力竭運(yùn)動(dòng)后大鼠大腦皮質(zhì)結(jié)構(gòu)與NGF、TrkA動(dòng)態(tài)變化的研究

楊澎湃

(成都體育學(xué)院，四川 成都 610041)

力竭運(yùn)動(dòng)后大鼠大腦皮質(zhì)結(jié)構(gòu)與NGF、TrkA動(dòng)態(tài)變化的研究

楊澎湃

(成都體育學(xué)院，四川 成都 610041)

目的:探討SD雄性大鼠在一次性力竭運(yùn)動(dòng)后，大腦皮質(zhì)微結(jié)構(gòu)和超微結(jié)構(gòu)的形態(tài)改變與神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF、受體TrkA的動(dòng)態(tài)變化關(guān)系。方法:隨機(jī)將大鼠分為對(duì)照組(C組)、一次性力竭游泳運(yùn)動(dòng)后即刻組(E1)、12h組(E2)、24h組(E3)、48h組(E4)，灌注定位取出大腦皮質(zhì)，運(yùn)用HE染色、鈾鉛雙染，在光、電鏡下觀察大腦皮質(zhì)結(jié)構(gòu)變化，運(yùn)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)大腦皮質(zhì)中NGF和TrkA表達(dá)變化。結(jié)果:NGF、TrkA表達(dá)水平較C組顯著性上升(P＜0.05);E2組的NGF、TrkA的表達(dá)水平較E1組下調(diào)，其中TrkA的表達(dá)下調(diào)顯著(P＜0.05);NGF、TrkA的表達(dá)上升最為顯著，較C組(P＜0.01);E4組繼續(xù)維持著高表達(dá)，較C組(P＜0.01)。結(jié)論:一次性力竭運(yùn)動(dòng)后大腦皮質(zhì)結(jié)構(gòu)的損傷和重塑與NGF、TrkA動(dòng)態(tài)表達(dá)具有一定的聯(lián)系性。

大腦皮質(zhì);力竭運(yùn)動(dòng);NGF;TrkA

目前，疲勞消除的研究既是運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一大熱點(diǎn)，也是運(yùn)動(dòng)實(shí)踐中亟待解決的一大難點(diǎn)。而一次性力竭運(yùn)動(dòng)是指動(dòng)物或人進(jìn)行運(yùn)動(dòng)直到再也不能運(yùn)動(dòng)為止，肌肉或器官完全不能維持運(yùn)動(dòng)狀態(tài)，是疲勞不斷發(fā)展的最終階段［1］。力竭運(yùn)動(dòng)致使的中樞性疲勞對(duì)大腦皮質(zhì)微結(jié)構(gòu)和超微結(jié)構(gòu)起著損傷性的改變，其損傷后的修復(fù)可能與神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子有關(guān)。神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族成員之一，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、損傷修復(fù)及維持正常功能起著十分重要的作用，NGF的高親和力受體TrkA被公認(rèn)為是NGF的功能性受體，是啟動(dòng)傳遞NGF生物效應(yīng)的信息物質(zhì)，故NGF和TrkA兩者共同對(duì)維持損傷神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)、促進(jìn)神經(jīng)生長(zhǎng)和修復(fù)起著重要的作用。就目前查閱的國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)缺血性再灌注對(duì)NGF、TrkA表達(dá)變化的影響報(bào)道較多，而涉及到運(yùn)動(dòng)或運(yùn)動(dòng)性疲勞對(duì)NGF、TrkA的影響報(bào)道較少，僅顧麗燕等人研究報(bào)道SD大鼠長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)4周以上，腦組織NGF水平提高［2］。由于力竭運(yùn)動(dòng)引起的腦部缺血現(xiàn)象不完全類似于缺血性再灌注的缺血改變，同時(shí)疲勞產(chǎn)生的機(jī)制較為復(fù)雜，故本研究旨在觀察大鼠一次性力竭性游泳運(yùn)動(dòng)后大腦皮質(zhì)結(jié)構(gòu)的變化及其與NGF、TrkA表達(dá)動(dòng)態(tài)變化的關(guān)系，進(jìn)而探討NGF、TrkA表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化與運(yùn)動(dòng)性中樞疲勞的關(guān)系，為運(yùn)動(dòng)性中樞疲勞的產(chǎn)生與消除機(jī)制提供神經(jīng)生物學(xué)依據(jù)，為科學(xué)系統(tǒng)的運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練提供基礎(chǔ)理論。

1 材料與方法

1.1 材料

成年雄性SPF級(jí)的SD大鼠50只，體重200± 10g，由四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。兔抗NGF多克隆抗體(Chemicon)，兔抗TrkA多克隆抗體(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 分組 將SD大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組(C組、n=10)和力竭運(yùn)動(dòng)組(E組，n=40)。其中又將力竭運(yùn)動(dòng)組分為一次性力竭游泳后即刻組(E1組，n= 10)、12h組(E2組，n=10)、24h組(E3組，n=10)和48h組(E4組，n=10)。C組常規(guī)喂養(yǎng)，E組前3天進(jìn)行無(wú)負(fù)重10min適應(yīng)性游泳，隨后和C組一樣常規(guī)喂養(yǎng)。1周后，進(jìn)行一次性力竭游泳運(yùn)動(dòng)。

1.2.2 模型制作 一次性力竭游泳運(yùn)動(dòng):采用驅(qū)趕法使大鼠一次性負(fù)重游泳至力竭，負(fù)重量為大鼠自身體重的5%，游泳池采用無(wú)色透明玻璃缸，體積150cm× 40cm×80cm，水溫32±1℃，水深60cm。每次實(shí)驗(yàn)前均重新?lián)Q水，并靜置12h。力竭標(biāo)準(zhǔn):1)大鼠沉入水下無(wú)法返回水面超過(guò)10s;2)大鼠協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)消失，在水中無(wú)方向性地亂竄，雖未達(dá)到10s亦定為力竭。

1.2.3 灌注取材 各組取出8只用于光鏡取材。分別于力竭運(yùn)動(dòng)后的即刻、12h、24h、48h，將大鼠按2.3 ml/kg體重腹腔注射2%的戊巴比妥鈉麻醉，待大鼠不能動(dòng)彈后，灌注取材，按L.J.Pellgrino鼠腦立體定位圖譜迅速取出大腦皮質(zhì)，浸泡于10%甲醛溶液中。電鏡取材各組為2只，與光鏡取材的區(qū)別在于用37℃生理鹽水200 mL灌注后，繼續(xù)用4%戊二醛灌注，按L.J.Pellgrino鼠腦立體定位圖譜迅速取出大腦皮質(zhì)，浸泡于3%戊二醛固定液中。

1.2.4 光、電鏡制備 10%中性甲醛固定24h，酒精梯度脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，在視交叉前后連續(xù)制作腦部5um冠狀切片，常規(guī)HE染色，用于光鏡觀察。3%戊二醛固定4h，0.01MPB沖洗5×3，1%鋨酸后固定1.5h，PBS沖洗5×3，丙酮梯度脫水，EPON812浸透及包埋，常規(guī)制作超薄切片鈾、鉛染色，用于日H－600IV型透射電鏡觀察。

1.2.5 免疫組化 石蠟切片經(jīng)脫蠟、水化，3%H2O2甲醇抑制內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，1∶20正常山羊血清封閉非特異性的結(jié)合位點(diǎn)，分別滴加一抗NGF單克隆抗體(1:50)和NGFR單克隆抗體(1:50)，4℃過(guò)液;加二抗羊抗兔抗體與配抗體用PBS以1:200體積比配制，37℃孵箱中40min;加三抗SPA鏈親合素與配抗體用PBS以1:200體積比配制，37℃孵箱中30min。DABH2O2顯色液顯色，蘇木紫復(fù)染。陰性對(duì)照采用正常山羊血清替代第一抗體進(jìn)行。

1.2.6 觀察與統(tǒng)計(jì)方法 采用Version3.0圖像采集分析系統(tǒng)，在相同的視野下，分別對(duì)相鄰切片的NGF、TrkA免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值進(jìn)行測(cè)定。數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS 17·0系統(tǒng)處理。計(jì)量資料數(shù)據(jù)用x±s表示，兩組間比較用t檢驗(yàn)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 各組HE染色微結(jié)構(gòu)觀察

各組經(jīng)HE染色微結(jié)構(gòu)觀察(×400)(圖略)發(fā)現(xiàn)，C組結(jié)構(gòu):神經(jīng)元密集、排列整齊、神經(jīng)元胞漿豐富、淡染、胞核居中、著色均勻?yàn)榈{(lán)色，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，排列緊密，胞漿無(wú)紅染，細(xì)胞周圍間隙致密無(wú)水腫;E1組結(jié)構(gòu):神經(jīng)纖維排列紊亂，多數(shù)神經(jīng)元細(xì)胞染色加深，細(xì)胞間質(zhì)疏松，出現(xiàn)空泡;E2組結(jié)構(gòu)，神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)膠質(zhì)細(xì)胞、微血管周隙均增寬、排列松散、紊亂、數(shù)量減少，神經(jīng)纖維網(wǎng)疏松，呈海綿狀或空泡狀，神經(jīng)元胞漿空泡形成，核固縮均質(zhì)化;E3組結(jié)構(gòu)，神經(jīng)元與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞排列較為紊亂，神經(jīng)纖維網(wǎng)部分呈空泡狀;神經(jīng)元胞漿繼續(xù)空泡化，核固縮均質(zhì)化;E4組結(jié)構(gòu)，神經(jīng)元胞漿空泡化現(xiàn)象開始減少，微血管增多，細(xì)胞周圍間隙變窄，神經(jīng)纖維數(shù)量較為增加。

2.2 NGF免疫組化微結(jié)構(gòu)觀察

各組經(jīng)NGF免疫組化微結(jié)構(gòu)觀察×400(圖略)發(fā)現(xiàn):C組極少數(shù)神經(jīng)細(xì)胞呈散在的陽(yáng)性反應(yīng)，主要是胞漿呈弱陽(yáng)性;E1組陽(yáng)性表達(dá)較對(duì)照組明顯上升，大部分細(xì)胞胞核、胞漿呈棕黃色，胞體較對(duì)照組大;E2組陽(yáng)性表達(dá)較為明顯;E3組陽(yáng)性表達(dá)最為明顯，可見大多數(shù)細(xì)胞胞核、胞漿呈棕黃色，胞體較大;E4陽(yáng)性表達(dá)水平有所下降，大部分細(xì)胞主要是胞漿表達(dá)，細(xì)胞核表達(dá)較不明顯。

2.3 TrkA免疫組化微結(jié)構(gòu)觀察

各組經(jīng)TrkA免疫組化微結(jié)構(gòu)觀察×400(圖略)發(fā)現(xiàn)C組陽(yáng)性表達(dá)，極少數(shù)神經(jīng)細(xì)胞的胞膜和胞核呈弱陽(yáng)性表達(dá);E1組陽(yáng)性表達(dá)較對(duì)照組明顯上升，表達(dá)主要位于細(xì)胞膜上和膜相鄰的胞漿部位，呈棕黃色;E2組陽(yáng)性表達(dá)較為明顯，胞核、胞膜、胞漿都有表達(dá);E3組陽(yáng)性表達(dá)最為明顯，可見大多數(shù)神經(jīng)細(xì)胞胞膜、胞核都有表達(dá)，但胞漿少有表達(dá);E4組陽(yáng)性表達(dá)水平有所下降，表達(dá)位于胞膜、胞核上。

2.4 電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果

各組經(jīng)電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)如下:

圖1 C組神經(jīng)元和血管電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察

圖2 E1組神經(jīng)元和血管電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察

圖3 E2組神經(jīng)元和血管電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察

圖4 E3組神經(jīng)元電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察

圖5 E4組神經(jīng)元電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察

2.5 大腦皮質(zhì)NGF和TrkA的陽(yáng)性表達(dá)

結(jié)果顯示:力竭運(yùn)動(dòng)后，大腦皮質(zhì)的GF和TrkA表達(dá)均增高，與對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。NGF和TrkA的表達(dá)在即刻后升高，12h后有所下降，其中以TrkA下降較為明顯，與即刻組比較(P＜0.05)。24hNGF和TrkA的陽(yáng)性表達(dá)達(dá)到高峰，與對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。48h表達(dá)開始下降。

表1 一次性力竭運(yùn)動(dòng)后NGF和TrkA陽(yáng)性表達(dá)的變化

2.6 大腦皮質(zhì)NGF和TrkA的相關(guān)性表達(dá)

結(jié)果顯示:力竭運(yùn)動(dòng)后的即刻，大腦皮質(zhì)的NGF和TrkA表達(dá)高度正相關(guān)。

表2 一次性力竭運(yùn)動(dòng)后NGF和TrkA陽(yáng)性表達(dá)相關(guān)性的變化

3 討論

有報(bào)道認(rèn)為對(duì)缺血敏感的區(qū)域是海馬、大腦皮質(zhì)及小腦蒲肯野細(xì)胞，其中大腦皮質(zhì)對(duì)腦缺血的耐受性最差，最易受到缺血性的損傷［3］。一次性力竭運(yùn)動(dòng)超越了正常運(yùn)動(dòng)的生理調(diào)節(jié)范圍，導(dǎo)致大腦皮質(zhì)微循環(huán)灌流異常，引起酸中毒和自由基中毒，從而誘導(dǎo)運(yùn)動(dòng)性中樞疲勞的出現(xiàn)和加重。胡建鵬［4］等人的研究表明，缺血2h再灌注1d后梗死周圍區(qū)主要表現(xiàn)為細(xì)胞水腫，再灌注3d后神經(jīng)元空暈，并出現(xiàn)泡沫細(xì)胞，神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞溶解、壞死，7d后小膠質(zhì)細(xì)胞增生。褚曉凡［5］等人在對(duì)局灶性腦缺血再灌注內(nèi)皮細(xì)胞缺血耐受性觀察中發(fā)現(xiàn)，內(nèi)皮細(xì)胞在缺血3h即可發(fā)生明顯的結(jié)構(gòu)變化，缺血6h內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接開放，缺血12h后可發(fā)生出血性轉(zhuǎn)化。本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，力竭運(yùn)動(dòng)后的即刻大腦皮質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，12h后結(jié)構(gòu)損傷明顯，24h后損傷進(jìn)行性加重，光鏡觀察神經(jīng)元與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞排列較為紊亂，神經(jīng)纖維網(wǎng)部分呈空泡狀;神經(jīng)元胞漿空泡化，核固縮均質(zhì)化。電鏡觀察神經(jīng)元胞體水腫，胞漿很空，線粒體嵴斷裂、溶解、呈空泡化，核糖體少，血管周圍組織嚴(yán)重出現(xiàn)空泡等，而48h后結(jié)構(gòu)開始恢復(fù)。實(shí)驗(yàn)提示，一次性力竭運(yùn)動(dòng)的腦部缺血與缺血性再灌注的腦部缺血存在著一定的差異性，其損傷程度較直接的缺血缺氧輕的多，而且其變化是可逆的。

NGF作為神經(jīng)系統(tǒng)最重要的生物活性物質(zhì)，在對(duì)抗缺氧、興奮性氨基酸、自由基和低血糖等方面起著保護(hù)作用，同時(shí)對(duì)中樞及周圍神經(jīng)元的存活、分化、生長(zhǎng)、再生和功能特性的表達(dá)均發(fā)揮重要作用。NGF必須與其功能性受體結(jié)合，影響某些基因轉(zhuǎn)錄及蛋白質(zhì)翻譯，從而引起一系列的生物學(xué)效應(yīng)。鄧昌［6］實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，缺血性腦缺血再灌注后，腦皮質(zhì)TrkA的mRNA蛋白表達(dá)在再灌注12h和24h明顯增高，NGF在再灌注24h明顯增高，分析腦缺血后神經(jīng)元內(nèi)NGF和TrkA的mRNA蛋白含量增多，可能有利于受損神經(jīng)元的修復(fù)。同時(shí)，近年來(lái)的一些研究［7］發(fā)現(xiàn)無(wú)論短暫性或持續(xù)性腦缺血，均有內(nèi)源性NGF表達(dá)增加。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，一次性力竭運(yùn)動(dòng)后的即刻大腦皮質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生早期缺血性損傷樣改變，此時(shí)，NGF和TrkA的陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組呈顯著性升高，分析在力竭運(yùn)動(dòng)后的缺血急性期，NGF與TrkA的增加有利于啟動(dòng)相應(yīng)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑，一方面維持細(xì)胞內(nèi)Ca2+穩(wěn)態(tài);另一方面減少自由基對(duì)神經(jīng)元的損傷，同時(shí)阻止神經(jīng)元凋亡，及時(shí)參與到腦缺血缺氧對(duì)大腦皮質(zhì)引起的損傷。萬(wàn)煒［8］等的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在對(duì)大鼠脊髓全橫斷后，大腦皮質(zhì)TrkA和NGF表達(dá)均上調(diào)，但NGF表達(dá)增高遲于TrkA，本實(shí)驗(yàn)中，大腦皮質(zhì)TrkA和NGF的表達(dá)較對(duì)照組明顯升高，但TrkA的表達(dá)呈現(xiàn)極顯著性的升高，這與萬(wàn)煒等的實(shí)驗(yàn)研究較為符合，提示當(dāng)神經(jīng)細(xì)胞受損時(shí)需要有相當(dāng)數(shù)量的TrkA表達(dá)才能有效發(fā)揮內(nèi)源性NGF對(duì)神經(jīng)元的保護(hù)、促進(jìn)損傷神經(jīng)元的存活和修復(fù)作用。

一次性力竭運(yùn)動(dòng)后的12小時(shí)，大腦皮質(zhì)結(jié)構(gòu)損傷變化明顯，表明腦組織結(jié)構(gòu)的異常變化，腦的調(diào)節(jié)功能持續(xù)性下降，導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)性中樞疲勞的堆積。此時(shí)，NGF和TrkA的陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)量下調(diào)，其中TrkA的表達(dá)較即刻組出現(xiàn)顯著性下降(P＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。施寧華［9］等人的研究發(fā)現(xiàn)，隨缺血再灌注時(shí)間延長(zhǎng)(6h－3d)，TrkA的表達(dá)明顯下調(diào)，7d后明顯升高。與本實(shí)驗(yàn)較相吻合，其可能機(jī)制是NGF和TrkA在細(xì)胞中的分布不同決定的，在大多數(shù)神經(jīng)元中，NGF同時(shí)定位存在于胞核與胞漿兩者中，少量神經(jīng)元定位于胞漿中，而TrkA主要分布于神經(jīng)元胞膜上，少量在胞漿內(nèi)［10］，亞細(xì)胞研究表明位于線粒體膜上［11］。大腦皮質(zhì)結(jié)構(gòu)形態(tài)的破壞，導(dǎo)致細(xì)胞膜和線粒體膜功能出現(xiàn)異常，膜上受體和離子通道的功能發(fā)生改變，有可能影響到了TrkA受體在細(xì)胞膜和線粒體膜上的分布和含量，而此時(shí)細(xì)胞不能及時(shí)合成以補(bǔ)充膜受體的消耗，造成TrkA下調(diào)。TrkA的陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)量下調(diào)，反過(guò)來(lái)加重了大腦皮質(zhì)形態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞，兩者互為影響進(jìn)一步使運(yùn)動(dòng)性中樞疲勞加重。

力竭運(yùn)動(dòng)后24h大腦皮質(zhì)結(jié)構(gòu)破壞進(jìn)行性加重，而NGF和TrkA的陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)量明顯上調(diào)，較對(duì)照組表達(dá)最為顯著。分析腦缺血損傷后功能缺損的恢復(fù)在一定程度上有賴于中樞神經(jīng)系統(tǒng)所固有的功能重組的代償能力［12］，在力竭運(yùn)動(dòng)后的24h，氧自由基的堆積，導(dǎo)致脂質(zhì)膜損傷、通透性增加、各種細(xì)胞器結(jié)構(gòu)破壞，進(jìn)一步抑制腦部運(yùn)動(dòng)和感覺等中樞，出現(xiàn)延遲性疲勞加重現(xiàn)象。而24h后神經(jīng)元內(nèi)NGF和TrkA的高表達(dá)有可能是功能重組的代償能力的體現(xiàn)，通過(guò)增加氧自由基清除劑的活力來(lái)對(duì)抗自由基，拮抗興奮性氨基酸的神經(jīng)毒性作用，促進(jìn)神經(jīng)生存環(huán)境的改善，來(lái)維持神經(jīng)元的修復(fù)和存活，為下一時(shí)段疲勞的消除和大腦皮質(zhì)結(jié)構(gòu)的重塑打下基礎(chǔ)。力竭運(yùn)動(dòng)后的48hNGF和TrkA陽(yáng)性表達(dá)有所下調(diào)，但較24h組無(wú)顯著性差異變化，分析NGF和TrkA表達(dá)維持時(shí)間延長(zhǎng)，能進(jìn)一步激活受損神經(jīng)元的存活，抑制軸突變性，促進(jìn)突觸重建，豐富神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)［13］，同時(shí)重塑大腦皮質(zhì)受損神經(jīng)細(xì)胞的微結(jié)構(gòu)與超微結(jié)構(gòu)。本實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)運(yùn)動(dòng)后48h，神經(jīng)元胞漿空泡化現(xiàn)象開始減少，微血管增多，細(xì)胞周圍間隙變窄，神經(jīng)纖維數(shù)量增多明顯，線粒體腫脹消失、可清晰的見到線粒體嵴的結(jié)構(gòu)、細(xì)胞膜完整，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較為豐富。可見NGF和TrkA的持續(xù)性高表達(dá)，改善了大腦皮質(zhì)的結(jié)構(gòu)形態(tài)，最終達(dá)到生理功能的重建。本實(shí)驗(yàn)表明，大腦皮質(zhì)受損后的神經(jīng)元雖然不能再生，但由于力竭運(yùn)動(dòng)后NGF和TrkA動(dòng)態(tài)表達(dá)的變化，隨著時(shí)間的延續(xù)卻出現(xiàn)有意義的功能恢復(fù)，同時(shí)與運(yùn)動(dòng)性疲勞的產(chǎn)生、堆積、加重、消除關(guān)系較為密切。

本實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)對(duì)力竭運(yùn)動(dòng)后不同時(shí)相NGF和TrkA的陽(yáng)性表達(dá)相關(guān)性的分析發(fā)現(xiàn)，在運(yùn)動(dòng)后的即刻N(yùn)GF和TrkA兩者的陽(yáng)性表達(dá)高度相關(guān)，分析當(dāng)NGF與高親和力受體TrkA結(jié)合后，NGF對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的存活和再生發(fā)揮正性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用，而在缺乏TrkA的情況下，NGF與其低親和力受體NGFRp75結(jié)合后可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［14］因此，TrkA的表達(dá)對(duì)于NGF的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用具有決定性意義，兩者在運(yùn)動(dòng)后的即刻高度相關(guān)，抑制了NGF誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用，有可能對(duì)48h后運(yùn)動(dòng)性疲勞的恢復(fù)具有積極的意義。

4 結(jié)論

(1)一次性力竭運(yùn)動(dòng)后大腦皮質(zhì)結(jié)構(gòu)的損傷和重塑與NGF、TrkA動(dòng)態(tài)表達(dá)具有一定的聯(lián)系性，提示NGF與TrkA參與了運(yùn)動(dòng)疲勞消除的神經(jīng)生物學(xué)調(diào)控過(guò)程。

(2)運(yùn)動(dòng)后即刻N(yùn)GF和TrkA表達(dá)的高度正相關(guān)，抑制NGF誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用，有可能對(duì)48h后運(yùn)動(dòng)性疲勞的消除具有積極的意義。

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Structure and NGF，TrkA Dynamic Change in Rat Cerebral Cortex after Exhaustive Exercise

YANG Peng－pai
(Chengdu Sport University，Chengdu Sichuan China 610041)

Objective:To investigate the dynamic relationship between the morphological changes of the microstructure and ultrastructural of the cerebral cortex and nerve growth factor(NGF)and TrkA receptor in the SD male rats after one－time exhaustive exercise.Methods:After a model of one－time exhaustive swimming，rats are randomly divided into control group(C group)immediately after exercise group(E1)，12h group(E2)，24h group(E3)，48h group(E4).The cerebral cortex is removed after perfusion and position.By using HE staining，uranium－lead double staining，the ultrastructural and micro－structure change of cerebral cortex are observed in light microscopy and electron microscopy.The expression of NGF and TrkA in cerebral cortex is detected depending on immunohistochemistry and image analysis.Result:Immediately after one time exhaustive exercise，the brain structure shows early cortical ischemia－like changes;NGF，TrkA expression levels are more significantly increased than that in the control group;Cerebral cortex shows apparent structural damage after 12h，but the NGF，TrkA expression levels down;compared with E1 the expression of TrkA is significant decreased;structural damage in cerebral cortex progressively increases after 24h，NGF，TrkA expression are most significantly increased after 24h;the cerebral cortex structure begins to reshape after 48h; NGF，TrkA expression levels have come down but continue to maintain a high expression.Conclusion:There is a certain dynamic association between structural damage and remodeling of cerebral cortex with NGF，TrkA expression after onetime exhaustive exercise.

cerebral cortex，exhaustive exercise，NGF，TrkA

G804.4 Document code:A Article ID:1001－9154(2011)09－0060－05

G804.4

A

1001－9154(2011)09－0060－05

成都體育學(xué)院院級(jí)課題:JY0902。

楊澎湃(1968－)，女，重慶市人，實(shí)驗(yàn)師，碩士，研究方向:運(yùn)動(dòng)性疲勞。

2011－06－23