早中期強(qiáng)直性脊柱炎患者兩種檢測(cè)HLA-B27方法比較

劉 波，邱 萌

湖北省孝感市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北孝感 432000

強(qiáng)直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是一種以脊柱病變?yōu)橹鞯穆悦庖咝约膊?，病變主要累及骶髂關(guān)節(jié)和周?chē)P(guān)節(jié)，引起脊柱強(qiáng)直和纖維化，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)功能障礙，關(guān)節(jié)畸形，該病的病因至今尚未完全明確。目前我國(guó)大約有400萬(wàn)患者[1]。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，本病是在遺傳因素的基礎(chǔ)上，受到外傷、感染、勞累等因素的刺激而引發(fā)自身免疫性炎癥反應(yīng)。國(guó)內(nèi)外有許多實(shí)驗(yàn)研究證明人類(lèi)白細(xì)胞抗原B27（human leukocyte antigen B27，HLA-B27）表達(dá)陽(yáng)性與AS高度相關(guān)，＞90%的AS患者HLA-B27抗原陽(yáng)性而正常人群只有8%表達(dá)，是對(duì)疑似患者進(jìn)行HLA-B27檢測(cè)成為臨床診斷與鑒別診斷AS的重要輔助手段[2-5]。

2007年9 月～2011年2月筆者對(duì)來(lái)我院就診的早中期疑似AS患者進(jìn)行了HLA-B27的檢測(cè)，采用磁性酶聯(lián)免疫分析試劑盒和流式細(xì)胞儀兩種檢測(cè)方法分別進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)這兩種檢測(cè)方法的敏感性、特異性和適用性進(jìn)行比較和分析，為臨床實(shí)驗(yàn)室選擇合適的HLA-B27檢測(cè)方法提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

361例早中期AS疑似患者均來(lái)源于2007年9月～2011年2月我院門(mén)診和住院患者，其中，男260例，女101例，男女比例約為2.6∶1；年齡6～75歲。所有患者檢測(cè)前均未接受柳氮磺胺嘧啶、甲氨蝶呤和益賽普等藥物的治療。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

參照1984年修訂的紐約標(biāo)準(zhǔn)[6]。臨床標(biāo)準(zhǔn)：①下腰背痛至少持續(xù)3個(gè)月，疼痛隨活動(dòng)改善，但休息不減輕；②腰椎在前后和側(cè)屈方向活動(dòng)受限；③胸廓擴(kuò)展范圍小于同年齡和性別的正常值。放射學(xué)標(biāo)準(zhǔn)：雙側(cè)骶髂關(guān)節(jié)炎Ⅱ～Ⅳ 級(jí)，或單側(cè)骶髂關(guān)節(jié)炎Ⅲ～Ⅳ級(jí)。如果患者符合放射學(xué)標(biāo)準(zhǔn)并分別附加①～③條中的任何1條臨床標(biāo)準(zhǔn)可確診為AS。排除標(biāo)準(zhǔn)：①晚期強(qiáng)直性脊柱炎患者（X線顯示關(guān)節(jié)出現(xiàn)骨性融合）；②惡性腫瘤患者；③妊娠期或哺乳期女性患者；④精神病患者。最后確診AS患者151例，排除AS患者210例。

1.3 標(biāo)本準(zhǔn)備

患者晨起空腹抽取靜脈血4 ml分裝在兩支美國(guó)BD公司專用EDTA抗凝管中，每管約 2 ml，編號(hào)并注明性別、年齡。24 h內(nèi)分別用于磁珠酶聯(lián)免疫分析和流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

1.4 試劑與方法

1.4.1 磁珠酶聯(lián)免疫分析法 采用美國(guó)Goldsign公司的HLAB27抗原磁酶免試劑盒，嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，以國(guó)產(chǎn)KHB st-360酶免疫檢測(cè)儀，在主波長(zhǎng)450 nm、副波長(zhǎng)630 nm下讀取其吸光度值（OD），OD＜0.7判定為結(jié)果陰性，OD≥0.7判定為結(jié)果陽(yáng)性。

1.4.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè) 采用美國(guó)BD公司的FACSCalibur流式細(xì)胞儀，HLA-B27試劑盒采用BD公司專用試劑盒，嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，并采用其專用軟件進(jìn)行樣品分析和結(jié)果計(jì)算，結(jié)果與定界值（decision maker）進(jìn)行比較，大于或等于定界值判斷為陽(yáng)性，否則為陰性。

1.5 數(shù)據(jù)分析方法

敏感性=真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陰性），特異性=真陰性/（真陰性+假陰性），陽(yáng)性預(yù)測(cè)價(jià)值=真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陽(yáng)性），陰性預(yù)測(cè)值=真陰性/（真陰性+假陰性）。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)按要求輸入SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件表格進(jìn)行計(jì)算、繪圖和數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

以臨床確診AS病例為標(biāo)準(zhǔn)，兩種檢測(cè)方法的結(jié)果見(jiàn)表1。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)148例陽(yáng)性患者中有2例磁性酶聯(lián)免疫法檢測(cè)為陰性，其余檢測(cè)結(jié)果相同，兩法結(jié)果符合率為98.0%，兩種檢測(cè)方法比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表1 兩種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果（例）

表2 兩種檢測(cè)方法比較（%）

3 討論

臨床研究顯示，AS主要侵害青壯年，對(duì)青壯年（特別是男性）勞動(dòng)力身體健康的危害很大。由于最初起病隱匿，病程進(jìn)展緩慢，早期癥狀與腰椎間盤(pán)突出癥、骶髂關(guān)節(jié)炎、腰背肌筋膜炎等相似，初發(fā)者在X線片上沒(méi)有骶髂關(guān)節(jié)炎的明確表現(xiàn)，因此在臨床診斷中容易誤診和漏診，延誤患者的早期治療，導(dǎo)致患者出現(xiàn)中、晚期不可逆癥狀，最終發(fā)生關(guān)節(jié)強(qiáng)直甚至致殘。同時(shí)，賴建銘等[7]通過(guò)對(duì)AS家系調(diào)查發(fā)現(xiàn)，HLAB27陽(yáng)性的幼年強(qiáng)直性脊柱炎患者中69%有脊柱關(guān)節(jié)病家族史，其中90%為一級(jí)親屬，說(shuō)明AS有明顯的家族聚集性。AS早期診斷的研究方向，應(yīng)該是盡可能在肯定的放射學(xué)骶髂關(guān)節(jié)炎出現(xiàn)之前進(jìn)行診斷[8]。因此，HLA-B27實(shí)驗(yàn)室篩查對(duì)AS患者的早期診斷和控制住病情的進(jìn)展、減輕畸形、維持和改善功能，具有相當(dāng)重要的意義。

實(shí)驗(yàn)研究已證實(shí)流式細(xì)胞術(shù)是臨床檢測(cè)HLA-B27抗原表達(dá)的理想方法[9-11]。但由于流式細(xì)胞儀和其耗材價(jià)格昂貴，人員需要專門(mén)培訓(xùn)后才能上崗，因而只適合在大型醫(yī)院使用，不適合在基層醫(yī)院推廣應(yīng)用。

磁性酶免疫分析法是近年推出用于檢測(cè)HLA-B27的新方法[12]，利用免疫磁珠技術(shù)和ELISA法相結(jié)合，通過(guò)經(jīng)HLAB27抗體包被的磁珠分離全血中帶有HLA-B27抗原的白細(xì)胞，經(jīng)酶底物液顯色而測(cè)定其結(jié)果。實(shí)驗(yàn)表明，使用磁性酶疫分析法與使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)的結(jié)果符合率很高，兩種方法的陽(yáng)性預(yù)測(cè)價(jià)值和陰性預(yù)測(cè)價(jià)值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，磁性酶免疫分析法還具有較高的敏感性和特異性。同時(shí)由于此法具有操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)時(shí)間短（1 h內(nèi)即可完成）、標(biāo)本用量少（僅需抗凝全血50 μl）、結(jié)果穩(wěn)定客觀易判斷（通過(guò)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀判讀結(jié)果）、不需特殊設(shè)備、影響因素少、不需要細(xì)胞、價(jià)格合理、適合批量測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)，因而對(duì)基層醫(yī)院來(lái)說(shuō)，磁性酶免疫分析法是適合AS患者早期診斷和鑒別診斷的一種實(shí)用而可靠的檢測(cè)方法，具有良好的臨床應(yīng)用前景。

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