大白栓菌中3-氫化松苓酸B含量的測(cè)定

王星琴 汪鋆植 郭志勇 王海燕 鄧改改 鄒 坤

（1.天然產(chǎn)物研究與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（三峽大學(xué)）三峽大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)院,湖北 宜昌 443002；2.宜昌市中醫(yī)院,湖北 宜昌 443000）

大白栓菌Trametes lactinea（Berk.）Pat.是一種多孔菌科栓菌屬的大型真菌[1],生于闊葉樹(shù)木材上.在亞洲各國(guó)廣泛分布,研究表明大白栓菌具有調(diào)節(jié)免疫功能,促進(jìn)禽畜生長(zhǎng)作用.大白栓菌主要含有3-氫化松苓酸B等萜類(lèi)成分.為了控制大白栓菌質(zhì)量,為大白栓菌的開(kāi)發(fā)利用奠定基礎(chǔ),本文采用高效液相色譜法對(duì)大白栓菌中3-氫化松苓酸B的含量進(jìn)行了測(cè)定.

1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器

大白栓菌（Trametes lactinea（Berk.）Pat.）由本實(shí)驗(yàn)室純化培養(yǎng).用白櫟（Quercus f abri Hance）木屑、玉米粉、石膏、白糖（70∶35∶2∶1）組成培養(yǎng)基,接種后于28℃培養(yǎng)7 d[2].分別取表面無(wú)培養(yǎng)基的大白栓菌菌絲體和下層夾雜有培養(yǎng)基的菌絲體培養(yǎng)物干燥后供測(cè)定用.

甲醇、乙腈（天津市科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心）.3-氫化松苓酸B對(duì)照品（本實(shí)驗(yàn)室提供,從大白栓菌中提取純化,純度99.3%）.

Prostar 210高效液相分析色譜儀（美國(guó)）.U3010紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)（日本）.

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為YMC-Pack AQ C18,250×4.6mm,5 μ m；流動(dòng)相為乙腈-水（95 ∶5）；進(jìn)樣量為 10 μ L,流速為1.0mL/min；柱溫為 25℃,檢測(cè)波長(zhǎng)為 214 nm.在該色譜條件下待測(cè)組分可達(dá)到基線分離見(jiàn)圖1～2.

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取3-氫化松苓酸B（由天然產(chǎn)物開(kāi)發(fā)與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室從大白栓菌中提取純化）2.0 mg置于10mL量瓶中.加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度,搖勻,備用.

2.3 供試樣品溶液制備

取大白栓菌培養(yǎng)物及大白栓菌粉碎,過(guò)60目篩,稱(chēng)取大白栓菌培養(yǎng)物粉末1g,大白栓菌粉末0.5 g,加甲醇10 mL,稱(chēng)重后浸泡4 h,40 Hz,40℃超聲20 min,0.45μ濾膜過(guò)濾,供測(cè)定用.

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性關(guān)系考察

精密吸取對(duì)照品溶液 1、2、3、4、5、6 、7 、8 、9 、10,12,14μ L注入液相色譜儀,按色譜條件測(cè)得峰面積,以進(jìn)樣量（μ g）為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.回歸方程為:y=1192330x-112754,R=0.9999,在20-240mg·L-1呈良好的線性關(guān)系.

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品溶液,間隔3h測(cè) 1次,共測(cè)24h.結(jié)果 3-氫化松苓酸B峰面積RSD為1.02%（n=8）,表明供試品溶液室溫下放置24h基本穩(wěn)定.

2.6 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取3-氫化松苓酸B對(duì)照品溶液10μ L重復(fù)進(jìn)樣5次,測(cè)定峰面積的RSD為0.91%.重復(fù)取同一樣品5份,照“供試品溶液制備”項(xiàng)操作,測(cè)得3-氫化松苓酸B平均含量為5.63%,RSD為1.3%.

2.7 樣品含量測(cè)定

收集培養(yǎng)的3批樣品,分別測(cè)定大白栓菌菌絲體,大白栓菌培養(yǎng)物中3-氫化松苓酸B含量.按供試樣品溶液制備方法制備供試品溶液,準(zhǔn)確吸取供試品溶液各10μ L,按上述色譜條件測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表1.

表1 3-氫化松苓酸B含量

2.8 加樣回收試驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知含量樣品5份,加入與樣品含量相當(dāng)?shù)膶?duì)照品,測(cè)定3-氫化松苓酸B含量,計(jì)算回收率,結(jié)果見(jiàn)表2.

表2 3-氫化松苓酸B加樣回收率（n=5）

3 討 論

對(duì)照品溶液經(jīng)紫外光譜儀掃描其最大吸收峰為214 nm,故選擇214nm為測(cè)定波長(zhǎng),采用紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè),在此條件下3-氫化松苓酸B與其他雜質(zhì)峰分離度良好.

大白栓菌為多孔菌科真菌,國(guó)內(nèi)外對(duì)其研究較少,近年來(lái),大白栓菌作為萌發(fā)菌應(yīng)用于天麻生產(chǎn),促進(jìn)了對(duì)大白栓菌的研究[3].實(shí)驗(yàn)表明大白栓菌主要含萜類(lèi)化合物,該類(lèi)化合物具有調(diào)節(jié)免疫功能,促進(jìn)禽畜生長(zhǎng)作用[4].3-氫化松苓酸B可能通過(guò)激活機(jī)體免疫系統(tǒng),一方面提高畜禽體質(zhì),增強(qiáng)抗病能力,另一方面導(dǎo)致畜禽采食量增加,促進(jìn)畜禽生長(zhǎng).但3-氫化松苓酸B水溶性差,水煎不易浸出,醇提成本較高,使用時(shí)宜加在飼料中讓畜禽采食.

本文對(duì)大白栓菌中3-氫化松苓酸B的含量進(jìn)行了測(cè)定.為進(jìn)一步制定大白栓菌的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供了基礎(chǔ).3-氫化松苓酸B是大白栓菌的主要成分之一,亦為大白栓菌主要活性成分.大白栓菌中3-氫化松苓酸B平均達(dá)5.71%.培養(yǎng)物中3-氫化松苓酸B平均為0.53%.其含量較高,可進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用.

[1]趙繼鼎.中國(guó)真菌志:第3卷[M].北京:科學(xué)出版社,1998:365-366.

[2]譚夢(mèng)華,段朝紅,桂裕成等.大白栓菌的人工培養(yǎng)條件優(yōu)化[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2008,19（2）:462-463.

[3]汪鋆植,王紹柏,劉曉琴等.栽培條件對(duì)無(wú)土袋栽天麻種麻質(zhì)量的影響[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥雜志,2006（4）:243-246.

[4]田允波,葛長(zhǎng)榮,高士爭(zhēng).天然植物提取物對(duì)生長(zhǎng)豬的促生長(zhǎng)作用及其內(nèi)分泌機(jī)制的研究[J].飼料及飼養(yǎng)試驗(yàn),2006（7）:40-42.