腎透明細(xì)胞癌中MMP-10的表達(dá)及臨床意義

韓保健，趙海軍，張?jiān)?/p>

青島市第八人民醫(yī)院泌尿外科，山東青島 266100

腎細(xì)胞癌（RCC）是一種腎臟最常見(jiàn)的惡性腫瘤，以高發(fā)局部侵襲和遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移為特點(diǎn)[1]。對(duì)于晚期和轉(zhuǎn)移的RCC，幾乎沒(méi)有有效的或治愈性的療法。因此，對(duì)RCC進(jìn)展機(jī)制的研究對(duì)于制訂其治療方案是非常重要的。雖然不同的因素與惡性侵襲性有關(guān)，但細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的降解是許多癌的關(guān)鍵和早期的步驟之一?；|(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）會(huì)分解ECM成分，在癌細(xì)胞侵入和轉(zhuǎn)移中具有重要作用[2-3]。

在不同的MMPs中，MMP-2和MMP-9是最多被研究和最重要的因子，它們影響不同癌的惡性程度和生存率[4]。在RCC，有研究者發(fā)現(xiàn)MMP-2和MMP-9的過(guò)度表達(dá)與高侵襲性和預(yù)后不良有關(guān)[5-6]。除了這兩種，MMP-1、-3、-7、-11、-12 和-14也在RCC中過(guò)度表達(dá)[7-8]。MMP-10也稱(chēng)作基質(zhì)降解酶-2，降解ECM的多種成分或間質(zhì)結(jié)締組織和膠原Ⅲ和Ⅳ[9]。有研究者報(bào)道在不同的癌MMP-10的過(guò)度表達(dá)并影響它們的惡性侵襲性[10-11]。然而，目前還沒(méi)有人RCC組織MMP-10表達(dá)的報(bào)道。腎透明細(xì)胞癌（CCRCC）是腎細(xì)胞癌的主要類(lèi)型（60%～85%），因此，我們將對(duì)CCRCC患者進(jìn)行單變量和多變量分析，來(lái)闡明MMP-10表達(dá)的臨床病理的意義和它在腫瘤進(jìn)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1995年 1月～2010年 12月，對(duì)我院收治的 112例CCRCC患者進(jìn)行回顧性分析研究，排除手術(shù)前已經(jīng)進(jìn)行治療的患者。pT分期和分級(jí)通過(guò)組織病理學(xué)驗(yàn)證。分期和分級(jí)基于2002腫瘤-淋巴結(jié)-轉(zhuǎn)移（TNM）分級(jí)，核分級(jí)基于Fuhrman等[12]標(biāo)準(zhǔn)。統(tǒng)計(jì)分析中，腫瘤基于T期分為2組：低期（T1和T2）和高期（T3和 T4），此外，核分級(jí)分為 2 組 1～2級(jí)為低級(jí)，3～4級(jí)為高級(jí)。復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移通過(guò)臨床和X射線照相來(lái)評(píng)定。單獨(dú)一個(gè)病理學(xué)醫(yī)生完成所有病理組織學(xué)檢查。

1.2 免疫組織化學(xué)分析

標(biāo)本石蠟包埋，5 μm切片，脫蠟入水，抗原熱修復(fù)，采用SABC 法染色。 一抗：MMP-10（兔多克隆抗體 1∶500；RnD)，4℃孵育過(guò)夜，依次用生物素化二抗，辣根過(guò)氧化物-卵白素-生物素復(fù)合物孵育，DAB顯色，用磷酸鹽緩沖液替代一抗作為陰性對(duì)照。判斷標(biāo)準(zhǔn)：所有免疫組化染色分析基于腫瘤區(qū)域光鏡結(jié)果，半定量MMP-10免疫染色評(píng)定，染色強(qiáng)度分為（-、+、++、+++、++++），癌細(xì)胞免疫染色（+++）、（++++）為陽(yáng)性染色細(xì)胞，癌細(xì)胞超過(guò)50%為陽(yáng)性，則認(rèn)為MMP-10表達(dá)陽(yáng)性。每張切片取血管密度最高的5個(gè)視野進(jìn)行測(cè)定，所有半定量分析由2位不知臨床特點(diǎn)和生存率數(shù)據(jù)的研究者在不同時(shí)間評(píng)估2次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，χ2檢驗(yàn)用于評(píng)價(jià)MMP-10表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)間的關(guān)系。單變量分析用Kaplan-Meier方法，統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性用log-rank檢驗(yàn)。多變量分析采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

MMP-10主要表達(dá)在細(xì)胞漿（圖1、2），在分析112例免疫染色的CCRCC標(biāo)本后發(fā)現(xiàn)：53例（47.3%）陽(yáng)性，59例（52.7%）陰性，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，MMP-10表達(dá)與pT分期（P=0.004 1）和核分級(jí)（P＜0.001）相關(guān)，筆者未發(fā)現(xiàn)MMP-10的表達(dá)與轉(zhuǎn)移（P=0.215 9）有關(guān)（表1）。多變量分析顯示MMP-10表達(dá)在高pT分期是一個(gè)重要和獨(dú)立的因素。多變量分析應(yīng)用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型（包括分期、核分級(jí)、年齡和MMP-10表達(dá)）顯示MMP-10表達(dá)在CCRCC患者高pT期是一個(gè)重要和獨(dú)立的因素（表2）。

3 討論

在本研究中，筆者用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)了MMP-10在CCRCC中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)MMP-10陽(yáng)性與pT分期、核分級(jí)相關(guān)，與轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。許多有關(guān)MMP-10表達(dá)在不同的惡性腫瘤如食管癌[10]、肺癌[13]和前列腺癌[11]的研究顯示與惡性程度和腫瘤的進(jìn)展有關(guān)。雖然表達(dá)在人肺癌細(xì)胞MMP-10蛋白顯著高于正常肺組織，但其與腫瘤的進(jìn)展包括腫瘤分期和轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)[14]。此外，Kerkela等[15]報(bào)道在皮膚癌MMP-10表達(dá)與惡性侵占性包括侵襲和轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。因此，在實(shí)驗(yàn)中，筆者采用多變量分析研究了MMP-10在RCC高pT期的獨(dú)立的作用。分析顯示MMP-10表達(dá)在腫瘤侵襲中，是一個(gè)重要和獨(dú)立的因素。另外，我們也推測(cè)MMP-10在人CCRCC細(xì)胞侵襲中起重要作用。

本研究顯示MMP-10的表達(dá)與轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)，在多變量分析中不能作為一個(gè)獨(dú)立的因素。轉(zhuǎn)移的過(guò)程非常復(fù)雜，除了與癌細(xì)胞侵襲性有關(guān)外，多種因素參與其中[16]。由于本研究的樣本量相對(duì)較少，其確切機(jī)制需進(jìn)一步探究。以MMPs為靶點(diǎn)的抗癌藥物的研制已經(jīng)開(kāi)始，也得到了一些臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。然而，關(guān)于它們抗癌作用的結(jié)果、生存率的延長(zhǎng)、副作用等還不盡如人意[17]。這種結(jié)果令人失望的一個(gè)原因是藥物對(duì)分期和/或癌癥類(lèi)型的廣譜性。近年來(lái)，在惡性腫瘤的防治上，許多研究者把焦點(diǎn)投向副作用少的特異性的MMP抑制劑[18-19]?；诒狙芯拷Y(jié)果，筆者認(rèn)為MMP-10抑制劑可能會(huì)在CCRCC方面有潛在的作用。

表1 MMP-10表達(dá)和臨床病理特征之間的相互關(guān)系（例）

表2 CCRCC患者原因特異性Cox比例風(fēng)險(xiǎn)分析結(jié)果（n=112）

總之，筆者研究了CCRCC的MMP-10的表達(dá)，通過(guò)單變量和多量的分析，發(fā)現(xiàn)MMP-10表達(dá)與pT分期和核分級(jí)密切相關(guān)。盡管MMP-10在CCRCC中的生物學(xué)作用有待于進(jìn)一步揭示，筆者的結(jié)果提供了有關(guān)MMP-10在CCRCC中的新的資料。

[1]Uzzo RG,Cherullo EE,Myles J,et al.Renal cell carcinoma invading the urinary collecting system：implications for staging[J].J Urol,2002,167(6)：2392-2396.

[2]Egeblad M,Werb Z.New functions for the matrix metalloproteinases in cancer progression[J].Nat Rev Cancer,2002,2(3)：161-174.

[3]Folgueras,AR,Pendas AM,Sanchez LM,et al.Matrix metalloproteinases in cancer：from new functions to improved inhibition strategies[J].Int J Dev Biol,2004,48(5-6)：411-424.

[4]張雪培,申鵬飛,蔣志強(qiáng),等.基質(zhì)金屬蛋白酶-2、9和Ⅳ型膠原在膀胱癌中的表達(dá)及意義[J].中華泌尿外科雜志,2002,23(6)：374.

[5]Cho NH,Shim HS,Rha SY,et al.Increased expression of matrix metalloproteinase 9 correlates with poor prognostic variables in renal cell carcinoma[J].Eur Urol,2003,44(5)：560-566.

[6]唐偉,清島圭二郎,八尾隆史,等.Mmp2、Timp2在人腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義[J].中華泌尿外科雜志,2005,26(3)：184-187.

[7]HagemannT,GunawanB,SchulzM,etal.mRNAexpressionofmatrixmetalloprote ases and their inhibitors differs in subtypes of renal cell carcinomas[J].Eur J Cancer,2001,37(15)：1839-1846.

[8]SumiT,NakataniT,YoshidaH,etal.Expressionofmatrixmetalloproteinases 7 and 2 in human renal cell carcinoma[J].Oncol Rep,2003,10(3)：567-570.

[9]NagaseH,WoessnerJF.Matrixmetalloproteinases[J].JBiolChem,1999,274(31)：21491-21494.

[10]Mathew R,Khanna R,Kumar R,et al.Stromelysin-2 overexpression in humanesophagealsquamouscellcarcinoma：potentialclinicalimplications[J].Cancer Detect Prev,2002,26(3)：222-228.

[11]Riddick AC,Shukla CJ,Pennington CJ,et al.Identification of degradome components associated with prostate cancer progression by expression analysis of human prostatic tissues[J].Br J Cancer,2005,92(2)：2171-2180.

[12]Fuhrman SA,Lasky LC,Limas C.Prognostic significance of morphologic parameters in renal cell carcinoma[J].Am J Surg Pathol,1982,6(7)：655-663.

[13]Cho NH,Hong KP,Hong SH,et al.MMP expression profiling in recurred stage IB lung cancer[J].Oncogene,2004,23(3)：845-851.

[14]GillJH,Kirwan IG,Seargent JM,et al.MMP-10 is overexpressed,proteolyti cally active,and a potential target for therapeutic intervention in human lung carcinomas[J].Neoplasia,2004,6(6)：777-785.

[15]Kerkela E,Ala-aho R,Lohi J,et al.Differential patterns of stromelysin-2(MMP-10)and MT1-MMP(MMP-14)expression in epithelial skin cancers[J].Br J Cancer,2001,84(5)：659-669.

[16]YeatmanTJ,NicolsonGL.Molecularbasisoftumorprogression：mechanisms of organ-specific tumor metastasis[J].Semin Surg Oncol,1993,9(3)：256-263.

[17]Pavlaki M,Zucker S.Matrix metalloproteinase inhibitors(MMPIs)：the beginning of phase I or the termination of phase III clinical trials[J].Cancer Metastasis Rev,2003,22(2-3)：177-203.

[18]Arlt M,Kopitz C,Pennington C,et al.Increase in gelatinase-specificity of matrix metalloproteinase inhibitors correlates with antimetastatic efficacy in a T-cell lymphoma model[J].Cancer Res,2002,62(19)：5543-5550.

[19]Hasegawa S,Koshikawa N,Momiyama N,et al.Matrilysin-specific antisense oligonucleotide inhibits liver metastasis of human colon cancer cells in a nude mouse model[J].Int J Cancer,1998,76(6)：812-816.