針刺家兔內(nèi)關(guān)穴對緩慢型心律失常模型心肌細胞Na+－K+－ATP酶活性影響的研究

姚鳳禎，王巖

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

心律失常是一種嚴重的致殘性和致死性疾病，其發(fā)病率呈逐年增高的趨勢，不僅對人類健康構(gòu)成了嚴重的威脅，亦給家庭及社會帶來了沉重的經(jīng)濟負擔。因此，心律失常的治療具有十分重要的意義。針刺法將中醫(yī)學(xué)的整體觀念、辨證論治理論與經(jīng)絡(luò)學(xué)說結(jié)合起來，更加全面的發(fā)揮中醫(yī)治療特色，日益顯現(xiàn)出中醫(yī)藥療法在本病治療中的優(yōu)越性和獨特魅力。在臨床實踐中運用針刺法治療心律失常，取得了較好的療效，為進一步探討其作用機制，故以緩慢型心律失常家兔模型為研究對象進行了實驗研究，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

家兔，雌雄各半，體重(1.5～2.0)kg，4～5月齡，均購自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心，在通風(fēng)，溫度、濕度適宜的動物室內(nèi)常規(guī)飼養(yǎng)。

1.2 藥物與試劑

參附注射液(四川省雅安三九藥業(yè)有限公司，批號:Z51020664);鹽酸維拉帕米注射液(上海禾豐制藥有限公司提供。批號:H31021343);ATP酶試劑盒(南京建成生物研究所)。

1.3 主要儀器

十六導(dǎo)電腦生理記錄儀(美國Biopac公司);示波器(美國Biopac公司);MP－2003型注射泵(上海雷恩醫(yī)療器械有限公司);XW－80型漩渦混合器(上海第一醫(yī)學(xué)院儀器廠);紫外分光光度計DU－600型(美國Beckman公司)。

2 實驗方法

2.1 模型制備及分組

選取體重1.5kg～2kg的家兔40只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1w。將家兔隨機分為5組，每組8只，分別為空白對照組、模型對照組、針刺預(yù)防組、針刺治療組和參附注射液組。依據(jù)《中藥藥理研究方法學(xué)》(第二版)復(fù)制家兔緩慢型心律模型［1］。將各組家兔固定于實驗臺上，用酒精棉球擦拭其四肢腕、踝關(guān)節(jié)近心端內(nèi)側(cè)皮膚。以電極與皮膚成30°角傾斜刺入皮下，用16導(dǎo)電腦生理記錄儀記錄100s正常心電圖后，以20%烏拉坦(1g·kg－1)耳緣靜脈麻醉，除空白對照組外，各組于20 min后從耳緣靜脈恒速注射2%鹽酸維拉帕米生理溶液(0.44～0.66mL·min－1)。當鹽酸維拉帕米劑量達到0.8～1.8(平均1.4)mg·kg－1時，心率顯著減慢，并出現(xiàn)二度房室傳導(dǎo)阻滯。

2.2 針刺取穴

參照《實驗針灸學(xué)》［2］中“家兔的常用針灸穴位定位標準”及比較解剖學(xué)的方法定位:前臂下1/6折點處的內(nèi)側(cè)橈，尺骨間隙中，腧穴常規(guī)消毒后，左手食指或拇指緊按針穴，右手持30號1寸毫針刺入穴內(nèi)5mm，連續(xù)重插輕提約60s。

2.3 治療及給藥方法

空白對照組:記錄900s心電圖，不予任何處理;

模型對照組:麻醉后注射維拉帕米，不予任何處理;

針刺預(yù)防組:注射維拉帕米前5min，針刺內(nèi)關(guān)穴，60s后留針;

針刺治療組:出現(xiàn)二度房室傳導(dǎo)阻滯(5:4傳導(dǎo)阻滯)時，立即給予家兔雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴針刺，行針60s后留針;

參附注射液組:于注射維拉帕米前15min，沿耳緣靜脈緩慢注射參附注射液5mL。

各組家兔均通過示波器觀察體表心電變化，并同步記錄，留針至恢復(fù)正常心律后停止記錄，拔出針電極，立即取材。

2.4 取材

上述各組家兔心電圖大致恢復(fù)正常后，立即處死家兔。以生理鹽水潤濕家兔胸部皮毛，剪開其胸部皮膚，鈍性剝離肌肉、剪開胸骨，掀開胸骨，剪開心包膜，充分暴露出家兔心臟。摘取心臟，以濾紙吸干血液，投入液氮罐中快速冷凍，以低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.5 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 13.0 for Windows統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(±s)表示，多組間的比較應(yīng)用方差分析，兩兩比較用q檢驗。

3 結(jié)果

3.1 針刺內(nèi)關(guān)穴對緩慢型心律失常家兔模型心電圖時相性變化的影響

3.1.1 出現(xiàn)二度房室傳導(dǎo)阻滯(5∶4傳導(dǎo)阻滯)的時間

表1結(jié)果顯示:針刺治療組、參附注射液組與模型對照組相比，出現(xiàn)二度房室傳導(dǎo)阻滯(5∶4傳導(dǎo)阻滯)的時間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);針刺預(yù)防組與模型對照組比較，出現(xiàn)二度房室傳導(dǎo)阻滯(5∶4傳導(dǎo)阻滯)的時間延長，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);針刺治療組與參附注射液組相比較，出現(xiàn)二度房室傳導(dǎo)阻滯(5∶4傳導(dǎo)阻滯)的時間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表1 各組出現(xiàn)二度房室傳導(dǎo)阻滯(5∶4傳導(dǎo)阻滯)的時間比較(±s，n=8)

表1 各組出現(xiàn)二度房室傳導(dǎo)阻滯(5∶4傳導(dǎo)阻滯)的時間比較(±s，n=8)

注:與模型對照組比較，★P<0.05。

模型對照組 針刺預(yù)防組 針刺治療組 參附注射液組出現(xiàn)二度AVB(5∶4)的時間(s)1035±42.61 1432±51.55★1073±44.81 1064±36.15

3.1.2 恢復(fù)到一度房室傳導(dǎo)阻滯的時間

表2結(jié)果顯示:針刺治療組、參附注射液組與模型對照組相比較，恢復(fù)到一度房室傳導(dǎo)阻滯的時間縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);針刺預(yù)防組與模型對照組比較，恢復(fù)到一度房室傳導(dǎo)阻滯的時間縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);針刺治療組與參附注射液組相比較，恢復(fù)到一度房室傳導(dǎo)阻滯的時間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表2 各組恢復(fù)到一度房室傳導(dǎo)阻滯的時間比較(±s)

表2 各組恢復(fù)到一度房室傳導(dǎo)阻滯的時間比較(±s)

注:與模型對照組比較，★P<0.05，△P<0.01。

模型對照組 針刺預(yù)防組 針刺治療組 參附注射液組恢復(fù)一度AVB的時間(s) 403±16.18 186±11.32△ 279±21.60★ 293±22.03★

3.1.3 恢復(fù)到大致正常心率的時間

表3結(jié)果顯示:針刺治療組、參附注射液組與模型對照組相比較，恢復(fù)到大致正常心率的時間縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);針刺預(yù)防組與模型對照組比較，恢復(fù)到大致正常心率的時間縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);針刺預(yù)防組、針刺治療組與參附注射液組相比較，恢復(fù)到大致正常心率的時間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表3 各組恢復(fù)到大致正常心率的時間比較(±s，n=8)

表3 各組恢復(fù)到大致正常心率的時間比較(±s，n=8)

注:與模型對照組比較，★P<0.05，△P<0.01。

模型對照組 針刺預(yù)防組 針刺治療組 參附注射液組恢復(fù)大致正常心律的時間(s) 288±14.67 165±9.75△ 186±14.43★ 199±18.87★

3.2 針刺家兔內(nèi)關(guān)穴對緩慢型心律失常家兔模型心肌組織Na+－K+－ATP酶活性的影響

結(jié)果顯示，各組與空白組相比，心肌組織Na+－K+－ATP酶活性降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);針刺預(yù)防組、針刺治療組、參附注射液組與模型對照組相比較，心肌組織Na+－K+－ATP酶活性提高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);針刺預(yù)防組與針刺治療組、參附注射液組相比較，心肌組織Na+－K+－ATP酶活性提高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表4 各組心肌組織Na+－K+－ATP酶活性的比較(±s)

表4 各組心肌組織Na+－K+－ATP酶活性的比較(±s)

注:與空白對照組比較，★P<0.05;與模型對照組比較，☆P<0.05;與針刺治療組比較，※P<0.05。

組別 n Na+－K+－ATP酶(umolPi/mg protein/h)32.11±5.36模型對照組 8 9.15±1.47★針刺預(yù)防組 8 25.25±4.12★☆※針刺治療組 8 17.58±1.52★☆參附注射液組 8 19.08±4.65空白對照組8★☆

4 討論

針刺治療快速型心律失常，療效已獲肯定。本實驗二度房室傳導(dǎo)阻滯(5∶4傳導(dǎo)阻滯)的出現(xiàn)時間:針刺預(yù)防組與模型組比較，出現(xiàn)的時間延長，說明針刺內(nèi)關(guān)穴可改善心肌細胞傳導(dǎo)性，進而延緩房室傳導(dǎo)阻滯的出現(xiàn)時間，對房室傳導(dǎo)阻滯有防治作用。恢復(fù)到一度房室傳導(dǎo)阻滯的時間:針刺預(yù)防組、針刺治療組與模型組相比較，恢復(fù)到一度房室傳導(dǎo)阻滯的時間縮短，提示針刺內(nèi)關(guān)穴能夠提高心肌細胞傳導(dǎo)速度，進而縮短房室傳導(dǎo)阻滯的恢復(fù)時間，對房室傳導(dǎo)阻滯有治療作用。恢復(fù)到大致正常心率的時間:針刺預(yù)防組、針刺治療組與模型組比較，恢復(fù)到大致正常心率的時間顯著縮短，提示針刺內(nèi)關(guān)穴能夠持續(xù)改善心肌細胞傳導(dǎo)速度，縮短房室傳導(dǎo)阻滯的恢復(fù)時間，對房室傳導(dǎo)阻滯有治療作用。針刺治療組與參附注射液治療組相比無明顯差異，提示在本時間段兩組的治療作用相近。

Na+－K+－ATP酶是細胞膜上普遍存在的一種離子驅(qū)動泵，在水解ATP的同時，能對抗細胞膜兩側(cè)電－化學(xué)梯度，維持膜內(nèi)外Na+、K+的濃度差，并參與機體的多種生理活動［3］。心肌細胞膜內(nèi)外離子的不均勻分布，是心肌細胞的生物電現(xiàn)象的產(chǎn)生的基礎(chǔ)，從而影響心肌細胞傳導(dǎo)性，可能是緩慢性心律失常發(fā)生的重要原因。Na+－K+－ATP酶的抗緩慢心律失常作用可能與調(diào)節(jié)心肌細胞膜內(nèi)外Na+、K+分布，進而影響細胞內(nèi)Ca2+水平，提高NaATP通道、KATP通道活性有關(guān)，延長動作電位時程，維持心肌細胞膜及細胞內(nèi)鈣鎂的穩(wěn)態(tài)有關(guān)。另外，Na+－K+－ATP酶參與心肌細胞能量代謝，可改善房室傳導(dǎo)阻滯造成的心肌缺血、缺氧的代謝變化，有助于修復(fù)傳導(dǎo)纖維的損傷。

本實驗通過觀察緩慢性心律失常家兔心肌組織Na+－K+－ATP酶活性發(fā)現(xiàn):模型組與空白組相比較，心肌組織Na+－K+－ATP酶活性明顯降低，提示家兔緩慢性心律失常模型復(fù)制成功;針刺預(yù)防組、針刺治療組、參附注射液治療組與空白組相比，心肌組織Na+－K+－ATP酶活性降低，表明針刺內(nèi)關(guān)穴尚未完全恢復(fù)緩慢性心律失常家兔心肌組織Na+－K+－ATP酶活性。針刺預(yù)防組、針刺治療組、參附注射液治療組與模型組相比較，心肌組織Na+－K+－ATP酶活性明顯提高，表明針刺內(nèi)關(guān)穴能夠提高緩慢性心律失常家兔心肌組織Na+－K+－ATP酶活性，促進家兔緩慢性心律失常模型心肌細胞膜兩側(cè)Na+、K+的轉(zhuǎn)運，提高Na－ATP通道、K－ATP通道活性，延長動作電位時程，改善心肌細胞傳導(dǎo)性，從而具有預(yù)防和治療緩慢性心律失常的作用。由此可見，針刺家兔內(nèi)關(guān)穴防治緩慢性心律失常療效確切，而提高心肌組織的Na+－K+－ATP酶活性可能是其治療緩慢性心律失常的機制之一。

［1］ 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2003.

［2］ 林文注.實驗針灸學(xué)［M］.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1994:274，142，215.

［3］ Schemer－Bobis G.The sodium pump.Its molecular proper－ties and mechanics of ion transport［J］.Eur J Biochem，2002，269(10):2424－2433.