紫外分光光度法測定毛茛中總皂苷的含量

秦汝蘭，孟慶雙

(通化師范學(xué)院 制藥與食品科學(xué)系，吉林 通化134002)

毛茛(RanunculusjaponicusThunb.)是毛茛科(Ranunculaceae)毛茛屬(Ranunculus)多年生草本植物，在長白山地區(qū)廣泛分布，具有消炎、鎮(zhèn)痛、抗菌等多種活性.在民間廣泛用于治療黃疸、結(jié)核、肝炎等病[1].近年來，對(duì)毛茛化學(xué)成分的研究顯示，其全草含有內(nèi)酯類、黃酮類、皂苷類及生物堿類等化合物[2].目前已從毛茛屬植物中得到的皂苷其苷元均為齊墩果酸型三萜皂苷，有研究顯示，毛茛總皂苷具有顯著的抗心肌肥大作用[3].但有關(guān)毛茛總皂苷含量測定方面的研究未見報(bào)道，因此本試驗(yàn)以齊墩果酸為對(duì)照品，通過紫外分光光度法測定毛茛總皂苷的含量，以期為合理開發(fā)利用長白山區(qū)藥用植物毛茛提供參考性依據(jù).

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料、儀器與試劑

毛茛采于通化師范學(xué)院后山，經(jīng)通化師范學(xué)院于俊林教授鑒定；齊墩果酸對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所批號(hào)：110709-200505)；UV-1700紫外分光光度計(jì)(蘇州市萊頓科學(xué)儀器有限公司)；AB256-S/10萬電子天平(賽多利斯丹佛TP系列分析天平)；正丁醇、甲醇等試劑均為國產(chǎn)分析純.

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 對(duì)照品溶液的制備

準(zhǔn)確稱取105℃干燥至恒重的齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品0.0060g，置于25ml容量瓶中，甲醇定容，搖勻，配制成0.00024g·ml-1的對(duì)照品溶液.

1.2.2 供試品溶液制備[4]

準(zhǔn)確稱取毛茛粉末約3g，置125ml圓底燒瓶中，加入95%乙醇20ml，連續(xù)回流提取3h，過濾，濾液濃縮，用95%乙醇定容至50ml容量瓶中，搖勻.精密量取20ml置蒸發(fā)皿中揮散溶劑，殘?jiān)?0ml蒸餾水溶解，用水飽和的正丁醇振搖萃取三次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干.殘?jiān)由倭考状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至50ml容量瓶中定容，搖勻.再精密吸取1ml溶液至100ml容量瓶中，甲醇定容，搖勻，作為供試品溶液.

1.2.3 檢測波長的選擇

將對(duì)照品溶液在200～600nm進(jìn)行掃描，在205nm處有最大吸收波長，故選擇205nm為檢測波長.

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取對(duì)照品溶液0.05、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml分別置于5ml容量瓶中，甲醇定容，配置成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，從中各吸取4ml置于比色皿中，在205nm波長處測定吸光度值.

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得到回歸方程Y=78.673X-0.0458，r=0.9997，表明齊墩果酸對(duì)照品在0.0024-0.0480g·ml-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系.

2.2 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液4ml于比色皿中，測定吸光度值，連續(xù)5次，結(jié)果RSD為0.077%，表明儀器精密度良好.

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

稱取毛茛粉末約3g，按“1.2.1”項(xiàng)下方法制備毛茛總皂苷提取液，分別在0，1，3，5，7h測定吸光度，結(jié)果RSD為0.103%，表明供試品溶液在7h內(nèi)有良好的穩(wěn)定性.

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

稱取毛茛粉末約3g，6份，按“1.2.1”項(xiàng)下方法制備毛茛總皂苷提取液，分別取4ml于比色皿中，測定吸光度值結(jié)果RSD為1.31%，表明本方法重現(xiàn)性良好.

表1 回收率試驗(yàn)(n=6)

2.5 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的毛茛粉末0.5g，6份，分別準(zhǔn)確加入一定量的齊墩果酸對(duì)照品，得出平均回收率為99.10%，RSD為0.98%，表明測定方法穩(wěn)定可靠，結(jié)果見表1.

2.6 樣品含量測定

準(zhǔn)確量取“1.2.2”項(xiàng)下供試品溶液4ml置比色皿中，平行三次，測定其吸光度值，根據(jù)回歸方程，計(jì)算得到毛茛總皂苷含量為4%.

3 討論

本試驗(yàn)曾選用了超聲提取法、回流提取法、浸漬法等提取手段提取毛茛總皂苷，但得率均較低，分析原因可能是藥材在溶劑中時(shí)間較短，不足以使總皂苷完全溶出，因此本試驗(yàn)提取方法最終定為連續(xù)回流提取法，得到的毛茛總皂苷含量較高為4%，本方法結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、得率高，可作為毛茛總皂苷含量的測定方法.

長白山區(qū)野生毛茛資源極為豐富，因此，本試驗(yàn)為今后毛茛藥材抗癌等新的藥理作用的開發(fā)以及資源的充分利用提供了有利依據(jù).

參考文獻(xiàn)：

[1]江蘇新醫(yī)學(xué)院.最新中藥大辭典(一冊(cè))[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2005：437-438.

[2]鄭威，周長新，張水利,等.毛茛化學(xué)成分的研究[J].中國中藥雜志，2006，31(11)：892-894.

[3]王榕樂.毛茛化學(xué)成分及毛茛總苷的藥理學(xué)研究[D].廣州：廣東藥學(xué)院，2007.

[4]萬德光，裴瑾，唐遠(yuǎn).分光光度法測定威靈仙中總皂苷的含量[J].成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，30(3)：52-53.