高效液相色譜法測定眩痛定膠囊中延胡索乙素含量

曹 健，王 芳，陳 琳，張恩娟

(第三軍醫(yī)大學新橋醫(yī)院藥學部，重慶 400037)

眩痛定膠囊是我院研制的非標制劑，由天麻、元胡、白芷等中藥組成，具有鎮(zhèn)痙息風、通絡止痛的功效，多年臨床應用于眩暈、頭痛等各種原因引起的周圍神經(jīng)痛、關節(jié)肌肉痛等，有較好療效。延胡索乙素為元胡的主要有效成分之一，故選擇延胡索乙素作為控制本品質(zhì)量的指標成分。據(jù)文獻報道，延胡索乙素的含量測定可采用高效液相色譜法[1]、薄層掃描法[2]等，由于眩痛定膠囊組成成分復雜，干擾因素較多，預試高效液相色譜法效果較好，故選用該法測定眩痛定膠囊中延胡索乙素含量。

1 儀器與試藥

Waters 600型高效液相色譜儀(美國Waters公司)；紫外檢測器；ME235s型電子天平（德國 Sartorius）；電熱恒溫水浴鍋(上海醫(yī)療器械五廠)；CSF-1A型超聲波發(fā)生器(上海超聲波儀器廠)；CS202A型電熱保溫干燥箱(重慶實驗設備廠)；80-2型離心沉淀器(上海手術器械廠)。延胡索乙素對照品（批號為110726-200409，中國藥品生物制品檢定所)；眩痛定膠囊（0.45 g/粒，本院自制，批號分別為 070813，080602，080729）；陰性對照膠囊(缺元胡，本院自制）。甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODS柱(150 mm×4.6 mm，5!m)；流動相：含0.2%三乙胺的水 -甲醇(52∶48)；流速：1.2 mL/min；檢測波長：283 nm；柱溫：25 ℃；進樣量：20!L。

2.2 溶液制備

精密稱取延胡索乙素對照品5.0 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇振搖使溶解，定容至刻度，即得對照品溶液。精密稱取膠囊內(nèi)容物5 g，加20 mL甲醇，85℃超聲提取1 h，取甲醇層離心，上清液置25 mL量瓶中，少量甲醇洗滌藥渣，超聲10 min，依法離心，取上清液，加甲醇至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45!m)濾過，即得供試品溶液。精密稱取按處方工藝制備的缺元胡的陰性對照膠囊內(nèi)容物5 g，按照供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

系統(tǒng)適用性試驗：精密量取對照品溶液2.0 mL，置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。將對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液分別進樣20!L。高效液相色譜圖如圖1?？梢?，保留時間26.02 min處色譜峰為延胡索乙素的峰，陰性對照品溶液幾乎無干擾。

標準曲線繪制：精密量取對照品溶液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取20!L注入高效液相色譜儀測定。以峰面積 A對質(zhì)量濃度 C進行線性回歸，得回歸方程 A=16 576.5C-16 466.5（r=0.999 9）。結(jié)果表明，延胡索乙素質(zhì)量濃度在8.0～40.0!g/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關系。

精密度試驗：精密量取對照品溶液1.0 mL，置25 mL量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，連續(xù)進樣20!L，測定5次，記錄色譜圖，測定延胡索乙素對照品峰面積。結(jié)果5次測得的平均峰面積為 116 543，RSD=1.17%（n=5），表明儀器精密度良好。

重現(xiàn)性試驗：取同一批供試品5份，按供試品溶液制備方法制備，進樣20!L，測定延胡索乙素峰面積。結(jié)果5次測得的平均峰面積為178 789，RSD=1.75%（n=5），表明方法重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗：精密吸取同一供試品溶液20!L，于0，5，24 h進樣，記錄每次進樣的峰面積。結(jié)果延胡索乙素平均峰面積分別為177 512，177 341，178 624，RSD=0.29% ，表明供試品溶液在 24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

圖1 高效液相色譜圖

加樣回收試驗：分別精密稱取眩痛定膠囊內(nèi)容物5 g，精密加入對照品稀釋液0.5，1.0，1.5 mL各3份，按供試品溶液制備方法提取并稀釋，進樣20!L，測定峰面積，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果（n=5）

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液。分別精密吸取對照品溶液和樣品溶液各20!L進樣，測定峰面積，計算延胡索乙素的含量。結(jié)果批號為070813，080602，080729的樣品中，延胡索乙素平均含量分別為 0.020 51，0.026 79，0.021 52 mg/粒，RSD 分別為 0.76%，0.68%，1.04%（n=5）。

3 討論

將延胡索乙素的甲醇溶液置紫外-可見分光光度計掃描，結(jié)果延胡索乙素在283 nm處有最大吸收峰，經(jīng)試驗證實，檢測波長為283 nm時雜質(zhì)干擾較少，故本試驗采用283 nm作為眩痛定膠囊中延胡索乙素含量測定的檢測波長。

制劑中延胡索乙素可以通過甲醇回流和甲醇超聲的方法來提取。曾對所考察的幾個批號的膠囊做了兩種提取方法的對比試驗，取相同量的膠囊內(nèi)容物分別同時進行甲醇回流和甲醇超聲（250 mA），時間均為1 h，此后的操作方法相同。結(jié)果采用甲醇回流提取的延胡索乙素含量僅為甲醇超聲提取的70%～90%，有文獻報道延胡索乙素受溫度影響可能分解[3]，故采用甲醇超聲的方法提取眩痛定膠囊中的延胡索乙素。試驗證明，按藥典方法，即甲醇超聲提取后揮干甲醇，加氨水溶液溶解殘渣，加乙醚萃取有機層，揮干乙醚后加甲醇溶解，干擾物質(zhì)排除很多，但延胡索乙素回收率也大大降低，故將超聲提取的甲醇高速離心后過0.45!m濾膜直接進樣。

《中國藥典》規(guī)定，元胡中的延胡索乙素含量按干燥品計應大于0.05%[4]，根據(jù)處方用量和工藝提取情況，將眩痛定膠囊中延胡索乙素的最低檢出限度定為0.02 mg/粒。

[1]朱才慶，吳 迪，李 艷，等.高效液相色譜法測定復方元胡止痛膠囊中延胡索乙素的含量[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2008，7（19）：1 727-1 729.

[2]俞 瀅，徐紅輝.強痛寧中延胡索乙素的質(zhì)量標準研究[J].中國現(xiàn)代應用藥學，1998，3：51-53.

[3]董 瑩，魏獻春.薄層掃描法測定胃得康片中延胡索乙素的含量[J].中國中藥雜志，2004，10：84-85.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京:化學工業(yè)出版社，2005：171.