大黃煎煮與浸漬過程中蒽醌類成分含量變化比較Δ

周曉虹，鄒佳麗，袁月梅，姚美村#（1.廣州市第一人民醫(yī)院，廣州市510180；.中山大學(xué)藥學(xué)院，廣州市510006）

大黃煎煮與浸漬過程中蒽醌類成分含量變化比較Δ

周曉虹1＊，鄒佳麗2，袁月梅2，姚美村2#（1.廣州市第一人民醫(yī)院，廣州市510180；2.中山大學(xué)藥學(xué)院，廣州市510006）

目的：比較大黃浸漬和煎煮2種不同處理過程中蒽醌類成分的含量變化。方法：以大黃中蘆薈大黃素等5個主要成分為分析對象，采用高效液相色譜（HPLC）法分別測定大黃在不同處理方法（浸漬法和煎煮法）和不同時間的煎劑中游離蒽醌、結(jié)合蒽醌和總蒽醌的含量變化情況并進(jìn)行比較。結(jié)果：大黃中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚4個成分的進(jìn)樣量在0.03～0.64 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系；大黃素甲醚進(jìn)樣量在0.01～0.34 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。大黃經(jīng)煎煮法處理后總蒽醌的溶出量比浸漬法明顯增多；2種處理方法對應(yīng)的游離蒽醌的溶出率隨時間變化基本穩(wěn)定，結(jié)合蒽醌的溶出量在煎煮和浸漬過程中均有所下降。結(jié)論：大黃在用浸漬和煎煮2種方法處理時可導(dǎo)致其蒽醌類成分含量發(fā)生明顯變化。

大黃；游離蒽醌；結(jié)合蒽醌；總蒽醌；煎煮法；浸漬法；含量

大黃黃連瀉心湯是醫(yī)圣張仲景在《傷寒雜病論》中收錄的治療“心下痞”證的著名方劑[1]，該方將藥物“以麻沸湯二升漬之，須臾，絞去渣，分溫再服”。此種浸漬法（開水沖泡）有別于煎劑常用的煎煮法，由于藥物與水接觸時間較短（2～10 min），最終溶出的有效成分同煎煮法相比有可能發(fā)生較大變化，從而導(dǎo)致臨床療效也有所不同。但目前有關(guān)此方面的文獻(xiàn)鮮有報道。為了探討該復(fù)方在浸漬法制備時可能發(fā)生的化學(xué)成分變化，筆者選擇該復(fù)方君藥大黃為研究對象，測定和比較大黃在煎煮和浸漬2種不同處理過程中所含游離蒽醌、結(jié)合蒽醌和總蒽醌的含量變化，為更深入探討大黃黃連瀉心湯的配伍機(jī)制提供試驗數(shù)據(jù)支持。

1 材料

1.1 儀器

1525型高壓泵、2487型雙通道紫外檢測器、717型自動進(jìn)樣器（美國Waters公司）；Luna苯基柱（美國菲羅門公司）；AL204型萬分之一電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；TGL-16B離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；ZHT型自動恒溫電熱套（山東鄄城華魯電熱儀器有限公司）。

1.2 試藥

甲醇為色譜純，水為超純水；磷酸（分析純，天津市福晨化學(xué)試劑廠）；無水乙醚（分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司）；鹽酸（分析純，廣州市東紅化工廠）；蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品（批號分別為110795-20060、0757-200206、110756-200110、110796-100615、110758-200610，中國藥品生物制品檢定所）；大黃飲片（產(chǎn)地四川，購自廣州中醫(yī)藥大學(xué)大藥房有限公司中藥飲片廠，批號：080228），由中山大學(xué)藥學(xué)院王軍副教授鑒定為真品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

固定相：Luna苯基柱（250 mm×4.60 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸（85∶15）[2]；紫外檢測波長：254 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 混合對照品溶液的制備

取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚5種對照品各適量，精密稱定，加甲醇分別制成每1 mL含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各80 μg，大黃素甲醚40 μg的對照品貯備液。分別精密量取上述對照品貯備液各2 mL，混勻，即得混合對照品溶液（每1 mL中含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各為16 μg，含大黃素甲醚8 μg）。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 煎煮法：取大黃粉末3.0 g，精密稱定，置三頸瓶中已加熱至沸的100 mL水中，回流加熱保持微沸，分別于10、15、20、25、30、50 min時取藥液各2 mL（每次均用2 mL熱水補(bǔ)充回瓶中），12000 r·min-1離心5 min，取上清液，備用。

2.3.2 浸漬法：取大黃粉末3.0 g，精密稱定，置燒杯中，用100 mL沸水浸泡，分別于1、2、5、10、20、30 min時取藥液各2 mL（每次均用同等條件下放置的沸水補(bǔ)充），12000 r·min-1離心5 min，取上清液，備用。

2.3.3 游離蒽醌液的制備：分別精密量取上述的上清液1.0 mL，用8 mL乙醚振搖萃取，分取乙醚層，揮干乙醚，殘渣用2.0 mL甲醇溶解，12000 r·min-1離心5 min，取上清液，備用。

2.3.4 結(jié)合蒽醌液的制備：取“2.3.3”項下乙醚萃取后的水層，加入8%鹽酸溶液15 mL，加熱回流0.5 h，放至室溫，然后用15 mL乙醚萃取，分取乙醚層，揮干乙醚，殘渣用2.0 mL甲醇溶解，12000 r·min-1離心5 min，取上清液，備用。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

取混合對照品溶液適量，分別進(jìn)樣2、5、10、15、20、40 μL，進(jìn)行色譜分析。以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，相應(yīng)的各對照品進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別得各自的回歸方程，結(jié)果見表1。

表1 線性范圍與標(biāo)準(zhǔn)曲線Tab 1Linear range and standard curves

2.5 精密度試驗

取混合對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，以峰面積計算5個成分的RSD值。結(jié)果，蘆薈大黃素為1.81%，大黃酸為0.74%，大黃素為1.75%，大黃酚為1.22%，大黃素甲醚為0.88%，表明精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗

按“2.3.2”項下方法分別制備大黃黃連瀉心湯中3味藥配伍浸漬相同時間的藥液6份，再按“2.3.3”和“2.3.4”項下方法分別制備游離蒽醌和結(jié)合蒽醌溶液，各取20 μL進(jìn)樣分析，計算蒽醌溶出量。結(jié)果，總游離蒽醌的平均溶出率為0.16%，RSD＝2.75%；總結(jié)合蒽醌平均溶出率為0.14%，RSD＝4.73%。

2.7 加樣回收率試驗

精密吸取“2.6”項下藥液0.7 mL，共6份，分別加入0.3 mL混合對照品溶液，依法制備游離蒽醌液；另精密吸取上述溶液0.7 mL，共3份，同法制備游離蒽醌液作空白對照。將上述溶液按設(shè)定的色譜條件進(jìn)樣分析，計算游離蒽醌總量的提取回收率，結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）Tab 2Results of recovery test（n＝6）

2.8 樣品溶出率測定

取“2.3”項下制備的各時間點(diǎn)的供試品溶液，按設(shè)定的色譜條件進(jìn)樣分析，計算各成分的溶出率。色譜見圖1。

3 討論

筆者參考“瀉心湯”[2]中大黃蒽醌類成分的含量測定方法[2]，對大黃經(jīng)浸漬法和煎煮法處理后的蒽醌類成分含量進(jìn)行了測定，并對結(jié)果進(jìn)行了分析比較。結(jié)果表明，當(dāng)大黃用浸漬和煎煮2種不同方法處理時，煎劑中的總蒽醌類含量差別非常明顯，用浸漬法處理的供試品溶液中的總蒽醌類成分含量（游離蒽醌和結(jié)合蒽醌之和）要遠(yuǎn)小于煎煮法處理的樣品，如圖2所示；且隨著時間延長，2種處理方法中結(jié)合蒽醌的含量都在逐漸降低，但在煎煮法溶液中降低的幅度要大于浸漬法，而游離蒽醌的含量相對穩(wěn)定，如圖3所示。

圖1 高效液相色譜圖A.混合對照品；B.供試品；1.蘆薈大黃素；2.大黃酸；3.大黃素；4.大黃酚；5.大黃素甲醚Fig 1HPLC chromatograms A.mixture standard；B.test samples；1.aloe emodin；2.rhein；3.emodin；4.chrysophanol；5.physcion

圖2 大黃煎煮和浸漬過程中蒽醌類成分的變化Fig 2Content of anthraquinones in the decoction and maceration of R.officinale

由于大黃黃連瀉心湯在應(yīng)用時采用的是不同于傳統(tǒng)煎煮法的浸漬法，所以有醫(yī)家認(rèn)為該方在作用上是“取其氣之清揚(yáng)，不欲其味之重濁，以利清上部無形邪熱”[3]，也即該方在浸漬后不具有明顯瀉下作用；但也有人[4]認(rèn)為由于該方組方以大黃為君藥，雖配伍黃連也并不減其瀉下能力，用麻沸湯浸漬仍可致迅速瀉下。對于這樣的爭論，若單從本研究中對大黃主要致瀉作用的結(jié)合蒽醌類成分含量來看，用浸漬法制備樣品的結(jié)合蒽醌百分含量最高為0.14%，最低為0.10%，與傳統(tǒng)煎煮法處理50 min左右的結(jié)合蒽醌含量0.13%相當(dāng)，所以如果傳統(tǒng)上認(rèn)為長時間煎煮（30 min以上）將導(dǎo)致大黃的瀉下作用減弱甚至消失，那么從本研究結(jié)果可以推斷浸漬法制備的大黃溶液也基本不具有明顯瀉下作用，該結(jié)論也可以用以解釋該方只“取其氣之清揚(yáng)”的作用特點(diǎn)。

圖3 大黃浸漬、煎煮劑中游離蒽醌和結(jié)合蒽醌含量比較Fig 3Comparison of the content of nomadic anthraquinones and conjugated anthraquinones in decoction and maceration of R.officinale

在大黃黃連瀉心湯的浸漬法中有“絞去渣”的步驟，本試驗在研究的過程中發(fā)現(xiàn)如果在操作過程中不將渣去掉，或有少量藥渣混入，都將導(dǎo)致結(jié)合蒽醌的含量明顯升高，最終使得其瀉下作用增強(qiáng)?！敖g去渣”對該方的不從速瀉下非常必要，因此在大黃黃連瀉心湯制備時去渣服用是有科學(xué)道理的。

本試驗比較了大黃黃連瀉心湯的君藥大黃經(jīng)不同處理方法（浸漬法和煎煮法）處理后的化學(xué)成分變化，初步揭示大黃在不同處理過程中化學(xué)成分確有明顯變化，研究結(jié)果可為進(jìn)一步探討該復(fù)方的作用特點(diǎn)和浸漬法的化學(xué)成分基礎(chǔ)提供參考。

[1]田效信，伊文琪.《傷寒論》五瀉心湯的鑒別與運(yùn)用[J].實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床，2007，7（1）：80.

[2]石榮，馬越鳴，葉福媛，等.瀉心湯不同配伍中蒽醌類成分的變化研究[J].中草藥，2007，38（9）：1327.

[3]鄭亞林，陳明.試析大黃黃連瀉心湯證和附子瀉心湯證[J].河南中醫(yī)，2006，26（6）：4.

[4]彭光超.麻沸湯漬服大黃黃連瀉心湯之我見[J].遼寧中醫(yī)雜志，1989，6：17.

Comparison of the Content of Anthraquinones in the Decoction and Maceration of Rheum officinale

ZHOU Xiao-hong（Guanzhou Municipal First People’s Hospital，Guangzhou 510180，China）
ZOU Jia-li，YUAN Yue-mei，YAO Mei-cun（School of Pharmacy，Sun Yat-sen University，Guangzhou 510006，China）

OBJECTIVE：To compare content of anthraquinones in the decoction and maceration of Rheum officinale.METHODS：Aloe emodin and four other components in R.officinale were taken as analysis objects.HPLC was used to determine the content of nomadic anthraquinone，conjugated anthraquinone and total anthraquinone in R.officinale during decoction process and maceration process.RESULTS：The linear range of aloe emodin，rhein，emodin and chrysophanol were 0.03～0.64μg and the linear range of physcion were 0.01～0.34 μg.The concentration of total anthraquinones in decoction process was much higher than in maceration process.The change of dissolution of nomadic anthraquinones in two processes kept stable with process time.The content of conjugated anthraquinones in two processes was all decreased to some extent.CONCLUSION：The concentrations of anthraquinones in R.officinale are influenced by decoction process and maceration process.

Rheum officinale；Nomadic anthraquinones；Conjugated anthraquinones；Total anthraquinones；Decoction process；Maceration process；Content

R283；R284.1；R927.2

A

1001-0408（2010）23-2148-03

2009-11-17

2010-03-16）