c-fos在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及意義*

于新艷 劉漢生

(泰山醫(yī)學(xué)院附屬泰山醫(yī)院婦產(chǎn)科，山東 泰安 271000)

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMT)是育齡期婦女最常見的婦科疾病，發(fā)病率為10%～15%，以子宮內(nèi)膜細(xì)胞異位侵襲性生長為主要特征，是引起女性不孕的原因之一[1]。原癌基因fos可調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化、凋亡及浸潤等生理過程，在EMT發(fā)生發(fā)展中起一定作用，但具體機(jī)制尚未闡明，且兩者間關(guān)系研究，國內(nèi)少有報道。我們采用免疫組織化學(xué)染色法檢測c-fos在正常子宮內(nèi)膜、EMT在位及異位內(nèi)膜中的表達(dá)，并半定量分析c-fos表達(dá)的變化情況，報告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本來源于2008年8月～2009年10月，在泰安市中心醫(yī)院婦科和生殖科就診患者。標(biāo)本采集獲得患者及家屬知情授權(quán)，研究程序符合泰安市中心醫(yī)院人體試驗(yàn)委員會制定的倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。

選擇腹腔鏡手術(shù)的EMT患者，年齡27～40歲，平均(34.4±3.73)歲，術(shù)后病理證實(shí)均為EMT (增生期34份，分泌期20份)，異位內(nèi)膜均從卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫取得。按1985年美國生育學(xué)會修訂的EMT分期標(biāo)準(zhǔn)(r-AFS)，均為Ⅱ～Ⅲ期病例，將EMT病例分為在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜組，兩組各27例；正常對照組：取自因不孕癥來就診的患者，年齡23～40歲，平均(32.6±3.84)歲，正常子宮內(nèi)膜26例(增生期12份，分泌期14份)。

1.2 c-fos的檢測

標(biāo)本經(jīng)常規(guī)固定、包埋、切片(4 μm)，HE染色作月經(jīng)周期分期后，進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色(SP法)，檢測各組標(biāo)本中c-fos蛋白表達(dá)。按兔抗人c-fos多克隆抗體及免疫組織化學(xué)染色SP試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)說明書操作：石蠟切片常規(guī)脫臘、水化、抗原修復(fù)后，3%H2O2室溫15 min，正常山羊血清室溫15 min，一抗(1︰400)4℃過夜，二抗, 37℃15 min，鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶溶液37℃15 min，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、透明、中性樹膠封片。

1.3 結(jié)果判定

采用病理圖像分析系統(tǒng)檢測c-fos表達(dá)情況，染色切片由2名副主任醫(yī)師以上的病理醫(yī)師采用雙盲法進(jìn)行觀測，細(xì)胞呈棕黃色或棕褐色為陽性表達(dá)，鏡下隨機(jī)檢測選擇5個高倍視野，并根據(jù)c-fos表達(dá)強(qiáng)度分為以下4級[2]：陽性細(xì)胞百分率0%為0分，1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，76%～100%為4分；陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度：無染色為0分，淡棕黃色為1分，棕黃色為2分，深棕黃色為3分。將兩者分?jǐn)?shù)相加為組織總分：0分為陰性(-)；1～2分為弱陽性(+)；3～5分為陽性(++)；6～7分為強(qiáng)陽性(+++)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

采用PEMS 3.1統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析：c-fos的表達(dá)水平采用絕對數(shù)和相對數(shù)表示，其在多組間的比較采用Kruskal-wallis 檢驗(yàn)(組間多重比較采用Nemenyi檢驗(yàn))；在不同分期的比較采用Wilcoxon兩樣本比較法，P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HE染色結(jié)果

通過光鏡下觀察，EMT組增生期異位內(nèi)膜呈子宮腔狀或環(huán)形鋸齒狀封閉式結(jié)構(gòu)，有囊腫形成，腺體數(shù)目多，腺體上皮呈柱狀，腺腔大，增生現(xiàn)象明顯，向間質(zhì)生長，呈假腺體改變，間質(zhì)內(nèi)大量炎細(xì)胞浸潤，血管數(shù)目較多(圖1)；分泌期異位內(nèi)膜呈縫隙狀，個別呈環(huán)狀封閉式結(jié)構(gòu)，多無囊腫形成，異位內(nèi)膜極薄，呈萎縮性改變，腺體數(shù)目少，腺腔小，腺上皮呈扁平或矮立方形，未見假腺體改變，間質(zhì)細(xì)胞小而稀疏，并有纖維化傾向，少量炎性細(xì)胞浸潤，血管數(shù)目較少(圖2)。正常對照組內(nèi)膜未見異常。

2.2 c-fos的表達(dá)情況

c-fos主要表達(dá)于正常子宮內(nèi)膜、EMT異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞核中，少量表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞漿。異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜組的c-fos蛋白表達(dá)明顯升高，呈強(qiáng)陽性，與正常對照組比較，兩組具有顯著性差異(P<0.05)；但在位內(nèi)膜與異位內(nèi)膜c-fos表達(dá)率未見明顯差異；詳見表1及圖3～6。c-fos蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織、異位癥在位內(nèi)膜組織及異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)強(qiáng)度均呈現(xiàn)周期性變化，且增生期表達(dá)均明顯高于分泌期，見表2。

表1 c-fos在三組子宮內(nèi)膜的表達(dá)水平

注：Hc=11.997，P=0.003；*P<0.05vs正常組。

表2 子宮內(nèi)膜不同分期c-fos的表達(dá)水平

注：經(jīng)Wilcoxon秩和檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，各內(nèi)膜不同分期c-fos的表達(dá)存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。

圖1 EMT組增生期異位內(nèi)膜(HE×400)

圖2 EMT組分泌期異位內(nèi)膜(HE×400)

圖3 EMT組增生期在位內(nèi)膜(SP×200)

圖4 EMT組增生期異位內(nèi)膜(SP×200)

圖5 EMT組增生期異位內(nèi)膜(SP×200)

圖6 EMT組分泌期異位內(nèi)膜(SP×200)

3 討 論

EMT是指具有生長功能的子宮內(nèi)膜組織出現(xiàn)在子宮腔被覆黏膜以外的身體其他部位所引起的疾病，是不孕癥的一個重要因素，30%～40%EMT患者發(fā)生不孕，而臨床不孕癥有25%～35%由EMT引起[3]。 EMT具有類似惡性腫瘤的侵襲特性，是育齡期婦女最常見的婦科疾病，但其具體侵襲生長機(jī)制尚不明確。

早期原癌基因c-fos是myc基因家族成員，其表達(dá)產(chǎn)物fos定位于細(xì)胞核，通過與ATF蛋白形成異源二聚體組成AP-1轉(zhuǎn)錄因子，參與多種細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄，調(diào)控細(xì)胞癌變、侵襲、增殖、凋亡等生物學(xué)效應(yīng)[4]。Mendoza-Rodriquez等[5]提出c-fos可通過介導(dǎo)性激素作用，促進(jìn)子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞增生及月經(jīng)周期形成 。c-fos主要表達(dá)于正常月經(jīng)周期的增生期腺上皮及腔上皮細(xì)胞[6]，我們實(shí)驗(yàn)中通過免疫組織化學(xué)染色得到類似結(jié)果，即c-fos蛋白主要在子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞及基質(zhì)細(xì)胞核表達(dá)。

正常月經(jīng)周期，c-fos蛋白在增生期子宮內(nèi)膜表達(dá)水平高于分泌期，在分泌晚期表達(dá)水平最低[7]。Hastings等[8]通過動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，c-fos mRNA和蛋白在EMT的在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜均有表達(dá)，且均明顯升高。我們通過檢測正常人子宮內(nèi)膜、EMT在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜，發(fā)現(xiàn)EMT組c-fos蛋白表達(dá)呈強(qiáng)陽性，與正常對照組比較，兩組具有顯著性差異，EMT組在位內(nèi)膜表達(dá)c-fos蛋白的陽性率明顯高于正常對照組，但EMT組在位內(nèi)膜與異位內(nèi)膜c-fos蛋白表達(dá)水平未見明顯差異；正常對照組、EMT在位內(nèi)膜組和異位內(nèi)膜組增生期子宮內(nèi)膜c-fos蛋白表達(dá)水平明顯高于分泌期，符合c-fos介導(dǎo)雌、孕激素促進(jìn)子宮內(nèi)膜生長周期一致[9]。此外，我們發(fā)現(xiàn)在EMT患者中，在位內(nèi)膜與異位內(nèi)膜中的c-fos蛋白表達(dá)呈正相關(guān)性，說明c-fos蛋白可能通過影響子宮內(nèi)膜降解周圍基質(zhì)和生存能力增強(qiáng)，并容易于在位內(nèi)膜脫落，隨月經(jīng)血逆流入腹腔后繼續(xù)存活，并在子宮腔外種植及浸潤周圍組織，參與EMT的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，c-fos在EMT在位及異位內(nèi)膜中的表達(dá)水平均高于正常子宮內(nèi)膜，提示c-fos在EMT發(fā)生發(fā)展中起一定作用，但其確切機(jī)制尚不明確，我們將進(jìn)一步對c-fos參與EMT的機(jī)制進(jìn)行研究。

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