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    穴位埋線對非酒精性脂肪性肝病大鼠SREBP-1表達的影響*

    2011-02-06 06:26:06周曉玲侯秋科
    中國中醫(yī)急癥 2011年6期
    關鍵詞:脂質(zhì)膽固醇穴位

    周曉玲 謝 勝 侯秋科

    廣西壯族自治區(qū)柳州市中醫(yī)院(廣西柳州545001)

    非酒精性脂肪肝(NAFLD)是一種肝組織學改變,與酒精性肝?。ˋLD)相類似,但無過量飲酒史的臨床病理綜合征。近年來,發(fā)現(xiàn)通過中醫(yī)外治穴位埋線的方法對治療NAFLD效果明顯。本實驗通過觀察穴位埋線對高脂飲食誘導的大鼠NAFLD及其膽固醇調(diào)控元件結合蛋白-1(SREBP-1)的影響,以探討穴位埋線對高脂飲食誘導的大鼠NAFLD作用及其可能機制,為臨床應用提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物 雄性wistar大鼠40只,清潔級,體質(zhì)量170~200g,由廣西中醫(yī)學院實驗動物中心提供。實驗室室溫 (20±3)℃,分籠喂養(yǎng)。

    1.2 試藥及儀器 肝組織總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)試劑盒為北京福瑞生物工程公司產(chǎn)品。一抗兔抗大鼠SREBP-1多克隆抗體(美國Santa Cruz公司)。二抗羊抗兔IgG-HRP由武漢博士德公司提供。膽固醇及0.3%膽酸鈉購自國藥集團化學試劑有限公司。豬油為市售。普通飼料和高脂飼料(含87.7%普通飼料+2%膽固醇+0.3%膽酸鈉+10%豬油)均購自廣西中醫(yī)學院實驗動物中心(桂檢證字2003A010號)。超敏發(fā)光液由北京普利萊公司提供。

    1.3 分組及造模 大鼠適應性喂養(yǎng)1周后,隨機分為4組:正常對照組、模型組、穴位埋線4周組、穴位埋線8周組,每組8只。模型組、穴位埋線4周組、穴位埋線8周組給予高脂飼料飲食,正常對照組給予普通飼料飲食,自由飲水。

    1.4 穴位埋線治療方法 根據(jù)化痰利濕、活血化瘀的治則,穴位埋線治療組取豐隆、足三里、太沖、三陰交穴[1]。將大鼠置于自制固定器中,取雙側上述穴位,線穿進3號注射針頭內(nèi),將針頭刺入穴位,直刺約5mm,提插得氣后,用針芯抵住羊腸線(針芯由直徑0.1mm、長5mm毫針剪成平頭改成),緩緩退出針管,將羊腸線留在穴內(nèi)。每3日1次,穴位埋線4周組治療4周,穴位埋線8周組治療8周。模型組大鼠亦置入固定器中15min,但不進行治療。

    1.5 標本采集 每組大鼠在治療結束后隔夜禁食12h,稱體質(zhì)量,以10%水合氯醛1mg/kg腹腔內(nèi)注射麻醉,開腹后肉眼觀察肝臟情況,腹主動脈取血,0.5h內(nèi)離心取血清待檢。取肝左葉同一部位1cm×1cm×1cm組織置于細胞裂解液中,勻漿并收集蛋白,-20℃保存。

    1.6 檢測方法 一般情況:觀察大鼠食欲行為、狀態(tài)、體質(zhì)量、毛發(fā)及死亡情況,實驗結束測體質(zhì)量及肝濕質(zhì)量。血清指標測定:測定丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、TG、TC,全部采用全自動生化儀檢測。Western Blot檢測肝組織蛋白SREBP-1的表達:肝左葉同一部位每100mg組織加入400μL MPER蛋白提取試劑,在冰上充分勻漿后,收集勻漿液,10000r/min離心5min,轉移上清。分裝后,取50μL,加入6×蛋白質(zhì)樣品緩沖液10μL混勻,在100℃水浴中煮沸5min,各組取10μL在10%SDS聚丙烯酰胺凝膠上電泳后,電轉至PVDF膜,TTBS洗5min,3次,5%脫脂牛奶封閉30min,分別加兔抗ALP和VDR多克隆抗體(1∶1000)。4℃過夜,TTBS洗 5min,4次,分別與 HRP 標記的二抗羊抗兔IgG (1∶10000)室溫下振蕩孵育 1h,TTBS洗10min,4次,加超敏發(fā)光液反應5min,在暗室中曝光,后在顯影液和定影液中沖洗膠片,顯像后觀察結果。

    1.7 統(tǒng)計學處理 應用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件。計量資料以(x±s)表示,計數(shù)資料比較采用檢驗,組間比較采用單因素方差分析及LSD檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結 果

    2.1 各組一般情況比較 見表1。實驗過程中,穴位埋線4周組大鼠于第6周因肺部感染死亡1只。穴位埋線4周組其余大鼠和其余組大鼠生長發(fā)育良好,無死亡。與正常對照相比較,模型組大鼠肝臟濕質(zhì)量和肝指數(shù)(每100g體質(zhì)量的肝臟濕質(zhì)量)均顯著高于正常對照組(P<0.05)。與模型組相比,穴位埋線 4周組、穴位埋線8周組大鼠體質(zhì)量、肝臟濕質(zhì)量均較模型組有所下降,其中穴位埋線8周組肝指數(shù)與模型組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

    2.2 各組血清學指標比較 見表2。模型組大鼠血清ALT、AST較正常對照組大鼠顯著升高(P<0.01);與模型組相比,穴位埋線4周組、穴位埋線8周組大鼠ALT、AST均有下降趨勢,與模型組比較,差異有統(tǒng)計學意義 (P<0.05)。與正常對照組相比,模型組大鼠血清TC顯著升高(均為P<0.01),與模型組相比,穴位埋線4周組、穴位埋線8周組血清TG、TC均有下降,其中TC顯著下降(P<0.01)。

    表1 各組大鼠體質(zhì)量、肝濕質(zhì)量和肝指數(shù)比較 (±s)

    表1 各組大鼠體質(zhì)量、肝濕質(zhì)量和肝指數(shù)比較 (±s)

    與正常對照組比較,*P<0.05,**P<0.01;與模型組比較,△P <0.05,△△P <0.01。 下同。

    組 別正常對照組模型組穴位埋線4周組穴位埋線8周組n 8878體質(zhì)量(g)473.54±10.66 480.63±11.26 430.45±12.23△424.08±18.03△肝臟濕質(zhì)量(g) 肝指數(shù)12.98±0.30 2.73±0.06 18.56±0.52* 3.66±0.05*13.89±1.03△ 3.27±0.12 12.98±1.85△ 2.97±0.14△

    表2 各組血清學指標比較 (±s)

    表2 各組血清學指標比較 (±s)

    組 別正常對照組模型組穴位埋線4周組穴位埋線8周組n 8878 ALT(U/L)70.31±4.62 123.21±8.56**83.12±10.21△69.21±8.21△AST(U/L)185.12±13.65 279.56±10.23**229.21±15.21△195.52±19.12△TG(mmol/L)0.81±0.08 0.51±0.05**0.28±0.06 0.21±0.08 TC(mmol/L)1.59±0.08 3.98±0.23**2.49±0.31△△2.21±0.27△△

    2.3 肝臟SREBP-1的表達 模型組SREBP-1表達水平明顯高于正常對照組,穴位埋線4周組、穴位埋線8周組SREBP-1蛋白的表達水平均低于模型組,且穴位埋線8周組的蛋白表達低于穴位埋線4周組。見圖1。

    圖1 肝臟SREBP-1蛋白電泳圖

    3 討 論

    SREBPs是一類能與膽固醇調(diào)節(jié)組件1(SRE-1)發(fā)生特異性結合的蛋白[2]。SREBP-1a主要調(diào)控膽固醇和脂肪酸合酶(如乙酰輔酶A羧化酶)以及TG代謝的低密度脂蛋白受體的基因轉錄,SREBP-1c則選擇性調(diào)控脂肪酸、TG以及糖代謝(如葡萄糖激酶)中基因的表達水平[3]。胰島素和類胰島素生長因子Ⅰ也可以通過SREBP-1介導LDL-R啟動子的激活,從而調(diào)節(jié)細胞內(nèi)的膽固醇含量[4]。

    NAFLD發(fā)病機制極為復雜,1998年Day和James提出的“二次打擊”學說已成為解釋該病發(fā)生機制的主要理論[5]。胰島素抵抗(insulin resistance,IR)在NAFLD的形成中發(fā)揮著“一次打擊”的作用,導致肝細胞脂肪變性。相關機制研究表明,胰島素受體底物2(IRS-2)是胰島素在肝中信號轉導的主要介導物,調(diào)控著胰島素敏感性,而核SREBPs能有效地取代和干擾反式作用因子的結合,來抑制下游P13K/Akt通路,從而減少糖原合成[6]。因此,SREBPs能直接下調(diào)IRS-2的轉錄,從而抑制胰島素信號轉導。推測這種分子機制解釋了糖原合成向脂質(zhì)合成的轉移以及IR的形成,而IR可通過增加糖酵解而促進肝細胞內(nèi)脂肪酸的合成,造成肝內(nèi)脂質(zhì)(主要為TG)蓄積而引起NAFLD。Shimomura等成功建立了SREBP-1c在肝臟過度表達的小鼠模型,觀察到這些小鼠出現(xiàn)了脂質(zhì)紊亂、IR和肝脂肪變性[7]。通過轉基因小鼠和基因剔除小鼠的研究發(fā)現(xiàn)SREBP-1c主要與脂肪酸代謝和糖代謝有關[8]。

    已有研究表明,針刺在治療脂肪肝及肝纖維化方面有一定的效果[9]。穴位埋線的埋線過程與針刺過程相似,具有普通針刺療法的作用效果,并具備針刺“靜以留之”的長期作用,類似“埋針”療法。腸線在穴位內(nèi)慢慢軟化、分解、吸收的過程對穴位產(chǎn)生一種柔和而持久的刺激,從而達到慢性疾病長期治療的目的。我們通過大量的前期的臨床工作已發(fā)現(xiàn)穴位埋線對治療非酒精性脂肪肝的治療有效率達92.50%,可通過降低血清瘦素水平、改善胰島素抵抗,增加肝細胞對胰島素的敏感性,從而調(diào)節(jié)血脂代謝,達到治療NAFLD患者的作用[10]。本實驗顯示,與正常組相比,模型組SREBP-1的表達明顯高于正常組。本實驗Western blot結果顯示穴位埋線4周組、穴位埋線8周組的SREBP-1的蛋白表達水平明顯低于對照組。穴位埋線8周又低于4周治療組。初步證明穴位埋線對脂質(zhì)代謝具有時間的量效關系,同時也進一步證明了穴位埋線療法在調(diào)控胰島素抵抗信號通路方面具有重要意義。

    綜上所述,中醫(yī)認為NAFLD的基本病機是脾腎虧虛,而在此體質(zhì)基礎上形成的痰、濕、瘀等病理產(chǎn)物為本病發(fā)病之關鍵,因此我們在選擇穴位進行埋線治療時遵循化痰利濕、活血化瘀的治則。SREBP-1作為調(diào)控胰島素調(diào)節(jié)通路中一個必不可少的元素參與脂質(zhì)的合成,通過穴位埋線治療能減弱SREBP-1的表達,這也許與NAFLD的脂質(zhì)的合成減少有關,調(diào)節(jié)SREBP-l表達可能是治療NAFLD的潛在的靶點。從而這在一定的程度上推斷穴位埋線療法對調(diào)控胰島素調(diào)節(jié)通路各蛋白分子的表達有著潛在作用,也為今后進一步探討NAFLD中西醫(yī)病機的相關性提供可研究的方向。

    [1] 李忠仁.實驗針灸學[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,2003:314.

    [2] Hresko RC, Mueckler M.mTOR.RICTOR is the Ser473 kinase for Akt/protein kinase B in 3T3-L1 adipocytes[J].JBiol Chem,2005,280(49),40406-40416.

    [3] Porstmann T,Santos CR,Griffiths B,etal.SREBP activity is regulated bymTORC1 and contributes to Akt-dependent cell growth[J].CellMetab,2008,8(3):224-236.

    [4] Wullschleger S,Loewith R,Hall M N.TOR signaling in growth and metabolism[J].Cell,2006,124(10):471–484.

    [5] ChalasaniN,DeegMA,Persohn S,etal.Metabolicand anthropometric evaluationofinsulin resistanceinnondiabeticpatientswithnonalcoholic steatohepatitis[J].Am JGastroenterol,2003,98(10):1849-1855.

    [6] Thomas Porstmann, Beatrice Griffiths, Yuen-Li Chung, et al.PKB/Akt induces transcription of enzymes involved in cholesterol and fatty acid biosynthesis via activation of SREBP[J].Oncogene,2005,24(10):6465-6481.

    [7] AhmedMH,ByrneCD.Modulationofsterolregulatoryelementbinding proteins (SREBPs) aspotential treatments fornon-alcoholic fatty liver disease(NAFLD)[J].DrugDiscov Today,2007,12(17-18):740-747.

    [8] Kammoun H L, Chabanon H, Hainault I, etal.GRP78 expression inhibitsinsulinand ER stress-induced SREBP-1cactivation and reduces hepatic steatosisinmice[J].JClin Invest,2009,119(5):1201-1215.

    [9] 田虹,金麗敏.電針艾灸治療單純肥胖性脂肪肝30例臨床觀察[J].針灸臨床雜志,2004,20(12):32-33.

    [10]周曉玲,謝勝.穴位埋線結合強肝消脂飲對非酒精性脂肪肝血清瘦素水平及胰島素抵抗指數(shù)的影響[J].中國中醫(yī)急癥,2010,19(11):1845-1846.

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