扶正固本膠囊對(duì)“勞倦過度，房室不節(jié)”腎陽虛模型大鼠的影響

蘇 梅，崔 濤，吳德松，徐 芳，趙春梅，楊和金

（云南省藥物研究所天然藥物篩選研究中心，昆明市 650111）

扶正固本膠囊對(duì)“勞倦過度，房室不節(jié)”腎陽虛模型大鼠的影響

蘇 梅＊，崔 濤，吳德松，徐 芳，趙春梅，楊和金

（云南省藥物研究所天然藥物篩選研究中心，昆明市 650111）

目的：研究扶正固本膠囊對(duì)“勞倦過度，房室不節(jié)”腎陽虛模型大鼠的影響。方法：采用“勞倦過度，房室不節(jié)”的方法復(fù)制大鼠腎陽虛模型，灌胃給藥4周后，測定腎陽虛模型大鼠的排尿量、交配能力、性器官和血清中三碘甲腺原氨酸（T3）、四碘甲腺原氨酸（T4）、睪酮（T）、雌二醇（E2）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的變化。結(jié)果：扶正固本膠囊在1.84、0.92g·kg-1的劑量下能使腎陽虛模型大鼠血清中的T3、T4、T水平和SOD活性顯著升高，E2水平、MDA含量顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）；能顯著縮短腎陽虛模型大鼠的交配潛伏期和增加其交配次數(shù)（P＜0.05），其中1.84g·kg-1劑量下大鼠的睪丸指數(shù)顯著增加（P＜0.05）；在1.84、0.92、0.46g·kg-1的劑量下可顯著減少腎陽虛模型大鼠的排尿量。結(jié)論：扶正固本膠囊對(duì)大鼠的腎陽虛癥狀有顯著的改善作用。

扶正固本膠囊；腎陽虛；培元固本；扶正祛邪

扶正固本膠囊是臨床應(yīng)用多年的中藥復(fù)方制劑，具有培元固本、扶正祛邪之功效，主治腎陽不足。臨床用于治療腎陽不足引起的腰膝酸軟、畏寒肢冷、神疲乏力、性欲減退、夜尿頻多等證，療效十分顯著。為了驗(yàn)證該制劑的臨床療效，并將其開發(fā)成中藥新藥，本研究遵循中醫(yī)疲勞-房勞以致腎虛的傳統(tǒng)理論，復(fù)制“勞倦過度，房事不節(jié)”腎陽虛大鼠模型，來觀察本制劑對(duì)腎陽虛大鼠的治療作用，為其成藥開發(fā)和臨床應(yīng)用提供可靠的藥效學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

JJ2000型精密電子天平（常熟雙杰測試儀器廠）；1500型全波長酶標(biāo)儀（芬蘭Labsystems公司）；UV-2501型紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）。

1.2 試藥

扶正固本膠囊（云南省藥物研究所科研管理部提供，批號(hào)：20080528，規(guī)格：0.5g/粒，相當(dāng)于原生藥2g）；桂附地黃丸（九芝堂股份有限公司，批號(hào)：20090133）；苯甲酸雌二醇（E2）注射液（天津金耀氨基酸有限公司，批號(hào)：0905141）；黃體酮注射液（浙江仙琚制藥股份有限公司，批號(hào)：090501）；戊巴比妥鈉（上海潤成生物科技有限公司，批號(hào)：20090428）；羧甲基纖維素鈉（CMC-Na，上海山浦化工有限公司，批號(hào)：20040521）；丙二醛（MDA）測試盒（批號(hào)：20100111）、超氧化物歧化酶（SOD）測試盒（批號(hào)：20100111）由南京建成生物工程研究所提供。

1.3 動(dòng)物

SD大鼠，♂60只，♀120只，體重200～250g，由昆明醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供（動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滇）20050008）。飼養(yǎng)于本所天然藥物篩選研究中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室溫度：20～26℃（日溫差≤4℃）；濕度：40%～70%；換氣次數(shù)：10～20次/h；氣流速度：0.1～0.2m·s-1；噪聲：≤60dB；工作照度：150～300lx，動(dòng)物照度：15～20lx；照明：12∶12h明暗交替。

2 方法

2.1 受試藥物與麻醉劑的制備

2.1.1 扶正固本膠囊溶液的制備 稱取扶正固本膠囊38.60g，置研砵中搗碎，加入0.5%的CMC-Na溶液210mL，制備成濃度為184mg·mL-1的溶液。配好后，再分別從中取出60mL和30mL，分別加0.5%的CMC-Na溶液稀釋至120mL，其各自的濃度為92、46mg·mL-1。

2.1.2 桂附地黃丸溶液的制備 稱取桂附地黃丸44.40g，置研砵中搗碎，加入0.5%的CMC-Na溶液，制備成濃度為0.37mg·mL-1的溶液。

2.1.3 戊巴比妥鈉溶液的制備 稱取戊巴比妥鈉0.72g，溶于210mL生理鹽水中，不間斷攪拌至固體全部溶解后靜置，制備成最終濃度為4mg·mL-1的溶液。

2.2 模型的復(fù)制[1～3]

大鼠自由飲食7d，每只♂鼠與2只動(dòng)情期♀鼠同籠，用來誘導(dǎo)房事不節(jié)?！馐蠛匣\交配前15d，戊巴比妥鈉40mg·kg-1ip麻醉，無菌條件下手術(shù)切除雙側(cè)卵巢，縫合創(chuàng)口。交配前48h，sc苯甲酸E2100ng·kg-1；交配前4h，再次sc黃體酮注射液2.50g·kg-1。♂鼠每天上、下午各游泳1次（水溫20℃），至無力即將下沉?xí)r撈出，以誘導(dǎo)勞倦過度。復(fù)制模型4周。

2.3 分組和給藥

♂大鼠60只，隨機(jī)分為正常（0.5%的CMC-Na溶液）、模型（0.5%的CMC-Na溶液）、桂附地黃丸（3.70g·kg-1）和扶正固本膠囊高、中、低劑量（1.84、0.92、0.46g·kg-1）組。ig給藥，每天1次，連續(xù)30d。

2.4 扶正固本膠囊對(duì)“勞倦過度，房事不節(jié)”大鼠腎陽虛模型的影響[4，5]

2.4.1 扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛大鼠排尿量的影響 ig 28、29、30d后將大鼠放入代謝籠中，自由飲水和進(jìn)食，收集12h的尿液。

2.4.2 扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛大鼠交配能力的影響 ig 30d晚20∶00-22∶00將♂鼠單獨(dú)放入籠中5min，使其適應(yīng)環(huán)境，然后每籠放入1只動(dòng)情期♀鼠，觀察記錄20min內(nèi)♂鼠的撲捉潛伏期、交配潛伏期、撲捉次數(shù)和交配次數(shù)。

2.4.3 扶正固本膠囊對(duì)大鼠血清中三碘甲腺原氨酸（T3）、四碘甲腺原氨酸（T4）、E2、睪酮（T）、MDA含量和SOD活性的影響

ig 31d 后取血分離血清，測定血清中 T3、T4、E2、T、SOD、MDA水平。血清中SOD、MDA的測定參照試劑盒說明書操作，T3、T4、E2、T送云南省第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測。

2.4.4 扶正固本膠囊對(duì)大鼠性器官的影響 取血后對(duì)大鼠行解剖術(shù)，取包皮腺和睪丸、前列腺和精液囊，稱濕重，計(jì)算臟器指數(shù)。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0進(jìn)行單因素方差分析，試驗(yàn)結(jié)果用±s表示。

3 結(jié)果

3.1 扶正固本膠囊對(duì)“勞倦過度，房事不節(jié)”腎陽虛模型大鼠血清中T3、T4的影響

模型組大鼠血清中的T3、T4水平較正常組顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，扶正固本膠囊高劑量組大鼠中血清T3、T4的水平顯著升高（P＜0.05）。結(jié)果提示，扶正固本膠囊對(duì)T3、T4的分泌有調(diào)節(jié)作用，能使腎陽虛大鼠的T3、T4水平恢復(fù)正常，其對(duì)甲狀腺功能的影響略優(yōu)于桂附地黃丸。扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛模型大鼠血清中T3、T4水平的影響見表1。

3.2 扶正固本膠囊對(duì)“勞倦過度，房事不節(jié)”腎陽虛模型大鼠血清中SOD活性、MDA含量的影響

模型組大鼠血清中的SOD活性較正常組顯著減弱（P＜0.05），MDA含量顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，扶正固本膠囊高、中劑量組大鼠血清中SOD活性顯著增強(qiáng)，MDA的含量顯著降低（P＜0.01或P＜0.05）。結(jié)果提示，扶正固本膠囊可提高SOD的活力，降低MDA的含量，其抗氧化能力較桂附地黃丸更顯著。扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛模型大鼠血清中SOD、MDA水平的影響見表2。

表1 扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛模型大鼠血清中T3、T4水平的影響（±s，n＝10）Tab1 Effect of Fuzheng guben capsule on T3and T4in blood serum of rat（s±s，n＝10）

表1 扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛模型大鼠血清中T3、T4水平的影響（±s，n＝10）Tab1 Effect of Fuzheng guben capsule on T3and T4in blood serum of rat（s±s，n＝10）

與正常組比較：＊P＜0.05；與模型組比較：#P＜0.05vs.normal group：＊P＜0.05；vs.model group：#P＜0.05

劑量/g·kg-1組別正常組模型組桂附地黃丸組扶正固本膠囊高劑量組扶正固本膠囊中劑量組扶正固本膠囊低劑量組- -T4/ng·dL-1 0.68±0.080.60±0.08＊0.68±0.04#0.70±0.08#0.64±0.040.62±0.083.701.840.920.46T3/pg·mL-1 1.86±0.221.50±0.23＊1.72±0.671.83±0.32#1.74±0.25#1.61±0.34

表2 扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛模型大鼠血清中SOD、MDA水平的影響（±s，n＝10）Tab2 Effect of Fuzheng guben capsule on SOD and MDA in blood serum of rats（±s，n＝10）

表2 扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛模型大鼠血清中SOD、MDA水平的影響（±s，n＝10）Tab2 Effect of Fuzheng guben capsule on SOD and MDA in blood serum of rats（±s，n＝10）

與正常組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.05，##P＜0.01vs.normal group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.05，##P＜0.01

劑量/g·kg-1組別正常組模型組桂附地黃丸組扶正固本膠囊高劑量組扶正固本膠囊中劑量組扶正固本膠囊低劑量組- -MDA/nmol·mg-1 2.02±0.322.99±0.70＊＊3.00±0.392.13±0.67#2.33±0.57#2.57±0.463.701.840.920.46SOD/U·mg-1 170.00±9.19157.55±8.88＊164.85±4.16168.09±3.55##165.20±4.40#162.40±4.96

3.3 扶正固本膠囊對(duì)“勞倦過度，房事不節(jié)”腎陽虛模型大鼠血清中E2、T水平的影響

模型組大鼠血清中的E2水平較正常組顯著升高（P＜0.05），T水平顯著降低（P＜0.05）。與模型組比較，扶正固本膠囊高劑量組大鼠血清中E2顯著降低（P＜0.01），T水平顯著升高（P＜0.05）。結(jié)果提示，扶正固本膠囊能糾正腎陽虛大鼠的性激素分泌紊亂，其作用大于桂附地黃丸。扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛模型大鼠血清中T、E2水平的影響見表3。

表3 扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛模型大鼠血清中E2、T水平的影響（±s，n＝10）Tab3 Effect of Fuzheng guben capsule on E2and T in blood serum of rat（s±s，n＝10）

表3 扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛模型大鼠血清中E2、T水平的影響（±s，n＝10）Tab3 Effect of Fuzheng guben capsule on E2and T in blood serum of rat（s±s，n＝10）

與正常組比較：＊P＜0.05；與模型組比較：#P＜0.05，##P＜0.01vs.normal group：＊P＜0.05；vs.model group：#P＜0.05，##P＜0.01

劑量/g·kg-1組別正常組模型組桂附地黃丸組扶正固本膠囊高劑量組扶正固本膠囊中劑量組扶正固本膠囊低劑量組- -T/ng·dL-1 10.05±2.366.73±2.50＊8.36±2.569.84±3.56#7.89±2.627.73±2.223.701.840.920.46E2/pg·mL-1 55.60±11.12102.90±44.32＊98.90±43.7052.70±20.44##68.10±21.27#92.20±31.62

3.4 扶正固本膠囊對(duì)“勞倦過度，房事不節(jié)”腎陽虛模型大鼠性器官的影響

模型組大鼠包皮腺指數(shù)、睪丸指數(shù)和前列腺指數(shù)與正常組比較均無顯著變化（P＞0.05）。與模型組比較，扶正固本膠囊高劑量組大鼠睪丸指數(shù)顯著增加（P＜0.05）。結(jié)果提示扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛大鼠的性功能有一定的增強(qiáng)作用。扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛模型大鼠性器官的影響見表4。

表4 扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛模型大鼠性器官的影響（±s，n＝10）Tab4 Effect of Fuzheng guben capsule on sexual organ of rat（s±s，n＝10）

表4 扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛模型大鼠性器官的影響（±s，n＝10）Tab4 Effect of Fuzheng guben capsule on sexual organ of rat（s±s，n＝10）

與模型組比較：＊P＜0.05vs.model group：＊P＜0.05

前列腺指數(shù)7.02±0.837.69±0.917.43±1.097.56±0.987.68±1.117.44±1.12劑量/g·kg-1組別正常組模型組桂附地黃丸組扶正固本膠囊高劑量組扶正固本膠囊中劑量組扶正固本膠囊低劑量組- -3.701.840.920.46包皮腺指數(shù)0.32±0.080.40±0.100.38±0.110.40±0.060.41±0.100.39±0.07睪丸指數(shù)7.01±0.997.13±0.537.24±1.207.96±0.77＊7.42±1.737.29±1.00

3.5 扶正固本膠囊對(duì)“勞倦過度，房事不節(jié)”腎陽虛大鼠體重和排尿量的影響

模型組大鼠ig 28、29、30d的排尿量較正常組顯著升高（P＜0.01），而扶正固本膠囊組大鼠排尿量明顯減少。結(jié)果提示，扶正固本膠囊能使腎陽虛動(dòng)物尿量頻多的現(xiàn)象得以改善，其作用與桂附地黃丸相當(dāng)。扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛模型大鼠排尿量的影響見圖1。

圖1 扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛模型大鼠排尿量的影響（±s，n＝10）Fig1 Effect of Fuzheng guben capsule on urinary output of rat（s±s，n＝10）

3.6 扶正固本膠囊對(duì)“勞倦過度，房事不節(jié)”腎陽虛模型大鼠交配能力的影響

與正常組比較，模型組大鼠的撲捉潛伏期延長，撲捉次數(shù)顯著減少，交配潛伏期顯著延長，交配次數(shù)顯著減少（P＜0.01或P＜0.05）。與模型組比較，扶正固本膠囊高、中劑量組大鼠交配潛伏期顯著縮短（P＜0.05），交配次數(shù)顯著增加（P＜0.05）。結(jié)果提示，扶正固本膠囊可提高腎陽虛大鼠的交配能力，其作用明顯優(yōu)于桂附地黃丸。扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛模型大鼠交配能力的影響見表5。

4 討論

中醫(yī)腎陽虛是指腎陽虧虛所表現(xiàn)出的證候，本證以腰膝酸軟、性欲減退、夜尿頻多與虛寒癥狀共見為中醫(yī)辨證的主要依據(jù)[6]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，下丘腦-垂體-靶腺（腎上腺、甲狀腺、性腺）軸的功能性紊亂是腎陽虛證的主要病理學(xué)基礎(chǔ)，這三個(gè)軸中的一個(gè)或幾個(gè)系統(tǒng)出現(xiàn)功能障礙時(shí)都可能引起腎陽虛證[7]。正常人血液中T3、T4、T、E2等的含量在“下丘腦-垂體-甲狀腺軸、性腺軸系統(tǒng)”的調(diào)節(jié)下既不會(huì)增加，也不會(huì)減少，始終保持在一個(gè)相對(duì)恒定的水平上[8]，但當(dāng)“下丘腦-垂體-甲狀腺軸、性腺軸”出現(xiàn)功能障礙時(shí)，T3、T4、T、E2的分泌量就會(huì)發(fā)生紊亂。扶正固本膠囊是在臨床上應(yīng)用多年的中藥復(fù)方制劑（是本單位預(yù)申報(bào)的六類新藥，組方藥物暫屬保密階段），具有培元固本、扶正祛邪之功效，臨床用于治療腎陽不足引起的腰膝酸軟、畏寒肢冷、神疲乏力、性欲減退、夜尿頻多等證療效顯著。

表5 扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛模型大鼠交配能力的影響（±s，n＝10）Tab5 Effect of Fuzheng guben capsule on copulation capability of rat（s±s，n＝10）

表5 扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛模型大鼠交配能力的影響（±s，n＝10）Tab5 Effect of Fuzheng guben capsule on copulation capability of rat（s±s，n＝10）

與正常組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.05，##P＜0.01vs.normal group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.05，##P＜0.01

劑量/g·kg-1組別正常組模型組桂附地黃丸組扶正固本膠囊高劑量組扶正固本膠囊中劑量組扶正固本膠囊低劑量組--交配次數(shù)8.42±1.971.36±3.04＊＊3.09±1.415.20±1.96#4.16±1.51#2.73±1.943.701.840.920.46撲捉潛伏期/s 1.95±1.229.85±4.24＊＊8.57±3.463.87±1.88#5.60±2.98##7.79±3.99撲捉次數(shù)8.33±3.633.10±5.10＊3.18±1.076.80±2.865.54±2.753.09±2.86交配潛伏期/s 11.59±2.2317.85±5.30＊＊16.20±3.1812.04±3.99#13.18±3.48#15.35±4.13

本研究遵循中醫(yī)腎陽虛理論，建立“勞倦過度，房室不節(jié)”腎陽虛大鼠模型，來觀察扶正固本膠囊對(duì)腎陽虛大鼠的治療作用。結(jié)果顯示，扶正固本膠囊能使腎陽虛大鼠血清中的T3、T4、SOD、T水平顯著升高，E2、MDA水平顯著降低；其中ig 1.84g·kg-1劑量的大鼠睪丸指數(shù)顯著增加；對(duì)腎陽虛大鼠的性功能低下和多尿現(xiàn)象也有明顯的改善作用。以上結(jié)果提示，扶正固本膠囊可能是通過修復(fù)和改善大鼠受損的下丘腦-垂體-甲狀腺軸（性腺軸）系統(tǒng)和提高機(jī)體清除自由基能力2種方式來發(fā)揮對(duì)腎陽虛治療作用的。

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Effect of Fuzheng Guben Capsule on Rats with Kidney Yang Deficiency Symptom Caused by Overstrain and Intemperate Sexual Intercourse

SU Mei，CUI Tao，WU De-song，XU Fang，ZHAO Chun-mei，YANG He-jin
（Nature Medicine Screening Research Center，Yunnan Institute of Materia Medica，Kunming 650111，China）

OBJECTIVE：To study the effect of Fuzheng guben capsule（FGC）on rats with kidney yang deficiency symptom caused by overstrain and intemperate sexual intercourse.METHODS：Kidney yang deficiency model was simulated by mean of overstrain and intemperate sexual intercourse.After 4weeks of intragastric administration，the urinary output，capability of copulation，sexual organ and triiodothyronine（T3），thyroxine（T4），testosterone（T），estradiol（E2），superoxide dismutase（SOD）and malondialdehyde（MDA）in blood serum were determined.RESULTS：T3，T4，SOD and T in serum were significantly increased while E2and MDA were significantly decreased in dose of 1.84g·kg-1and 0.92g·kg-1（P＜0.05orP＜0.01）.The incubation period of copulation was significantly shortened while the number of copulation was significantly increased（P＜0.05）.Testis index was significantly higher in dose of 1.84g·kg-1（P＜0.05）.Urinary output was significantly reduced in dose of 1.84g·kg-1，0.92g·kg-1and 0.46g·kg-1.CONCLUSION：Fuzheng guben capsule could improve significantly kidney yang deficiency symptom of rats.

Fuzheng guben capsule；Kidney yang deficiency symptom；Support healthy energy；Supporting healthy energy to eliminate evils

R285；R97

A

1001-0408（2011）19-1754-03

＊高級(jí)工程師，碩士。研究方向：中藥藥理學(xué)。電話：0871-6220009-8301。E-mail：smkms@126.com

2010-09-12

2011-01-17）

·中藥工藝與制劑·