HPLC法測(cè)定牛膝膠囊中β-脫皮甾酮的含量

陳玉敏* 曹 紅 水彩紅

（總后衛(wèi)生部藥品儀器檢驗(yàn)所，北京 100071）

牛膝膠囊由從牛膝提取物制成的膠囊劑，具有扶正補(bǔ)益，補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨[1-3]。用于預(yù)防和治療因機(jī)體受到放射物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)損傷引起的白血球下降[4-7]。為了有效控制制劑質(zhì)量，本文建立了HPLC法測(cè)定方中牛膝中β-脫皮甾酮的含量。

1 儀器與試藥

儀器：島津LC-20A高效液相色譜儀。試劑：甲醇為色譜純級(jí)；水為雙重蒸餾水。對(duì)照品：β-脫皮甾酮（批號(hào)：111638-200402中檢所提供）。樣品：牛膝膠囊（批號(hào)100101，100102，100103），自制。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：SHIMADZU VP-ODS（5μm，150×4.6mm）；流動(dòng)相：甲醇-水（40∶60）；檢測(cè)波長：250nm（帶寬4nm）；流速：1.0mL/min；柱溫：40℃。

2.2 對(duì)照品溶液及供試品溶液的制備

對(duì)照品溶液的制備：取β-脫皮甾酮對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lmL含20μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取裝量差異項(xiàng)下的本品適量，研細(xì)，取0.5g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加甲醇25mL，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，以甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 專屬性試驗(yàn)（陰性對(duì)照試驗(yàn)）

陰性樣品的制備：按處方比例組不含牛膝藥材的方，按樣品制備工藝制成陰性對(duì)照的制劑，再按供試品溶液制備方法處理，即得。

按樣品測(cè)定的色譜條件進(jìn)樣，對(duì)照品、樣品、陰性對(duì)照的液相色譜圖1～3如下，陰性對(duì)照無干擾峰。

2.4 線性關(guān)系

取β-脫皮甾酮對(duì)照品制成不同濃度對(duì)照品溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶液10mL，注入高效液相色譜儀，按樣品測(cè)定色譜條件測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算。

回歸方程：Y=1589.9X-2848.9，相關(guān)系數(shù)r=1（n=5）。

結(jié)果表明β-脫皮甾酮在40～400mg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取β-脫皮甾酮對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定，結(jié)果RSD分別為0.05%，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，在室溫條件下，于0、2、4、6、8、10h，測(cè)定含量，β-脫皮甾酮測(cè)定結(jié)果的RSD為0.09%，表明樣品溶液較穩(wěn)定。

圖1 β-脫皮甾酮對(duì)照品HPLC色譜圖

圖2 樣品HPLC色譜圖

圖3 陰性對(duì)照HPLC色譜圖

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取牛膝膠囊（100101），精密稱取6份，平行操作，進(jìn)行液相分析，樣品中β-脫皮甾酮平均含量為：RSD為1.76%，具良好重復(fù)性。

2.8 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收，精密稱取已知含量的牛膝膠囊（100101）0.25g，精確加入相當(dāng)量的β-脫皮甾酮對(duì)照品，依法操作，測(cè)定牛膝膠囊中β-脫皮甾酮含量，計(jì)算回收率，測(cè)定結(jié)果見表1。

表1 樣品中β-脫皮甾酮的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測(cè)定

取牛膝膠囊3批，依法進(jìn)行含量的測(cè)定，β-脫皮甾酮的含量結(jié)果見表2。

表2 牛膝膠囊中β-脫皮甾酮含量測(cè)定結(jié)果

3 討 論

3.1 收集β-脫皮甾酮對(duì)照品及樣品溶液光譜，在250nm處有最大吸收，因此選用250nm為檢測(cè)波長。

3.2 試驗(yàn)選用甲醇、乙醇、無水乙醇作為提取溶媒進(jìn)行比較，提取方法及含量測(cè)定方法相同，以甲醇為提取溶媒含量較高，選擇甲醇作為測(cè)定牛膝中β-脫皮甾酮的溶劑。

3.3 提取方法分別采用超聲提取15、30、45min，熱回流提取30min，測(cè)定方法相同，以超聲提取30min含量較高，選用甲醇作為提取溶媒、超聲提取30min的提取方法作為測(cè)定牛膝中β-脫皮甾酮的方法。

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