癌復(fù)康膠囊Ⅱ號質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

孔俏玲，李瑞明（1.武漢大學(xué)，武漢市 40072；2.廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院，廣州市 510520；.中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部，廣州市 510080）

癌復(fù)康膠囊Ⅱ號質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

孔俏玲1，2＊，李瑞明3（1.武漢大學(xué)，武漢市 430072；2.廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院，廣州市 510520；3.中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部，廣州市 510080）

目的：建立癌復(fù)康膠囊Ⅱ號的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜（TLC）法對方中葛根、西洋參進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法對葛根素進(jìn)行含量測定。結(jié)果：TLC斑點(diǎn)清晰、分離度好，陰性對照無干擾；葛根素檢測濃度在50.0～750.0 μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系（r＝0.999 9），平均回收率為99.51%，RSD＝0.81%（n＝6）。結(jié)論：定性定量方法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，精密度好，所建標(biāo)準(zhǔn)可用于該制劑的質(zhì)量控制。

癌復(fù)康膠囊Ⅱ號；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；葛根素；薄層色譜法；高效液相色譜法

癌復(fù)康膠囊Ⅱ號是由當(dāng)歸、升麻、葛根、苦參、西洋參等15味藥構(gòu)成，具有獨(dú)特療效的醫(yī)院制劑。臨床研究發(fā)現(xiàn)，癌復(fù)康膠囊Ⅱ號具有活血抗癌的功效，可以提高人體機(jī)能，加快術(shù)后康復(fù)，減輕因放、化療帶來的副作用，在癌癥的輔助治療及術(shù)后康復(fù)等方面有滿意的臨床效果。筆者對本品進(jìn)行新的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定，增加葛根、西洋參2味藥材的薄層色譜（TLC）鑒別。同時，由于葛根為本品的主要藥味之一，葛根素（Puerarin）為葛根的主要成分之一[1]，因此，本試驗(yàn)采用高效液相色譜（HPLC）法測定癌復(fù)康膠囊Ⅱ號中葛根素含量，以有效控制產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，提高臨床療效。

1 儀器與材料

1.1 儀器

L114型萬分之一電子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）；CQ-25型超聲波儀（上海超聲波儀器廠）；硅膠G、H薄層板（青島海洋化工廠）；2100型紫外-可見分光光度計及HPLC儀，包括SPD-10Avp紫外檢測器、LC-10ATvp泵、N-2000雙管道色譜數(shù)據(jù)工作站（日本島津公司）。

1.2 試藥

葛根素對照品，葛根、西洋參對照藥材（中國藥品生物制品檢定所，批號分別為0125-200207、1175-200501、120997-200508）；癌復(fù)康膠囊Ⅱ號樣品及陰性樣品均由天津中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院制劑室自制；水為2次重蒸水，其余試劑均為分析純。

2 定性鑒別

2.1 葛根的TLC鑒別[2，3]

取本品內(nèi)容物粉末6 g，加甲醇30 mL，超聲1 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液；另取葛根對照藥材粉末6 g，同法制成對照藥材溶液；再取缺葛根陰性樣品粉末6 g，同法制成陰性對照溶液。照TLC法[2]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各6 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，使成條狀，以氯仿-甲醇-水（5∶1∶0.1）為展開劑，展開，展距為13 cm，取出，晾干，紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光條斑；陰性對照無干擾。葛根的TLC見圖1。

2.2 西洋參的TLC鑒別[2]

取本品內(nèi)容物粉末3 g，加甲醇25 mL，加熱回流1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，乙醚振搖提取2次，每次10 mL，水層再用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次15 mL，合并飽和正丁醇溶液，用水洗滌2次，每次10 mL，再用稀氨水10 mL洗滌1次，棄去水層，飽和正丁醇溶液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液；另取西洋參對照藥材粉末1 g，同法制成對照藥材溶液；再取缺西洋參陰性樣品粉末3 g，同法制成陰性對照溶液。照TLC法[2]試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、陰性對照溶液各4 μL，對照藥材溶液2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，使成條狀，以氯仿-甲醇-水（69∶27∶4）為展開劑，展開，展距為12 cm，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)清晰，紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)；陰性對照無干擾。西洋參的TLC見圖2。

圖1 葛根的TLC1.供試品；2.葛根對照藥材；3.陰性對照Fig 1 TLC of Pueraria lobata1.test sample；2.Puerariae Lobatae Radix；3.negative control

3 葛根素的含量測定

3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Thermo CTO-10A（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（25∶75）；檢測波長：250 nm；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：30 ℃；柱壓：106 Pa；靈敏度：0.01 AUFS。理論板數(shù)按葛根素色譜峰計算為5 340，其余組分的色譜峰能達(dá)到基線分離，分離度為1.9。供試品與葛根素對照品在相同時間點(diǎn)出現(xiàn)同一色譜峰，陰性對照未出現(xiàn)色譜峰。色譜見圖3。

3.2 溶液的制備[4]

3.2.1 對照品溶液的制備 準(zhǔn)確稱取葛根素對照品3.1 mg，置于100 mL量瓶中，加50%甲醇水溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，得0.031 mg·mL-1的葛根素對照品溶液。

圖2 西洋參的TLC1.供試品；2.西洋參對照藥材；3.陰性對照Fig 2 TLC of Panax quinquefolium1.test sample；2.Panacis Quinquefolii Radix control；3.negative control

圖3 高效液相色譜圖A.供試品；B.葛根素對照品；C.陰性對照Fig 3HPLCA.test sample；B.Puerarin control；C.negative control

3.2.2 供試品溶液的制備 取樣品5粒，傾出內(nèi)容物（約相當(dāng)于含葛根素0.740 6 mg），置于50 mL量瓶中，加50%甲醇水溶液近刻度，超聲處理1 h，取出，放冷，再加50%甲醇水溶液至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

3.2.3 陰性對照溶液的制備 取本品缺葛根的陰性樣品粉末適量（約2 g），按“3.2.2”項(xiàng)下方法同法制成陰性對照溶液。

3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密吸取0.031 mg·mL-1的葛根素對照品溶液1、3、6、9、12、15 μL，按上述色譜條件進(jìn)樣測定。以葛根素檢測濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y＝4 118.9X+404.12（r＝0.999 9）。結(jié)果表明，葛根素檢測濃度在50.0～750.0 μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

3.4 精密度試驗(yàn)

取同一批次（批號：050302）供試品溶液適量，按上述色譜條件進(jìn)樣測定6次，記錄色譜圖。結(jié)果，RSD＝2.18%（n＝6），表明本方法精密度較好。

3.5 重復(fù)性試驗(yàn)

分別取同一批（批號：050302）樣品6份，按“3.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測定，記錄色譜圖。結(jié)果，RSD＝1.74%（n＝6），表明方法重復(fù)性較好。

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液（批號：050302），分別在0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣，連續(xù)進(jìn)樣6次，照上述色譜條件測定。結(jié)果，RSD＝1.17%（n＝6），表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.7 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取樣品（批號：050302）適量（共6份），分別置于50 mL量瓶中，各加0.03 mg·mL-1的葛根素對照品溶液10 mL，搖勻后再各加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，超聲1 h，再加50%甲醇至刻度，濾過，取續(xù)濾液，每份精密量取10μL進(jìn)樣測定，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test（n＝6）

3.8 樣品含量測定

取5個批號的癌復(fù)康膠囊Ⅱ號，按“3.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測定，按外標(biāo)法計算葛根素含量。結(jié) 果 ，5批（批 號 ：0503022、0503023、0503024、0503025、0503026）樣品的含量分別為0.441 2、0.442 2、0.434 1、0.440 9、0.437 6 mg·mL-1，平均含量為0.439 2 mg·mL-1，RSD＝1.42%（n＝6）。

4 討論

葛根的TLC鑒別，把展開劑氯仿-甲醇-水的比例7∶2.5∶0.25[2]改為5∶1∶0.1，相應(yīng)地降低了展開劑的極性，從而降低斑點(diǎn)隨展開劑移動的速度，達(dá)到更好的分離效果。

取0.05 mg·mL-1的葛根素對照品溶液進(jìn)行紫外掃描。結(jié)果，葛根素在250 nm和306 nm波長處各有一個吸收峰。查閱資料可知，雖然選擇306 nm作為檢測波長時色譜圖中的組分峰會減少，色譜圖較為簡單，但選擇250 nm作為檢測波長，靈敏度最高，能有效檢測出葛根素特征峰，故確定選擇250 nm作為檢測波長。

[2，5，6]，分別用 95%、30%、50%、25%的甲醇，超聲提?。?0、30、60 min）樣品。結(jié)果，以50%甲醇超聲提取60 min的供試品溶液在甲醇-水（25∶75）為流動相的條件下，色譜效果最佳。較文獻(xiàn)[3]介紹的提取有效成分效率更高的熱回流法提取操作簡單、損失率低、主峰分離好。

根據(jù)2005年版《中國藥典》（一部）中HPLC法測定葛根素含量的方法，選擇甲醇-水（25∶75）為流動相。結(jié)果，葛根素的分離情況很好，保留時間較短，約為13 min；其余組分亦能在較短的時間內(nèi)出峰，從而縮短了分析時間。

綜上，本試驗(yàn)制定的方法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，精密度好，所建標(biāo)準(zhǔn)可用于該制劑的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

[1]方建國，潘學(xué)暉，王文清，等.高效液相色譜法測定脈君安膠囊葛根素與氫氯噻嗪含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2008，27（5）：592.

[2]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄31、234、附錄313、87.

[3]彭菊艷，王俊儒，張義英，等.葛根有效成分的含量測定與提取工藝優(yōu)化[J].陜西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，51（3）：52.

[4]劉同祥，王 勇.HPLC測定消渴膠囊中葛根素的含量[J].云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2009，32（3）：33.

[5]鄭國華，徐 晶，陶君彥，等.兒瀉停膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中醫(yī)藥學(xué)刊，2005，23（7）：1 318.

[6]方繼輝，朱炳輝，鄒玉婷，等.復(fù)方葛根合劑及葛根中葛根素含量高效液相色譜分析[J].中國藥學(xué)雜志，2001，36（5）：336.

Study on Quality Standard of AifukangⅡCapsules

KONG Qiao-ling（Wuhan University，Wuhan 430072，China）
KONG Qiao-ling（Guangdong Food and Drug Vocational College，Guangzhou 510520，China）
LI Rui-ming（Dept.of Pharmacy，The First Affiliated Hospital of Sun Yet-sen University，Guangzhou 510080，China）

OBJECTIVE：To establish the quality standard for AifukangⅡcapsules.METHODS：TLC was used for the qualitative identification ofPueraria lobataandPanax quinquefolium.HPLC was used to determine the content of puerarin.RESULTS：TLC spots were clear and well-separated without negative interference.The linear range of puerarin was 50.0～750.0 μg·mL-1（r＝0.999 9）with an average recovery of 99.51%（RSD＝0.81%，n＝6）.CONCLUSION：The method is simple，accurate and reliable with good precision.It can be used for the quality control of AifukangⅡcapsules.

AifukangⅡ capsules；Quality standard；Puerarin；TLC；HPLC

R283.65；R927.1

A

1001-0408（2010）39-3724-03

2010-04-02

2010-08-30）