用高效液相色譜法測(cè)定食品中脫氫乙酸

文/徐 紅 郭曉霖

脫氫乙酸及其鈉鹽是食品中常用的防腐劑，具有良好的防腐效果。對(duì)霉菌和酵母抑制能力強(qiáng)，目前廣泛用于食品加工行業(yè)，尤其是糕點(diǎn)、果汁和醬菜。試驗(yàn)表明，脫氫乙酸對(duì)人體健康有一定的影響，有可能導(dǎo)致腎結(jié)石等問題。

GB/T5009.121-2003中介紹了用氣相色譜法測(cè)定脫氧乙酸的測(cè)定方法。該方法在樣品的前處理中，樣品酸化后，用乙醚提取萃取結(jié)束后用無水硫酸鈉脫水30分鐘，樣品濃縮后，用丙酮定容。其前處理、凈化、分離過程復(fù)雜、繁瑣、冗長(zhǎng)，容易造成樣品中測(cè)定成分損失，凈化不徹底，且采用試劑毒性大等問題，從而影響測(cè)定的安全性和準(zhǔn)確度。筆者參照各類文獻(xiàn)資料根據(jù)脫氫乙酸在食品中的作用原理，將樣品提取凈化，用高效液相色譜法測(cè)其含量，經(jīng)反復(fù)實(shí)踐證明是切實(shí)可行的。

1.測(cè)定方法

1.1 試劑

除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為GB/T6682-2008規(guī)定的一級(jí)水。

(1)甲醇色譜純。

(2)乙酸銨溶液：0.02mol／L。稱取1.54g乙酸銨，用水溶解、定容至1L。

（3）2%氫氧化鈉溶液。

（4）脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：1mg/mL。準(zhǔn)確稱取100mg脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品，用2%的氫氧化鈉溶解，用水定容至100mL，配成1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4℃保存。

1.2 儀器

高效液相色譜儀（帶紫外檢測(cè)器）。

1.3 分析步驟

（1）樣品處理

準(zhǔn)確稱取混合的樣品2.00克～5.00克，置于容量瓶中，加入水10毫升（視樣品狀況，若需沉淀蛋白可加入3毫升22%乙酸鋅和10.6%亞鐵氰化鉀，震蕩，充分沉淀蛋白），用NaoH溶液調(diào)PH值至7～8，加水至刻度，超聲提取10分鐘（視樣品狀況，若需脫脂，此時(shí)加入正己烷10毫升，重復(fù)兩次脫脂）取適量至于離心管中，4000r/min離心10min，取清液經(jīng)濾膜（0.45um）過濾，用高效液相色譜測(cè)定。

（2）高效液相色譜儀參考條件

a、色譜柱：C18柱，5μm， 4.6mmх250mm或相當(dāng)者。

b、流動(dòng)相：甲醇：0.02mol/L乙酸銨溶液（10：90）。

c、流速：1ml／min。

d、進(jìn)樣量：10μl。

e、柱溫：40℃。

f、檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器、293nm波長(zhǎng)， 根據(jù)保留時(shí)間定性外標(biāo)峰面積定量。

（3）結(jié)果計(jì)算

X:樣品中脫氫乙酸的含量g／kg。

A:進(jìn)樣體積中脫氫乙酸的含量mg。

V:樣品稀釋液總體積ml。

V1:進(jìn)樣體積ml。

M: 樣品質(zhì)量g。

2.結(jié)果與討論

按照以上測(cè)定方法對(duì)六組果汁進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)見下表：

加標(biāo)回收率在90.00%～101.1%，平均回收率為95.3%。

實(shí)驗(yàn)證明采用該方法測(cè)定食品中脫氫乙酸，樣品前處理采用水萃取，沉淀蛋白等簡(jiǎn)單凈化技術(shù)，且采用高效液相反相，整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作相對(duì)簡(jiǎn)單且準(zhǔn)確度高，效率高，此法切實(shí)可行。