以影響通道開放關(guān)閉的蛋白激酶如PKA (protein kinase A)、PKB、PKC等是各種信號(hào)通路中的關(guān)鍵蛋白激酶，可磷酸化下游蛋白使其行使功能。不同刺激信號(hào)作用細(xì)胞后通過第二信使或第三信使激活這些蛋白激酶，它們通過對(duì)ClC－3氯通道的磷酸化影響其功能，如cAMP→PKA→ClC－3。因此，ClC－3氯通道在不同生理病理過程中的功能受多種信號(hào)通路調(diào)節(jié)控制。

1.2 蛋白質(zhì)磷酸化 可逆性磷酸化是蛋白質(zhì)功能調(diào)節(jié)的重要機(jī)制，蛋白激酶和磷酸酶通過磷酸化或去磷酸化調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)功能，參與調(diào)控細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因轉(zhuǎn)錄翻譯、細(xì)胞周期等過程。細(xì)胞生命關(guān)鍵活動(dòng)都有蛋白激酶介導(dǎo)磷酸化修飾參與，其中蛋白質(zhì)可逆性磷酸化是細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要方式。

真核生物蛋白質(zhì)的磷酸化位點(diǎn)主要是絲氨酸、蘇氨酸及酪氨酸殘基，而原核生物蛋白質(zhì)磷酸化多發(fā)生在組氨酸、精氨酸和賴氨酸殘基。一種蛋白質(zhì)可能存在多個(gè)磷酸化位點(diǎn)并受多種蛋白激酶和磷酸酶調(diào)控，因此對(duì)蛋白質(zhì)磷酸化研究就比較復(fù)雜。蛋白質(zhì)磷酸化研究包括磷酸化類型、磷酸化位點(diǎn)預(yù)測(cè)及鑒定、磷酸化定量分析、磷酸化功能研究、磷酸化調(diào)控信號(hào)通路研究等。

2 ClC－3氯通道磷酸化及其功能

ClC－3氯通道在低滲環(huán)境下被激活，通道開放，參與細(xì)胞多種生理調(diào)節(jié)過程，在細(xì)胞容積調(diào)節(jié)中具有重要作用。多年研究發(fā)現(xiàn)，不僅低滲可以激活ClC－3氯通道，其它多種胞內(nèi)或胞外刺激信號(hào)都可以使通道開放或者關(guān)閉。這些信號(hào)如何激活或關(guān)閉ClC－3氯通道是多年來(lái)的研究熱點(diǎn)。以下將主要討論磷酸化對(duì)通道開關(guān)的影響及其意義。

2.1 PKA信號(hào)通路 ClC－3、ClC－4和ClC－5屬于ClC家族同一分支，ClC－5首次從大鼠腦克隆并鑒定，其80%氨基酸序列與ClC－3相同，并證實(shí)有PKA的磷酸化位點(diǎn)，然而人為提高細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度對(duì)其電流特性沒有影響［6］。PKA激動(dòng)劑forskolin可以明顯激活小鼠睪丸細(xì)管中未成熟足細(xì)胞TM4的氯電流，其抑制劑H－89則能消除1，25(OH)2－D3激活的氯電流［7］。Nagasaki等［8］較為詳細(xì)研究了胞內(nèi)cAMP對(duì)ClC－3的作用，結(jié)果顯示8－BrcAMP可以抑制豚鼠心肌細(xì)胞低滲激活ClC－3電流;異丙腎上腺素在無(wú)鈣條件下可以減低ClC－3電流;高表達(dá)ClC－3氯通道的NIH/3T3細(xì)胞，8－BrcAMP可抑制ClC－3電流，其效應(yīng)可被PKA拮抗劑KT5720和ClC－3突變(S51A)阻斷，提示cAMP通過PKA磷酸化S51(PKC磷酸化位點(diǎn))位絲氨酸抑制ClC－3電流。但PKA是否確實(shí)通過磷酸化S51而影響ClC－3通道還有待于進(jìn)一步證實(shí)，其主要原因有兩點(diǎn):第一，cAMP對(duì)ClC－5沒有影響;其二，研究發(fā)現(xiàn)某些ClC－3突變體可以降低對(duì)氯離子通透性，其特性同ClC－5對(duì)氯離子的轉(zhuǎn)運(yùn)相似［9］，由此可推斷該突變點(diǎn)附近可能存在PKA磷酸化位點(diǎn)。

G蛋白偶聯(lián)受體→cAMP→PKA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是經(jīng)典激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，ClC－3通道可能是PKA效應(yīng)蛋白之一。正如上文所述異丙腎上腺素作用于腎上腺受體后，激活腺苷酸環(huán)化酶導(dǎo)致cAMP濃度升高，活化的PKA磷酸化ClC－3通道影響細(xì)胞功能。cAMP→PKA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路不僅影響ClC－3通道，同時(shí)也影響其它陽(yáng)離子通道如鉀離子通道［10，11］，共同調(diào)節(jié)細(xì)胞容積維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)。

2.2 Akt(PKB)信號(hào)通路 磷脂酰肌醇3－激酶(phosphatidylinositol 3－kinase，PI3K)家族參與多種信號(hào)通路，該酶可使磷脂酰肌醇的3位磷酸化而生成PI－(3，4)P2和PI－(3，4，5)P3。其中，IA型PI3K磷酸化磷脂酰肌醇形成的磷脂酰肌醇三磷酸酯(phosphatidylinositol 3，4，5－trisphosphate，PIP3)可調(diào)節(jié)下游Akt/PKB活性，該信號(hào)通路與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)而備受關(guān)注［12，13］?；罨腁kt/PKB通過磷酸化下游許多靶蛋白如GSK－3β、Bad、caspase－9、NF－κB、CREB、p21Cip1和p27Kip1等，調(diào)節(jié)細(xì)胞多種活動(dòng)如遷移、增殖和分化等。

ClC－3氯通道參與細(xì)胞多種功能，研究發(fā)現(xiàn)其在細(xì)胞遷移過程中具有重要作用。Wnt通路是介導(dǎo)細(xì)胞遷移的主要信號(hào)通路，其中GSK－3β是該信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵蛋白激酶，GSK－3β同樣也是Akt/ PKB信號(hào)通路的下游蛋白［14］，那么ClC－3氯通道是否作為這些信號(hào)通路的最終效應(yīng)蛋白從而影響細(xì)胞遷移。目前沒有直接證據(jù)說(shuō)明PKB和GSK－3β影響ClC－3氯通道的報(bào)道。Tang等［15，16］在研究?jī)?nèi)皮素對(duì)大鼠基底血管平滑肌增殖時(shí)發(fā)現(xiàn)，利用siRNA干擾阻斷ClC－3表達(dá)后，PKB和GSK－3β的磷酸化程度明顯減弱。該結(jié)果可推測(cè)ClC－3氯通道可能是PKB或GSK－3β信號(hào)通路中的參與者。因此，細(xì)胞外刺激信號(hào)是否通過PKB或GSK－3β信號(hào)通路影響ClC－3氯通道從而調(diào)節(jié)細(xì)胞功能還有待于進(jìn)一步證實(shí)。

2.3 PKC信號(hào)通路 1994年，Kawasaki等［17］從大鼠腦神經(jīng)元克隆出ClC－3基因，研究發(fā)現(xiàn)活化的PKC可以抑制ClC－3氯通道。此后，科學(xué)家對(duì)PKC調(diào)節(jié)ClC－3氯通道功能進(jìn)行了大量研究。目前對(duì)于PKC調(diào)節(jié)ClC－3氯通道有兩種相反的觀點(diǎn)，一種是PKC抑制ClC－3氯通道開放，一種是PKC激活ClC－3氯通道。Du等［18］研究犬科動(dòng)物心房肌細(xì)胞容積激活性氯通道時(shí)發(fā)現(xiàn)活化的PKC可以激活ClC－3通道，其研究結(jié)果同PKC抑制兔心房肌細(xì)胞ClC－3通道相反，認(rèn)為這是由于種屬差異引起的。Gong等［19］在研究PKC對(duì)小鼠心室肌細(xì)胞容積激活性氯通道影響中得出的結(jié)論與上述Du等［18］研究結(jié)果相同，即活化的PKC可以激活ClC－3通道。目前，多數(shù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)提示活化的PKC抑制ClC－3，如Duan等［20］、Boese等［21］、Do等［22］等科學(xué)家研究結(jié)果表明PKC抑制ClC－3。

PKC通過磷酸化ClC－3氯通道起調(diào)節(jié)作用，那么就需要確定其磷酸化位點(diǎn)。Duan等［20］利用位點(diǎn)突變技術(shù)，發(fā)現(xiàn)51位絲氨酸可能是PKC磷酸化作用位點(diǎn)，其它科學(xué)家利用膜片鉗技術(shù)研究了51位絲氨酸突變體ClC－3電流特性，發(fā)現(xiàn)PKC不能抑制突變體ClC－3。該研究小組的Rossow等［23］利用缺失突變技術(shù)研究了ClC－3氨基末端前100個(gè)氨基酸對(duì)通道門控影響，發(fā)現(xiàn)缺失型ClC－3氯通道對(duì)PKC沒有反應(yīng)，而胞內(nèi)透析磷酸化片段肽(氨基末端12－61位序列)可以明顯抑制缺失型ClC－3氯通道電流。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明51位絲氨酸是PKC磷酸化作用潛在位點(diǎn)。

PKC參與的信號(hào)通路對(duì)生物體影響廣泛，在膜離子轉(zhuǎn)運(yùn)、機(jī)體代謝、基因表達(dá)、細(xì)胞分化和增殖等起重要調(diào)節(jié)作用［24］。PKC受多種第二信使調(diào)節(jié)，并且有多達(dá)12種同工酶，這就注定以PKC為中心的信號(hào)通路十分復(fù)雜。ClC－3氯通道作為PKC下游的一種效應(yīng)蛋白，可能受不同信號(hào)通路和不同亞型PKC調(diào)節(jié)，所以就不難理解PKC對(duì)ClC－3氯通道調(diào)節(jié)具有顯著差異。

2.4 鈣離子/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶 II(calcium calmodulin kinase II，CaMKII)信號(hào)通路 鈣離子具有十分重要的生理意義，不僅可做為第二信使參與鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶等信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)，同時(shí)可作為某些蛋白的直接調(diào)節(jié)因子起作用，如參與肌纖維細(xì)胞收縮、囊泡分泌等。鈣/鈣調(diào)蛋白可激活信號(hào)通路下游多種效應(yīng)物如質(zhì)膜和肌漿網(wǎng)鈣通道、鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶、磷酸化酶激酶、環(huán)化酶、NO合酶等，各種活化的效應(yīng)物質(zhì)又可作用于下游的效應(yīng)蛋白，共同調(diào)節(jié)細(xì)胞各種生理病理過程。信號(hào)通路中關(guān)鍵激酶CaMKII的底物譜非常廣泛，研究證實(shí)該激酶可以磷酸化ClC－3通道蛋白［25，26］。

Robinson等［27］對(duì)CaMKII調(diào)節(jié)ClC－3進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究，對(duì)tsA、T84、HT29以及平滑肌細(xì)胞研究發(fā)現(xiàn):CaMKII可以激活ClC－3通道，氨基末端109位絲氨酸可能是CaMKII調(diào)控ClC－3通道的作用位點(diǎn)。血小板激活因子(platelet－activating factor，PAF)參與炎癥介質(zhì)引起的腸損傷，Claud等［28］發(fā)現(xiàn)PAF對(duì)腸上皮細(xì)胞具有直接病理作用，PAF可激活ClC－3氯通道引起細(xì)胞內(nèi)酸化繼而細(xì)胞發(fā)生凋亡，PAF激活的氯電流可被鈣螯合劑或CaMKII抑制劑阻斷，說(shuō)明PAF介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡是通過CaMKII激活ClC－3氯通道導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)酸化而引起。

ClC－3氯通道蛋白不僅分布在細(xì)胞膜上，同時(shí)在胞漿和細(xì)胞核內(nèi)都有分布，那么ClC－3蛋白是如何在細(xì)胞內(nèi)移動(dòng)。Huang等［25］在研究 CaMKII對(duì)ClC－3作用時(shí)發(fā)現(xiàn)，提高細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度可以促使ClC－3從胞漿向胞膜移位。目前，鈣和CaMKII對(duì)ClC－3的調(diào)節(jié)機(jī)制研究還不清楚，尚待進(jìn)一步研究。

2.5 SGK信號(hào)通路 血清和糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)蛋白激酶(serum and glucocorticoid－regulated kinase，SGK)是Ser/Thr蛋白激酶，作為多種細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和細(xì)胞磷酸化級(jí)聯(lián)反應(yīng)的一個(gè)功能性交匯點(diǎn)，可通過影響鈉、鉀離子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)多種細(xì)胞容積、細(xì)胞增殖等，其對(duì)快速轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)具有重要作用［29，30］。此外 Wang等［31］報(bào)道 SGK能間接激活ClC－3氯通道從而調(diào)節(jié)細(xì)胞容積。

3 小結(jié)

增殖、分化、凋亡、遷移、分泌等細(xì)胞行為過程中都有細(xì)胞容積改變，而參與細(xì)胞容積調(diào)節(jié)過程具有多種因素如鈉離子、鉀離子、鈣離子、氯離子、細(xì)胞骨架蛋白等。容積激活性氯通道ClC－3調(diào)節(jié)氯離子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，對(duì)細(xì)胞容積調(diào)節(jié)具有重要作用。細(xì)胞容積不斷變化但處于相對(duì)穩(wěn)定狀態(tài)，而細(xì)胞在接受內(nèi)外刺激信號(hào)后，如何通過ClC－3調(diào)節(jié)細(xì)胞容積以適應(yīng)內(nèi)外環(huán)境是研究其容積調(diào)節(jié)作用的關(guān)鍵內(nèi)容。多年研究證實(shí)多種內(nèi)外刺激信號(hào)可通過不同信號(hào)通路激活的蛋白激酶磷酸化ClC－3影響其功能。因此，研究不同蛋白激酶對(duì)ClC－3功能影響并尋找其作用位點(diǎn)，針對(duì)這些作用位點(diǎn)開發(fā)藥物從而阻斷某一信號(hào)通路干預(yù)細(xì)胞特定行為，對(duì)于研究和治療包括高血壓、心臟病、腫瘤等多種疾病具有參考意義。

［1］ Lang F，Busch GL，Ritter M，et al.Functional significance of cell volume regulatory mechanisms［J］.Physiol Rev，1998，78(1):247－306.

［2］ Lambert IH，Hoffmann EK，Pedersen SF.Cell volume regulation:physiology and pathophysiology［J］.Acta Physiol(Oxf)，2008，194(4):255－282.

［3］ Sasaki S，Uchida S，Kawasaki M，et al.ClC family in the kidney［J］.Jpn J Physiol，1994，44(Suppl 2):S3－S8.

［4］ Wang LW，Chen LX，Jacob T.ClC－3 expression in the cell cycle of nasopharyngeal carcinoma cells［J］.Sheng Li Xue Bao，2004，56(2):230－236.

［5］ Wang LW，Chen LX，Jacob T.The role of ClC－3 in volume－activated chloride currents and volume regulation in bovine epithelial cells demonstrated by antisense inhibition［J］.J Physiol，2000，524(Pt 1):63－75.

［6］ Steinmeyer K，Schwappach B，Bens M，et al.Cloning and functional expression of rat CLC－5，a chloride channel related to kidney disease［J］.J Biol Chem，1995，270 (52):31172－31177.

［7］ Menegaz D，Barrientos－Duran A，Kline A，et al.1 α，25(OH)2－Vitamin D3stimulation of secretion via chloride channel activation in Sertoli cells［J］.J Steroid Biochem Mol Biol，2010，119(3－5):127－134.

［8］ Nagasaki M，Ye L，Duan D，et al.Intracellular cyclic AMP inhibits native and recombinant volume－regulated chloride channels from mammalian heart［J］.J Physiol，2000，523(Pt 3):705－717.

［9］ Matsuda JJ，F(xiàn)ilali MS，Volk KA，et al.Overexpression of CLC－3 in HEK293T cells yields novel currents that are pH dependent［J］.Am J Physiol Cell Physiol，2008，294 (1):C251－C262.

［10］ Srinivas SP，Maertens C，Goon LH，et al.Cell volume response to hyposmotic shock and elevated cAMP in bovine trabecular meshwork cells［J］.Exp Eye Res，2004，78(1):15－26.

［11］ Kawano T，Tanaka K，Chi H，et al.Effects of aging on isoflurane－induced and protein kinase A－mediated activation of ATP－sensitive potassium channels in cultured rat aortic vascular smooth muscle cells［J］.J Cardiovasc Pharmacol，2010，56(6):676－685.

［12］ Wu P，Hu YZ.PI3K/Akt/mTOR pathway inhibitors in cancer:a perspective on clinical progress［J］.Curr Med Chem，2010，17(35):4326－4341.

［13］ Wickenden JA，Watson CJ.Key signalling nodes in mammary gland development and cancer.Signalling downstream of PI3 kinase in mammary epithelium:a play in 3 Akts［J］.Breast Cancer Res，2010，12(2):202.

［14］ Voskas D，Ling LS，Woodgett JR.Does GSK－3 provide a shortcut for PI3K activation of Wnt signalling?［J］.F1000 Biol Rep，2010，2:82.

［15］ Tang YB，Liu YJ，Zhou JG，et al.Silence of ClC－3 chloride channel inhibits cell proliferation and the cell cycle via G/S phase arrest in rat basilar arterial smooth muscle cells［J］.Cell Prolif，2008，41(5):775－785.

［16］ Tang YB，Zhou JG，Guan YY.Volume－regulated chloride channels and cerebral vascular remodelling［J］.Clin Exp Pharmacol Physiol，2010，37(2):238－242.

［17］ Kawasaki M，Uchida S，Monkawa T，et al.Cloning and expression of a protein kinase C－regulated chloride channel abundantly expressed in rat brain neuronal cells［J］.Neuron，1994，12(3):597－604.

［18］ Du XY，Sorota S.Protein kinase C stimulates swellinginduced chloride current in canine atrial cells［J］.Pflugers Arch，1999，437(2):227－234.

［19］ Gong W，Xu H，Shimizu T，et al.ClC－3－independent，PKC－dependent activity of volume－sensitive Cl channel in mouse ventricular cardiomyocytes［J］.Cell Physiol Biochem，2004，14(4－6):213－224.

［20］ Duan D，Cowley S，Horowitz B，et al.A serine residue in ClC－3 links phosphorylation－dephosphorylation to chloride channel regulation by cell volume［J］.J Gen Physiol，1999，113(1):57－70.

［21］ Boese SH，Glanville M，Gray MA，et al.The swellingactivated anion conductance in the mouse renal inner medullary collecting duct cell line mIMCD－K2［J］.J Membr Biol，2000，177(1):51－64.

［22］ Do CW，Lu W，Mitchell CH，et al.Inhibition of swelling－activated Cl－currents by functional anti－ClC－3 antibody in native bovine non－pigmented ciliary epithelial cells［J］.Invest Ophthalmol Vis Sci，2005，46(3):948－955.

［23］ Rossow CF，Duan D，Hatton WJ，et al.Functional role of amino terminus in ClC－3 chloride channel regulation by phosphorylation and cell volume［J］.Acta Physiol (Oxf)，2006，187(1－2):5－19.

［24］ 高亞東，鄒進(jìn)晶，鄭君文，等.蛋白激酶C活性下調(diào)對(duì)鈣庫(kù)操縱的鈣通道活性和氣道平滑肌細(xì)胞增殖的作用［J］.中國(guó)病理生理雜志，2010，26(5):876－880.

［25］ Huang P，Liu J，Di A，et al.Regulation of human CLC－3 channels by multifunctional Ca2+/calmodulin－dependent protein kinase［J］.J Biol Chem，2001，276 (23):20093－20100.

［26］ Cuddapah VA，Sontheimer H.Molecular interaction and functional regulation of ClC－3 by Ca2+/calmodulin－dependent protein kinase II(CaMKII)in human malignant glioma［J］.J Biol Chem，2010，285(15):11188－11196.

［27］ Robinson NC，Huang P，Kaetzel MA，et al.Identification of an N－terminal amino acid of the CLC－3 chloride channel critical in phosphorylation－dependent activation of a CaMKII－activated chloride current［J］.J Physiol，2004，556(Pt2):353－368.

［28］ Claud EC，Lu J，Wang XQ，et al.Platelet－activating factor－induced chloride channel activation is associated with intracellular acidosis and apoptosis of intestinal epithelial cells［J］.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol，2008，294(5):G1191－G1200.

［29］ Lang F，Huang DY，Vallon V.SGK，renal function and hypertension［J］.J Nephrol，2010，23(Suppl 16):S124－S129.

［30］ Lang F，Henke G，Embark HM，et al.Regulation of channels by the serum and glucocorticoid－inducible kinaseimplications for transport，excitability and cell proliferation［J］.Cell Physiol Biochem，2003，13(1):41－50.

［31］ Wang GX，McCrudden C，Dai YP，et al.Hypotonic activation of volume－sensitive outwardly rectifying chloride channels in cultured PASMCs is modulated by SGK［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2004，287(2):H533－H544.