長春瑞濱致肝損害的實驗研究*

葉冬梅，韋海明，李 徽

(廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院，廣西 南寧 530021)

長春瑞濱是臨床上常用的廣譜抗癌藥物，為肺癌、乳腺癌及卵巢癌等的化療方案中主要組成成分，有文獻指出骨髓抑制及神經(jīng)系統(tǒng)毒性為其主要不良反應[1]，而肝臟損害的發(fā)生率和嚴重程度在不同的文獻報道中有較大差異[2-3]，尚無嚴格的研究報告。對于應用聯(lián)合化療方案的患者，出現(xiàn)肝損害時不能確定主要是由哪一種藥物引起，更換治療方案時選擇哪一種藥物組合可最大程度降低肝毒性也無文獻依據(jù)。本研究主要通過測定給藥后小鼠血清生化指標、肝組織過氧化及抗氧化指標，檢查肝組織病理，探討長春瑞濱引起肝損害的時間和對肝臟損害的程度，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市醫(yī)療儀器廠)；Baujahr 2000型低溫離心機(上海博星基因芯片有限公司)；8430型紫外-可見分光光度計（美國惠普）。昆明種雄性小鼠，體重(20±2)g，廣西醫(yī)科大學實驗動物中心提供，許可證號為SYKG桂2003-0005。長春瑞濱注射液(江蘇豪森制藥有限公司，批號為20090101)；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD）、還原型谷胱甘肽(GSH)試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供（批號為20091026）。

1.2 動物分組與模型建立

取健康昆明種雄性小鼠50只，10只設為正常對照組(K組)，靜脈注射生理鹽水0.2 mL；40只作為試驗組，尾靜脈注射0.56 g/L長春瑞濱注射液0.2 mL（按臨床常用劑量25 mg/m2換算）。對照組于給藥第3天取標本；試驗組隨機均分為A，B，C，D組，每組分別于給藥第3，7，11，14天時取血和肝組織進行指標檢測（取標本前1天禁食）。

1.3 觀察指標檢測

從小鼠眼眶采血，以3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，分離血清檢測直接膽紅素（DBIL）、堿性磷酸酶(ALP)、天門冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)。取小鼠肝組織0.2 g，加4℃生理鹽水在冰浴下制成10%(W/W)肝組織勻漿，將勻漿在4℃離心10 min（4 000 r/min）,取上清液，以考馬斯亮藍法檢測總蛋白含量，按試劑盒方法測定肝組織勻漿MDA、GSH含量和SOD活性。取一小塊同一部位的肝組織，用10%甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE染色，置電子顯微鏡下觀察。

1.4 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 血清生物化學指標

結(jié)果見表1。

表1 血清生化指標檢測結(jié)果(X ± s，U/L)

2.2 肝組織氧化及抗氧化指標

結(jié)果見表2。

表2 肝組織氧化及抗氧化指標(±s)

表2 肝組織氧化及抗氧化指標(±s)

組別K組(n=10)A組(n=10)B組(n=10)C組(n=10)D組(n=10)MDA(nmol/mg)124.98±10.14 213.72±8.03▲249.93±13.13▲246.15±15.31▲216.51±14.81▲GSH(mg/g)53.95±1.76 41.50±5.42△40.46±3.73△36.00±4.55▲34.76±5.25▲SOD(U/mg)66.43±4.63 60.59±4.25 60.53±5.31 62.26±7.44 63.88±3.13

表3 病理學檢查結(jié)果

2.3 肝臟組織病理學檢查

試驗組動物在給藥第3天即出現(xiàn)肝細胞病理改變，普遍表現(xiàn)為肝細胞脂肪變性。其中50.00%為中等到大量肝細胞脂肪變性；20.00%出現(xiàn)肝細胞壞死，以點狀壞死多見，周圍有炎性細胞；12.50%出現(xiàn)肝細胞瘀膽。結(jié)果見表3。小鼠肝臟組織病理切片(10×10)顯示，對照組肝小葉結(jié)構(gòu)、肝索、肝竇清晰；試驗組肝小葉彌漫性脂肪變性，肝細胞點狀壞死，周圍有炎性細胞，肝小葉結(jié)構(gòu)不清，肝索、肝竇不能分辨，肝細胞瘀膽(圖略)。

3 討論

一般認為，長春瑞濱的主要不良反應為血液學毒性和神經(jīng)毒性[1]，肝臟毒性很少被提及，臨床上對長春瑞濱的肝臟損傷作用關(guān)注也較少。本研究顯示，試驗組動物在給藥第3天即出現(xiàn)血清生化指標與肝臟組織病理改變，說明無藥物防護情況下，臨床劑量的長春瑞濱在用藥第3天即可能導致肝細胞損傷，應引起臨床重視。

本研究發(fā)現(xiàn)，試驗組動物在給藥第3天肝組織脂質(zhì)過氧化物MDA較對照組明顯升高，抗氧化成分GSH則明顯降低，且一直延續(xù)至實驗結(jié)束。這符合藥物誘導肝臟損傷的氧化應激反應機制，即藥物誘導的肝臟損傷與藥物的代謝異常有密切關(guān)系。藥物本身含有的及其經(jīng)CYP450酶系代謝產(chǎn)生的自由基、親電子基、氧基等有害活性物質(zhì)，通常與GSH結(jié)合而解毒，并不產(chǎn)生肝損傷，而某些原因?qū)е赂谓M織抗氧化防御體系（GSH等）功能下降時，可引發(fā)脂質(zhì)過氧化，肝組織脂質(zhì)過氧化鏈式反應的終產(chǎn)物之一MDA升高，導致肝臟氧化應激損傷，輕者為脂肪變性（具有可逆性），重者可發(fā)生中毒性肝細胞壞死[4-5]。

鑒于氧化應激反應在化學治療性肝損傷的作用，臨床使用長春瑞濱治療期間，應及早應用抗氧化劑，通過其與過氧化物及自由基結(jié)合，對抗氧化劑對巰基的破壞，保護細胞膜中含巰基的蛋白質(zhì)和含巰基的酶不被破壞，從而減輕化學治療對肝臟的毒副作用，保證腫瘤治療順利進行。

[1]孫 燕.抗腫瘤藥物手冊[M].北京：北京大學醫(yī)學出版社，2007:174-176.

[2]藍玉宏,魏 巍.長春瑞濱聯(lián)合順鉑治療晚期乳腺癌的療效及毒副反應觀察[J].現(xiàn)代預防醫(yī)學,2007,34(4):879-881.

[3]周寧寧,滕小玉,姜文奇.吉西他濱聯(lián)合長春瑞濱治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌34例的療效和毒副作用[J].癌癥,2007,26(12):1 373-1 376.

[4]李欽民，韓 真.藥物性肝病發(fā)病機制的研究進展[J].實用肝臟病雜志，2005,8(2):124-126.

[5]Curtis DK.卡薩瑞特·道爾毒理學：毒物的基礎(chǔ)科學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2005:419-420.