HPLC法同時(shí)測(cè)定麥冬藥材中麥冬皂苷Ra和慈溪麥冬皂苷A的含量Δ

胥秀英，鄭一敏，傅善權(quán)，韓玉梅，楊艷紅（重慶理工大學(xué)藥學(xué)與生物工程學(xué)院，重慶市 400050）

HPLC法同時(shí)測(cè)定麥冬藥材中麥冬皂苷Ra和慈溪麥冬皂苷A的含量Δ

胥秀英＊，鄭一敏，傅善權(quán)，韓玉梅，楊艷紅（重慶理工大學(xué)藥學(xué)與生物工程學(xué)院，重慶市 400050）

目的：建立以高效液相色譜法測(cè)定麥冬藥材中麥冬皂苷Ra和慈溪麥冬皂苷A含量的方法。方法：色譜柱為Waters C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-水（35∶65），流速為1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長為208 nm，柱溫為室溫。結(jié)果：麥冬皂苷Ra、慈溪麥冬皂苷A的進(jìn)樣量分別在1.88～9.40 μg（r＝0.999 6）、1.96～9.80 μg（r＝0.999 5）范圍內(nèi)與各自峰面積積分值呈良好線性關(guān)系；平均回收率分別為100.2%、99.7%，RSD均為1.7%（n＝6）。結(jié)論：本方法簡便、快速、準(zhǔn)確，可用于麥冬藥材的質(zhì)量控制。

麥冬；高效液相色譜法；麥冬皂苷Ra；慈溪麥冬皂苷A；含量測(cè)定

Δ重慶市科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目（CSTC2008AC5029，CSTC2008 AB5116）

＊研究員。研究方向：天然藥物的研發(fā)。電話：023-68662335。E-mail：yxx651116@cqut.edu.cn

麥冬為百合科沿階草屬植物麥冬Ophiopogon japonicus（Thunb.）Ker-Gaw1.的肉質(zhì)塊莖[1，2]，主產(chǎn)于浙江、四川等地，為常用中藥品種，用于治療冠心病、心絞痛等癥[3]。其主要化學(xué)成分有甾體皂苷、多糖、高異黃酮類、氨基酸等，其中麥冬甾體皂苷作為主要有效成分之一[4]，具有明顯的抗缺氧、抗誘變及抑制腫瘤等活性。姚令文等[5]采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（HPLC-ELSD）法測(cè)定了川麥冬中麥冬皂苷D’的含量，但至今未見同時(shí)測(cè)定麥冬藥材中麥冬皂苷Ra和慈溪麥冬皂苷A含量的報(bào)道。因此，筆者采用HPLC法建立了同時(shí)測(cè)定麥冬藥材中麥冬皂苷Ra和慈溪麥冬皂苷A含量的方法，該方法簡便、快速、準(zhǔn)確，可用于麥冬藥材的質(zhì)量控制。

1 儀器與材料

1.1 儀器

HPLC儀，包括1525泵、2487雙波長檢測(cè)器、Breeze工作站（美國Waters公司）。

1.2 試藥

乙腈為色譜純，其它試劑均為市售分析純；麥冬皂苷Ra、慈溪麥冬皂苷A標(biāo)準(zhǔn)品（本實(shí)驗(yàn)室制備，批號(hào)分別為080602、080721，經(jīng)HPLC面積歸一化法測(cè)定含量分別為98.4%、100%）；麥冬藥材購于重慶市藥材市場(chǎng)，經(jīng)本院傅善權(quán)副主任藥師鑒定為麥冬[O.japonicus（Thunb.）Ker-Gaw1.]。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[6]

色譜柱：Waters C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（35∶65）；流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長：208 nm；柱溫：室溫。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.標(biāo)準(zhǔn)品；B.供試品；1.慈溪麥冬皂苷A；2.麥冬皂苷RaFig 1 HPLC chromatogramsA.reference substance；B.test sample；1.cixi-ophiopogon A；2.ophiopogon Ra

2.2 溶液的制備[7]

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液 精密稱取麥冬皂苷Ra和慈溪麥冬皂苷A標(biāo)準(zhǔn)品，制成麥冬皂苷Ra濃度為0.94 g·L-1和慈溪麥冬皂苷A濃度為0.98 g·L-1的混合甲醇溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。再分別取該貯備液適量，用甲醇稀釋制成含麥冬皂苷Ra分別為0.094、0.188、0.282、0.376、0.470 g·L-1和慈溪麥冬皂苷A分別為0.098、0.196、0.294、0.392、0.490 g·L-1的混合液，0.45 μm濾膜濾過，備用。

2.2.2 供試品溶液 精密稱取經(jīng)干燥粉碎過40目篩的麥冬藥材10 g，分別加入藥材量10、8、7倍的水于80～90℃煎煮3次，收集濾液，冷后過預(yù)先處理好的大孔吸附樹脂柱[7]，再用80%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至干，稱量得提取物。取該提取物5.0 mg，用甲醇溶解制成5.0 mg·mL-1的溶液，0.45 μm濾膜濾過，備用。

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密取“2.2.1”項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)品混合液20 μL進(jìn)樣，以色譜峰峰面積（Y）對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度（X）進(jìn)行線性回歸。結(jié)果，麥冬皂苷Ra的線性方程為Y＝77 247X+4 730（r＝0.999 6），線性范圍為1.88～9.40 μg；慈溪麥冬皂苷A的線性方程為Y＝75 740X+7 273.7（r＝0.999 5），線性范圍為1.96～9.80 μg。

2.4 最低檢測(cè)限的測(cè)定

在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下，按信噪比＞3時(shí)測(cè)定最低檢測(cè)限。結(jié)果，麥冬皂苷Ra和慈溪麥冬皂苷A的最低檢測(cè)限分別為6、10 ng。

2.5 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)品溶液（含麥冬皂苷Ra和慈溪麥冬皂苷A分別為0.282 g·L-1和0.294 g·L-1），分別在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣10 μL，共進(jìn)樣6次。結(jié)果，麥冬皂苷Ra和慈溪麥冬皂苷A峰面積的RSD分別為1.6%和1.9%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液，分別在0、2、4、8、16 h各進(jìn)樣10 μL，照上述方法測(cè)定。結(jié)果，麥冬皂苷Ra和慈溪麥冬皂苷A峰面積的RSD分別為1.4%和1.6%，表明供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批麥冬藥材樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，照上述方法測(cè)定。結(jié)果，麥冬皂苷Ra和慈溪麥冬皂苷A含量的RSD分別為2.5%和2.2%，表明方法重復(fù)性較好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取同一批麥冬藥材6份，分別加入麥冬皂苷Ra和慈溪麥冬皂苷A標(biāo)準(zhǔn)品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣10 μL，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 1Results of recovery test（n＝6）

2.9 樣品含量測(cè)定

取3批麥冬藥材樣品，分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣10 μL（3次平行），測(cè)定峰面積，由線性方程計(jì)算3批麥冬藥材中麥冬皂苷Ra和慈溪麥冬皂苷A的含量，結(jié)果見表2。

表2 麥冬藥材中麥冬皂苷Ra和慈溪麥冬皂苷A含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）Tab 2 Content determination of ophiopogon Ra and cixiophiopogonAin O.japonicus（n＝3）

3 討論

本試驗(yàn)曾采用超聲、回流提取樣品直接進(jìn)樣，但由于多糖等雜質(zhì)較多，導(dǎo)致色譜干擾較大；而采用水提取大孔樹脂吸附，可以除去大量非皂苷類雜質(zhì)，而且成本低，無污染物排出，是一種理想的皂苷類提取方法。

麥冬為2005年版《中國藥典》（一部）收載的品種，原標(biāo)準(zhǔn)中只有顯色鑒別反應(yīng)，缺乏有效成分定性和定量檢測(cè)。本文重點(diǎn)對(duì)麥冬藥材中2種有效成分進(jìn)行了定量測(cè)定，可為麥冬藥材的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

[1]肖培根.新編中藥志（第2卷）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002：481.

[2]陽美平，吳 皓，尹 蓮，等.麥冬皂苷和多糖類成分的研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2008，26（10）：2 170.

[3]王建中，陳小兵，王鋒鵬，等.川麥冬皂苷類化學(xué)成分的研究[J].有機(jī)化學(xué)，2008，28（9）：1 620.

[4]莫正紀(jì)，江光池，冉 蘭，等.麥冬有效成分的藥理研究[J].華西藥學(xué)雜志，1991，6（3）：13.

[5]姚令文，王鋼力，王 峰，等.HPLC-ELSD法測(cè)定川麥冬中麥冬皂苷D’的含量[J].中草藥，2004，35（12）：1 419.

[6]關(guān)穎麗，劉建宇，尹 虹.D101型大孔吸附樹脂在分離純化三萜皂苷方面的應(yīng)用[J].中國藥房，2008，19（30）：2 399.

[7]胥秀英，鄭一敏，傅善權(quán)，等.麥冬須根與麥冬塊根中麥冬皂苷Ra和慈溪麥冬皂苷A含量比較[J].中國中藥雜志，2009，34（19）：2 531.

Content Determination of Ophiopogon Ra and Cixi-ophiopogon A fromOphiopogon japonicusby HPLC

XU Xiu-ying，ZHENG Yi-min，F(xiàn)U Shan-quan，HAN Yu-mei，YANG Yan-hong（College of Pharmaceutical and Biological Engineering，Chongqing University of Technology，Chongqing 400050，China）

OBJECTIVE：To determine the contents of ophiopogon Ra and cixi-ophiopogon A fromOphiopogon japonicusby HPLC.METHODS：The determination was performed on Waters C18（150 mm×4.6 mm，5μm）column with mobile phase consisted of acetonitrile-water（35 ∶65）at flow rate of 1.0 mL·min-1.The detection wavelength was set at 208 nm and the column temperature was room temperature.RESULTS：The linear range of ophiopogon Ra was 1.88～9.40 μg（r＝0.999 6）with an average recovery of 100.2%（RSD＝1.7%，n＝6）.The liner range of cixi-ophiopogon A was 1.96～9.80 μg（r＝0.999 5）with an average recovery of 99.7%（RSD＝1.7%，n＝6）.CONCLUSION：The method is simple，rapid and accurate for the quality control ofO.japonicus.

Ophiopogon japonicus；HPLC；Ophiopogon Ra；Cixi-ophiopogon A；Content determination

R284.1；R927.2

A

1001-0408（2010）39-3704-02

2009-11-02

2010-03-25）